1、实验一 葡萄糖的一般杂质检查 一、目的要求 1.了解葡萄糖中一般杂质检查的目的和意义； 2.掌握氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属等一般杂质检查的基本原理、操作方法及杂质限量计算； 3.正确使用纳氏比色管。 二、实验操作 试药：葡萄糖 试剂：酚酞、氢氧化钠、氯化钴、重硌酸钾、硫酸铜、硝酸、硝酸银、氯化钠、氯化钡、 盐酸、硫酸、硫氰酸铵、 90%乙醇、无水乙醇、磺基水杨酸、硫代乙酰胺、硝酸铅 仪器：石蕊试纸 5 盒、滴瓶 5 个、量筒 50ml、 10ml 各 8 个，移液管 5ml、 2ml、 1ml 各8 只，烧杯 100ml 各 8 只、 石英比色皿 3 对 2.1 酸度 取本品 2.0克，加水
2、 20ml 溶解后，加酚酞指示液 3滴与氢氧化钠滴定液（ 0.02mol/L） 0.20ml，应显粉红色。 2.2 溶液的澄清度与颜色 取本品 5g，加热水溶解后，放冷，用水稀释至 10ml，溶液应澄清无色，如显浑浊，与 1 号浊度标准液（中国药典 2000 年二部附录 IX B）比较，不得更浓；如显色，与对照液取（比色用氯化钴液 3ml、比色用重硌酸钾液 3ml 与比色用硫酸铜 6ml，加水稀释 50ml） 1.0ml 加水稀释至 10ml 比较，不得更深。 2.3 氯化物 取 本品 0.6g，加水溶解使成 25ml（如显碱性，可滴加硝酸使遇石蕊试纸显中性反应），再加稀硝酸 10ml，溶液如
3、不澄清，滤过。置 50ml 纳氏比色管中，加水适量使成约 40ml，加硝酸银试液 1ml，用水稀释使成 50ml，摇匀，在暗处放置 5 分钟，如发生浑浊，与标准氯化钠溶液一定量制成的对照液【取标准氯化钠溶液（ 10 g Cl/ml） 6.0ml 置 50ml 纳氏比色管中，加稀硝酸 10ml，用水稀释使成约 40ml 后，加硝酸银试液 1ml，再加水适量使成约 40ml 后，加硝酸银试液 1ml，再加水适量使成 50ml，摇匀，再暗处放置 5 分钟】比较，不得更浓（ 0.01%）。 2.4 硫酸盐 取本品 2.0g，加水溶解使成 40ml（如显碱性，可滴加盐酸使遇石蕊试纸显中性反应）。溶液如不
4、澄清，滤过，置 50ml纳氏比色管中，加稀盐酸 2ml，加 25%氯化钡溶液 5ml，加水稀释使成 50ml，摇匀，放置 10分钟，如发生混浊，与对照标准液【取标准硫酸 钾 溶液（ 100 gSO4/ml） 2.0ml，置 50ml纳氏比色管中，加水稀释使成 40ml，加稀盐酸 2ml，加 25%氯化钡溶液 5ml，加水稀释使成50ml，摇匀，放置 10分钟】比较，不得更浓（ 0.01%）。 2.5 乙醇溶液的澄清度 取本品 1.0g，加 90%乙醇 30ml，置水浴上加热回流约 10 分钟，溶液应澄清。 2.6 亚硫酸盐与可溶性淀粉 取本品 1.0g，加水 10ml 溶解后，加碘试液 1 滴
5、，应即显黄色。 2.7 干燥失重 取本品，在 105干燥至恒重，减失重不得过9.5%。 2.8 铁盐 取本品 2.0g，加水 20ml 溶解后，加硝酸 3 滴，缓缓煮沸 5 分钟，放冷，加水稀释使成 45ml，加硫氰酸铵溶液（ 30100） 3ml，摇匀，如显色，与标准铁溶液 2.0ml 用同一方法制成对照液 比较，不得更深（ 0.001%）。 2.9 重金属 取 25ml 纳氏比色管两支，一管加标准铅溶液（ 10 g Pb /ml） 2.0ml，醋酸盐缓冲液（ pH3.5） 2ml，加水至 25ml；另一管取本品 4.0g，加水 23ml溶解，加醋酸盐缓冲液（ pH3.5） 2ml，各管分别
6、加硫代乙酰胺试液 2ml，摇匀，再放置 2 分钟，同置白纸上，自上向下透视，供试品显出的颜色与标准铅溶液比较，不得更深，含重金属不得超过百万分之五（ 5ppm）。 2.10 蛋白质 取本品 1.0g，加水 10ml溶解后，加磺基水杨酸溶液（ 1 5） 3ml，不得发生沉淀。 注解 1 葡糖溶解而淀粉和糊精等不溶。 2 存在可溶性淀粉时呈蓝色，存在亚硫酸盐时碘液褪色。 3 在 pH33.5 时 PbS沉淀较完全。 三、 注意事项： 1.平行操作原则：实验用具的选择、试剂与试液的量取方法及加入顺序、反应时间长短等应尽可能一致。 2.比色方法是将两管同置于白色背景上，从侧面或自上而下观察；比浊方法是
7、将两管同置于黑色背景上，从上向下垂直观察。 3.所用比色管刻度高低差异不应超过 2mm，使用过的比色管应及时清洗，注意不能用毛刷刷洗，可用铬酸洗液浸泡。 4.一般情况下可取 1 份供试品进行检查。如结果不符合规定或在限度边缘时，应对供试品和对照管各复检 2 份，方可判定 四 、思考题 1.氯化物、重金属及砷盐检查中的操作注意事项有哪些 ?比浊检查时为什么应将反应液稀释后再加沉淀剂 ? 2.如何正确选用各项实验中的用具及仪器 ?为什么称取样品时仅需采用托盘天平，而坩埚的称重需要用精密天平 ? 五 、原始记录及报告格式 （一）原始记录 1.氯化物等限度检查 检查项目 检测方法 现象观察 结果 结论
8、 氯化物 硫酸盐 铁盐 （二）实验报告 检品名称：批号：厂家： 检验目的：一般杂质（氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属、砷盐）的检查 检验结果 检查结论 1、氯化物 2、硫酸盐 3、铁盐 4、 附部分药典方法： 附录 A 氯化物检查法 除另有规定外，取各品种项下规定量的供试品，加水溶解使成 25ml(溶液如显碱性，可滴加硝酸使成中性 )，再加稀硝酸 10ml；溶液如不澄清，应滤过；置50ml 纳氏比色管中，加水使成约 40ml，摇匀 ,即得供试溶液。另取各药 品项下规定量的标准氯化钠溶液，置 50ml 纳氏比色管中，加稀硝酸 10ml，加水使成 40ml，摇匀，即得对照溶液。于供试溶液与对照溶液中，
9、分别加入硝酸银试液 1.0ml，用水稀释使成 50ml，摇匀 ,在暗处放置 5 分钟，同置黑色背景上，从比色管上方向下观察、比较，即得。 供试溶液如带颜色，除另有规定外，可取供试溶液两份，分置 50ml 纳氏比色管中，一份中加硝酸银试液 1.0ml，摇匀，放置 10 分钟，如显浑浊，可反复滤过，至滤液完全澄清，再加规定量的标准氯化钠溶液与水适量使成 50ml，摇匀 ,在暗处放置 5 分钟，作为对照溶液；另一份中加硝酸银试液 1.0ml 与水适量使成 50ml，摇匀，在暗处放置 5 分钟，按上述方法与对照溶液比较，即得。 标准氯化钠溶液的制备 称取氯化钠 0.165g，置 1000ml 量瓶中，
10、加水适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。 临用前，精密量取贮备液 10ml，置 100ml 量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得 (每 1ml 相当于 10 g 的 Cl)。 【附注】 用滤纸过滤时，滤 纸中如含有氯化物，可预先用含有硝酸的 水溶液洗净后使用。 附录 B 硫酸盐检查法 除另有规定外，取各药品项下规定量的供试品，加水溶解使成约 40ml(溶液如显碱性，可滴加盐酸使成中性 )；溶液如不澄清，应滤过；置 50ml 纳氏比色管中，加稀盐酸 2ml，摇匀，即得供试溶液。另取各药品项下规定量的标准硫酸钾溶液，置 50ml 纳氏比色管中，加水使成约 40ml，加稀盐酸 2ml，摇匀，即得
11、对照溶液。于供试溶液与对照溶液中，分别加入 25氯化钡溶液 5ml，用水稀释至50ml,充分摇匀，放置 10 分钟，同置黑 色背景上，从比色管上方向下观察、比较，即得。 供试溶液如带颜色，除另有规定外，可取供试溶液两份，分置 50ml 纳氏比色管中，一份中加 25氯化钡溶液 5ml，摇匀 ,放置 10 分钟，如显浑浊，可反复滤过，至滤液完全澄清，再加规定量的标准硫酸钾溶液与水适量使成 50ml，摇匀，放置 10 分钟，作为对照溶液；另一份中加 25氯化钡溶液 5ml 与水适量使成 50ml，摇匀 ,放置 10 分钟，按上述方法与对照溶液比较，即得。 标准硫酸钾溶液的制备 称取硫酸钾 0.181
12、g，置 1000ml 量瓶中，加水适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（ 每 1ml 相当于 100 g 的 SO4）。 附录 G 铁盐检查法 除另有规定外，取各药品项下规定量的供试品 ,加水溶解使成 25ml，移置50ml 纳氏比色管中，加稀盐酸 4ml 与过硫酸铵 50mg，用水稀释使成 35ml后，加30硫氰酸铵溶液 3ml，再加水适量稀释成 50ml, 摇匀；如显色，立即与标准铁溶液一定量制成的对照溶液（取各药品项下规定量的标准铁溶液，置 50ml 纳氏比色管中，加水使成 25ml,加稀盐酸 4ml 与过硫酸铵 50mg，用水稀释使成 35ml，加 30硫氰酸铵溶液 3ml,再加水适量稀
13、释成 50ml，摇匀）比较，即得。 如供试管与对照管色调不一致时，可分别移至分液漏斗中，各加正丁醇 20ml提取，俟分层后，将正丁醇层移置 50ml 纳氏比色管中，再用正丁醇稀释至 25ml，比较，即得。 标准铁溶液的制备 称取硫酸铁铵 FeNH4(SO4)2 12H2O 0.863g，置1000ml 量瓶中，加水溶解后，加硫酸 2.5ml，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。临用前，精密量取贮备液 10ml，置 100ml 量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得 (每 1ml 相当于 10 g 的 Fe)。 附录 H 重金属检 查法 重金属系指在实验条件下能与硫代乙酰胺或硫化钠作用显色的金属杂质。
14、 标准铅溶液的制备 称取硝酸铅 0.160g，置 1000ml 量瓶中 ,加硝酸 5ml 与水 50ml 溶解后，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。 临用前，精密量取贮备液 10ml，置 100ml 量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得（每 1ml 相当于 10 g 的 Pb）。 配制与贮存用的玻璃容器均不得含铅。 第一法 硫代乙酰胺法 除另有规定外，取 25ml 纳氏比色管两支，甲管中加标准铅溶液一定量与醋酸盐缓冲液（ pH3.5） 2ml 后，加水或各药品项下规定的溶剂稀释成 25ml，乙管中加入各药品项下规定的方法制成的供试液 25ml；若供试液带颜色，可在甲管中滴加少量的稀焦糖溶液或其它
15、无干扰的有色溶液 ,使之与乙管一致；再在甲乙两管中分别加硫代乙酰胺试液各 2ml，摇匀，放置 2 分钟， 同置白纸上，自上向下透视，乙管中显出的颜色与甲管比较，不得更深。 如在甲管中滴加稀焦糖溶液仍不能使颜色一致时，可取该药品项下规定的二倍量的供试品和试液，加水或该药品项下规定的溶剂使成 30ml，将溶液分成甲乙二等分，乙管中加水或该药品项下规定的溶剂稀释成 25ml；甲管中加入硫代乙酰胺试液 2ml，摇匀，放置 2 分钟，经滤膜 (孔径 3 m)滤过，然后甲管中加入标准铅溶液一定量 ,加水或该药品项下规定的溶剂使成 25ml；再分别在乙管中加硫代乙酰胺试液 2ml，甲管中加水 2ml，照上述
16、方法比较，即得。 供试品如含高铁盐影响重 金属检查时 ,可取该药品项下规定方法制成的供试品溶液，加抗坏血酸 0.5 1.0g，并在对照液中加入相同量的抗坏血酸，再照上述方法检查。 配制供试品溶液时，如使用的盐酸超过 1.0ml（或与盐酸 1.0ml 相当的稀盐酸），氨试液超过 2ml,或加入其他试剂进行处理者，除另有规定外，对照液中应取同样同量的试剂置瓷皿中蒸干后，加醋酸盐缓冲液（ pH3.5） 2ml 与水 15ml，微热溶解后，移置纳氏比色管中，加标准铅溶液一定量，再用水稀释成 25ml。 实验相关试液配制 酚酞指示液 ： 酚酞指示液 取酚酞 1g，加乙醇 100ml 使溶解，即得。 氢氧
17、化钠滴定液 （ 0.02mol/L）： 取 (1mol/L)氢氧化钠滴定液 2ml 稀释至 100ml。 硝酸银试液： 取硝酸银 1.75g，加水适量使溶解成 100ml，摇匀。 标准氯化钠溶液： 称取氯化钠 0.165g，置 1000ml 量瓶中，加水适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。临用前，精密量取贮备液 10ml，置 100ml 量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得 (每 1ml 相当于 10 g 的 Cl)。 稀硝酸 ： 稀盐酸 ： 取盐酸 23.4ml，加水稀释至 100ml，即得。 含 HCl 应为 9.5 -10.5。 25%氯化钡溶液 标准硫酸 钾 溶液 ： 称取硫酸钾
18、0.181g，置 1000ml 量瓶中，加水适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（每 1ml 相当于 100 g 的 SO4）。 碘试液 ： 取碘 13.0g,加碘化钾 36g 与水 50ml 溶解后，加盐酸 3 滴与水适量使成1000ml，摇匀，用垂熔玻璃滤器滤过。 取 50ml 加水稀释至 100ml。 硫氰酸铵溶液（ 30 100） ： 硫酸铁铵 标准铁溶液 ： 称取硫酸铁铵 FeNH4(SO4)2 12H2O 0.863g，置 1000ml量瓶中，加水溶解后，加硫酸 2.5ml，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。 临用前，精密量取贮备液 10ml，置 100ml 量瓶中，加水稀释至刻度，
19、摇匀，即得 (每1ml 相当于 10 g 的 Fe)。 硝酸铅 标准铅溶液 ： 称取硝酸铅 0.160g，置 1000ml 量瓶中 ,加硝酸 5ml 与水 50ml溶解后，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。 临用前，精密量取贮备液 10ml，置 100ml 量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得（每 1ml 相当于 10 g 的 Pb）。 醋酸盐缓冲液（ pH3.5） ： 醋酸盐缓冲液 (pH3.5) 取醋酸铵 25g，加水 25ml 溶解后，加 7mol/L 盐酸溶液 38ml，用 2mol/L 盐酸溶液或 5mol/L 氨溶液准确调节pH 值至 3.5(电位法指示 ),用水稀释至 100ml，即得。 2mol/L 盐酸溶液 ： 取盐酸 18ml， 加水适量使成 100ml，摇匀。 7mol/L 盐酸溶液： 取盐酸 63ml， 加水适量使成 100ml，摇匀。 硫代乙酰胺试液 ： 取硫代乙酰胺 4g，加水使溶解成 100ml,置冰箱中保存。临用前取混合液 由 1mol/L 氢氧化钠溶液 15ml、水 5.0ml 及甘油 20ml 组成 5.0ml，加上述硫代乙酰胺溶液 1.0ml，置水浴上加热 20 秒钟，冷却，立即使用。
