1、微生物学实验报告生命科学学院09 级 1 班安明玉（200900140001）（同组者：陈汶灿、陈肖然、程彬、高琳璐、秦瑶）实验四 鞭毛染色法及活细菌运动性的观察一、目的要求1 .学习并初步掌握鞭毛染色法，观察细菌鞭毛的形态特征。2 .学习用压滴法和悬滴法观察细菌的运动性。二、基本原理鞭毛是细菌的运动器官，鞭毛的有无、数量及着生方式也是细菌分类的重要指标。鞭毛直径一般为 1030nm，只有用电镜才能直接观察到。若要用普通光学显微镜观察，必须使用鞭毛染色法。首先用媒染剂（如单宁酸或明矾钾）处理，使媒染剂附着在鞭毛上使其加粗，然后用碱性复红（Gray 式染色法）、碱性复品红（Leifson 氏染色
2、法）、硝酸银（West 氏染色法）或结晶紫（Difco氏染色法）进行染色。本实验介绍硝酸银染色法和改良的 Lifson 氏染色法，前一种方法更容易掌握但染色剂配制后保存期较短。在显微镜下观察细菌的运动性，也可以初步判断细菌是否有鞭毛细菌运动性的观察可用压滴法和悬滴法，本实验主要介绍前者。观察时，要适当减弱光强度以增加反差，若光线太强，细菌和周围的液体难以区分。三、器材1 .菌种枯草芽孢杆菌（ Bacillus subtilis）牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物，铜绿假单胞菌（P.Aeruginosa）牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物。2 .染色剂番红水溶液，结晶紫水溶液，硝酸银鞭毛染色液(A 液，B 液)
3、，Leifson 氏鞭毛染色液，美蓝水溶液，香柏油，蒸馏水，95%乙醇溶液。3 .仪器或其他用具载玻片，盖玻片，无菌水，接种环，擦镜纸，显微镜等四、操作步骤1.鞭毛染色(1)载玻片准备将载玻片用清水充分洗净，再置于 95%乙醇中浸泡，5min 后取出载玻片自然干燥。(2)制片在载玻片的一端滴一滴蒸馏水，用接种环蘸取少许备用的菌落（最好从菌落的边缘取菌苔，注意不要挑上培养基），在载玻片的水滴中轻沾几下，将载玻片稍倾斜，使菌液随水滴缓慢流到另一端，然后平放在空气中自然干燥。(3)染色涂片干燥后滴加硝酸银鞭毛染色液 A 液染 35 分钟，用蒸馏水冲洗，用 B液覆盖 0.51min（注意：一定要充分洗
4、净 A 液后再加 B 液，否则背景很脏），用蒸馏水冲洗，自然干燥。(4)镜检镜检时，如未见鞭毛，应在整个涂片上多找几个视野，有时只在部分涂片上染出鞭毛。菌体为深褐色，鞭毛为褐色。2运动性观察压滴法(1)制片在洁净载玻片上加一滴无菌水，用接种环蘸取少许备用的菌落，在载玻片的水滴中轻沾几下，滴加一滴稀释美蓝水溶液与其混合均匀(2)加盖玻片用镊子取一沽净盖玻片，使其一边与菌液边缘接触，然后将盖玻片缓慢放下盖在菌液上。(3)镜检先用低倍镜找到标本，再用高倍镜观察。也可用油镜观察，观察时，要用略暗光线，五、实验结果图 1 枯草芽孢杆菌鞭毛染色图 2 铜绿假单胞菌运动性的观察图 3 鞭毛染色范例（资料）六、思考题1.除鞭毛染色法外，还有什么方法能观察到鞭毛？答：还可以使用电子显微镜观察。2.如果你发现鞭毛与菌体脱离，请解释原因。答：鞭毛与菌体脱离可能是由于水洗时水流的冲击或盖玻片的挤压造成。七、实验分析1.细菌鞭毛染色要求非常小心细致，染色成功的关键主要决定于：(a)菌种活化的情况，即要连续移种几次；(b)菌龄要合适，一般在幼龄时鞭毛情况最好，易于染色；(c)新鲜的染色液；(d)载玻片要求干净无油污。2.经鞭毛染色法染色的有鞭毛细菌菌体呈深褐色，鞭毛浅褐色且通常呈波浪形。3.有鞭毛细菌可作直线、波浪式或翻滚运动，两个细菌之间出现明显的位移而与布朗运动或随水流动相区别
