1、马钱子检验方法确认方案类 别：检验方法确认文件编号：VAP-FF-2016-001起 草 人： 审 核 人： 批 准 人： 一 简介本品为马钱科植物马钱 Strychnos nux-vomica L.的十燥成熟种子。冬季采收成熟果实，取出种子，晒干。苦，温；有大毒。归肝、脾经。通络止痛，散结消肿。用于跌打损伤，骨折肿痛，风湿顽痹，麻木瘫痪，痈疽疮毒，咽喉肿痛。二 验证目的马钱子质量标准收载在中华人民共和国药典2015 版一部, 为保证生产出的产品符合检验标准的要求,确认该检测方法是否适用于本公司生产的产品检验。现对质量标准分析方法进行确认验证，确保检验结果的准确可靠。三 验证范围3.1 鉴别
2、（士的宁、马钱子碱薄层鉴别）3.2 含量测定四 验证小组成员及职责五 确认验证实施步骤5.1 为了确保验证数据的准确可靠，采取以下几个先行保障措施5.1.1 仪器：己经过校正并在有效期内5.1.2 人员：均经过培训，熟悉方法及使用的仪器5.1.3 对照品：购自陕西省药品检验所5.1.4 材料：均符合检验要求5.1.5 参考资料中华人民共和国药典2015 版一部药品 GMP 指南 （2010 年版） 质量控制实验室与物料系统5.2 鉴别（2）5.2.1 试验 A：取本品粉末 0.5g，加三氯甲烷-乙醇(10：1)混合溶液 5ml 与浓氨试液 0.5ml，密塞，振摇 5 分钟，放置 2 小时，滤过
3、，取滤液作为供试品溶液。另取士的宁对照品、马钱子碱对照品，加三氯甲烷制成每 1ml 各含 2mg 的混合溶液，作为对照品溶液。按照薄层色谱法（通则 0502）试验，吸取上述两种溶液各 lOul，分别点于姓 名 职务 责任人质量部部长（确认小组组长）检验仪器确认总负责；组织相关的设备确认培训；批准确认方案；审批确认报告。QC 主管 审核确认方案；督促并监督确认的正常进行；审核确认报告，对整个确认验证项目负责。QC 按照预定方案进行确认；并做好相关记录；出现异常情况及时汇报和记录；起草确认报告。同一硅胶 G 薄层板上，以甲苯-丙酮-乙醇-浓氨试液(4：5：0.6：0.4)为展开剂，展开，取出，晾干
4、，喷以稀碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。5.2.2 试验 B：取三氯甲烷-乙醇(10：1)混合溶液 5ml 与浓氨试液 0.5ml，密塞，振摇 5 分钟，放置 2 小时，滤过，取滤液作为供试品溶液。另取士的宁对照品、马钱子碱对照品，加三氯甲烷制成每 1ml 各含 2mg 的混合溶液，作为对照品溶液。按照薄层色谱法（通则 0502）试验，吸取上述两种溶液各 lOul，分别点于同一硅胶 G 薄层板上，以甲苯-丙酮-乙醇-浓氨试液(4：5：0.6：0.4)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，不得显相同颜色
5、的斑点。5.2.3 确认验证标准:试验 A 供试品色谱中应检出士的宁、马钱子碱。试验 B 供试品溶液中不得检出士的宁、马钱子碱。5.2.4 检测结果及评价类别 检验结果试验 A试验 B操作人： 复核人： 日期： 年 月 日结果及评价：马钱子原药材中检出士的宁、马钱子碱，而空白溶剂样中未检出士的宁、马钱子碱，本方法可以作为马钱子鉴别中士的宁、马钱子碱鉴别的指导方法使用。 评价人： 评价日期： 年 月 日5.3 含量测定 照高效液相色谱法测定。5.3.1 验证方法色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈0.Olmol/L 庚烷磺酸钠与 0.02moI/L 磷酸二氢钾等量混合
6、溶液（用 10%磷酸调节 pH 值2.8）(21：79)为流动相；检测波长为 260nm。理论板数按士的宁峰计算应不低于5000。对照品溶液的制备 取士的宁对照品 6mg、马钱子碱对照品 5mg，精密称定，分别置 1Oml 量瓶中，加三氯甲烷逶量使溶解并稀释至刻度，摇匀。分别精密量取 2ml，置同一 10 ml 量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得(每 1ml 含士的宁 0.12mg、马钱子碱 0.1mg)。供试品溶液的制备 取本品粉末（过三号筛）约 0.6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加氢氧化钠试液 3ml，混匀，放置 30 分钟，精密加入三氯甲烷 20ml，密塞，称定重量，置水浴中回流提取
7、 2 小时，放冷，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，分取三氯甲烷液，用铺有少量无水硫酸钠的滤纸滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液 3ml，置 lOml 量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。空白溶液的制备 取氢氧化钠试液 3ml，置具塞锥形瓶中，放置 30 分钟，精密加入三氯甲烷 20ml，密塞，称定重量，置水浴中回流提取 2 小时，放冷，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，分取三氯甲烷液，用铺有少量无水硫酸钠的滤纸滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液 3ml，置 lOml 量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 lOul，注入液相色谱仪，测定，
8、即得。 5.3.2 含量计算A 供 C 对 稀释倍数公式：含量%=100% A 对 m 供5.3.3 确认验证标准 A 供试品溶液应检出与对照品溶液中士的宁、马钱子碱相同保留时间的色谱峰；空白溶液中不得检出与对照品溶液中士的宁、马钱子碱相同保留时间的色谱峰。B 连续进供试品 6 次测定含量，RSD2%。5.3.4 检测结果及评价A 保留时间确认操作人： 复核人： 日期： 年 月 日B 重复性确认项目 对照品溶液 供试品溶液 空白溶液保留时间次数 1 2 3 4 5 6含量平均含量RSD操作人： 复核人： 日期： 年 月 日结果及评价：供试品溶液中检出与对照品溶液中士的宁、马钱子碱相同保留时间的色谱峰；空白溶液中未检出与对照品溶液中士的宁、马钱子碱相同保留时间的色谱峰。连续进供试品 6 次测定含量，RSD2%。本方法可以作为马钱子含量测定的指导方法使用。 评价人： 评价日期： 年 月 日六 验证总体评价及建议评价人： 评价日期： 年 月 日
