1、常见实验用溶液的配制方法作者：佚名 实验频道来源：生物谷 点击数： 2985 更新时间：2004-12-21一.常用贮液与溶液1mol/L 亚精胺（Spermidine ）: 溶解 2.55g 亚精胺于足量的水中，使终体积为 10ml。分装成小份贮存于-20 。1mol/L 精胺（Spermine ）：溶解 3.48g 精胺于足量的水中，使终体积为 10ml。分装成小份贮存于-20 。10mol/L 乙酸胺（ammonium acetate）：将 77.1g 乙酸胺溶解于水中，加水定容至 1L 后，用 0.22um 孔径的滤膜过滤除菌。10mg/ml 牛血清蛋白(BSA ）：加 100mg 的
2、牛血清蛋白（组分 V 或分子生物学试剂级，无 DNA 酶）于 9.5ml 水中（为减少变性，须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白） ，盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到 10ml，然后分装成小份贮存于-20。1mol/L 二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇 5g 的原装瓶中加 32.4ml 水，分成小份贮存于-20。或转移 100mg 的二硫苏糖醇至微量离心管，加 0.65ml 的水配制成 1mol/L 二硫苏糖醇溶液。8mol/L 乙酸钾（potassium acetate）：溶解 78.5g 乙酸钾于足量的水中，加水定容到 100ml。1mol/L 氯
3、化钾（KCl）：溶解 7.46g 氯化钾于足量的水中，加水定容到 100ml。3mol/L 乙酸钠（sodium acetate）：溶解 40.8g 的三水乙酸钠于约 90ml 水中，用冰乙酸调溶液的 pH 至 5.2，再加水定容到 100ml。0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的 Na2EDTA 和 NaOH 溶液（0.5mol/L） ，混合后形成 EDTA 的三钠盐。或称取 186.1g 的 Na2EDTA2H2O 和 20g的 NaOH，并溶于水中，定容至 1L。1mol/L HEPES：将 23.8gHEPES 溶于约 90ml 的水中，用 NaOH 调 pH（6.8-8.2） ，
4、然后用水定容至 100ml。1mol/L HCl：加 8.6ml 的浓盐酸至 91.4ml 的水中。25mg/ml IPGT：溶解 250mg 的 IPGT（异丙基硫代-D-半乳糖苷）于 10ml 水中，分成小份贮存于-20。1mol/LMgCl2:溶解 20.3g MgCl26H2O 于足量的水中，定容到 100ml。100mmol/L PMSF：溶解 174mg 的 PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中，定容到 10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹或贮存于-20。20mg/ml 蛋白酶 K（proteinase K）：将 200mg 的蛋白酶 L 加入到 9.5ml 水中，轻轻摇动，
5、直至蛋白酶 K 完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20。10mg/mlRnase（无 DNase） （DNasefree RNase）：溶解 10mg 的胰蛋白 RNA 酶于 1ml 的 10mmol/L 的乙酸钠水溶液中（pH 5.0） 。溶解后于水浴中煮沸 15min，使 DNA 酶失活。用 1mol/L 的 TrisHCl 调 pH 至 7.5，于-20贮存。 （配制过程中要戴手套）5mol/L 氯化钠（NaCl）：溶解 29.2g 氯化钠于足量的水中，定容至 100ml。10N 氢氧化钠（NaOH）：溶解 400g 氢氧化钠颗粒于约 0.9L 水的烧杯中
6、（磁力搅拌器搅拌） ，氢氧化钠完全溶解后用水定容至 1L。10SDS （十二烷基硫酸钠）：称取 100gSDS 慢慢转移到约含 0.9L 的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至 1L。2mol/L 山梨（糖）醇（Sorbitol）：溶解 36.4g 山梨（糖）醇于足量水中使终体积为 100ml。100三氯乙酸（TCA）:在装有 500gTCA 的试剂瓶中加入 100ml 水，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。 （稀释液应在临用前配制）2.5 Xgal（5-溴-4-氯-3-吲哚 - 半乳糖苷）：溶解 25mg 的 Xgal 于 1ml 的二甲基甲酰胺（DMF ）,用铝箔包裹装液管，贮
7、存于-20。100Denhardt 试剂（Denhardts regent）成分及终浓度 配制 100ml 溶液各成分的用量2%聚蔗糖（Ficoll，400 型）2%聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40）2%BSA（组分 V）水 2g2g2g加水至总体积为 100ml依照上表称取各组分，溶于水中定容。过滤除菌及杂质，分装成小份于-20贮存。10标准 DNA 连接酶缓冲液（standard DNA ligase buffer） （粘端、平端连接）成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分的用量0.5mol/L Tris-HCl100mmol/L MgCl2100mmol/L DTT2mmol/L ATP5
8、mmol/L 盐酸亚精胺（可选）0.5mg/ml BSA（组分 V） （可选）水 5ml 1mol/L 贮液1ml 1mol/L 贮液1ml 1mol/L 贮液200ul 100 mmol/L 贮液50ul 1 mmol/L 贮液0.5ml 10 mg/mL 贮液2.25ml将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于-20 。100 mmol/L dNTP 溶液（dNTP solutions）可以购买到 100mmol/L 纯 dNTPs 贮液，-80可贮存至少 6 个月。10mmol/L dNTP 混合液成分及终浓度 配制 20ul 溶液各成分的用量10mmol/L dATP 2ul 100 mmo
9、l/L dATP 贮液10mmol/L dCTP 10mmol/L dGTP10mmol/L dTTP水 2ul 100 mmol/L dCTP 贮液2ul 100 mmol/L dGTP 贮液2ul 100 mmol/L dTTP 贮液12ul 20PEG 8000/2.5M NaCl成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分的用量质量浓度为 20聚乙二醇2.5mol/L 氯化钠水 20g50ml 5 mol/L 氯化钠 或 14.6g 固体氯化钠补足 100ml 加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积 100ml，用磁力搅拌器搅拌溶解。20SSC成分及终浓度 配制 1L 溶液各成分的用
10、量300mmol/L 柠檬酸三钠（二水）3mol/L 氯化钠水 88.2g175.3g补足 1L 溶解柠檬酸三钠（二水）和氯化钠于约 0.9L 水中，加几滴 10N NaOH 溶液调 pH 为 7.0，用水补足体积至 1L。DEPC（焦碳酸二乙酯）处理水加 100ul DEPC 于 100ml 水中，使 DEPC 的体积分数为 0.1。在 37温浴至少 12h，然后在 15 psi 条件下高压灭菌 20min，以使残余的 DEPC 失活。DEPC 会与胺起反应，不可用 DEPC 处理 Tris 缓冲液。甲酰胺（deionized formamide）直接购买或加 Dowex XG8 混合树脂于
11、装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用磁力搅拌器轻轻搅拌 1h，可去除甲酰胺中的离子。经 Whatman 1 号滤纸过滤除去树脂后分成小份，充氮气于-80贮存（防止氧化） 。磷酸缓冲液（phosphate buffer）按照下表所给定的体积，混合 1 mol/L 的磷酸二氢钠（单碱）和 1mol/L 磷酸氢二钠（双碱）贮液，获得所需 pH 的磷酸缓冲液。配制 1 mol/L 的磷酸二氢钠（NaH2PO4H2O）贮液：溶解 138g 于足量水中，使终体积为 1L;1mol/L 磷酸氢二钠（Na2HPO4）贮液:溶解 142g 于足量水中使终体积为 1L。1mol/L 磷酸二氢钠（ ml） 1mol/L 磷酸
12、氢二钠（ml） 最终 pH 值877 123 6.0850815775735685625565510450390330280 150185225265315375435490550610670720 6.16.26.36.46.56.66.76.86.97.07.17.2TE（用于悬浮和贮存 DNA）成分及终浓度 配制 100ml 溶液各成分的用量10mmol/L TrisHCl1mmol/L EDTA水 1ml 1mol/L Tris-HCl（pH7.4-8.0，25）200ul 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）98.8ml Tris 缓冲液（Tris-HCl buffer）将
13、121g 的 Tris 碱溶解于约 0.9L 水中，再根据所要求的 pH（25下）加一定量的浓盐酸（11.6N） ，用水调整终体积至 1L。浓盐酸的体积（ml ） pH8.6142128.53846566671.376 9.08.88.68.48.28.07.87.67.47.2 二.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液电泳缓冲液50Tris-乙酸（TAE）缓冲液成分及终浓度 配制 1L 溶液各成分的用量2mol/L Tris 碱1mol/L 乙酸100 mmol/L EDTA水 242g57.1 ml 的冰乙酸（17.4 mol/L）200ml 的 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）补足
14、1L 5Tris-硼酸（ TBE）缓冲液成分及终浓度 配制 1L 溶液各成分的用量445 mmol/L Tris 碱445 mmol/L 硼酸盐10 mmol/L EDTA水 54g27.5g 硼酸20 ml 的 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）补足 1L 染料1溴酚蓝（bromophenol blue）加 1g 水溶性钠型溴酚蓝于 100ml 水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。1二甲苯青 FF（xylene cyanole FF）溶解 1g 二甲苯青 FF 于足量水中，定容到 100ml。10mg/ml 的溴化乙锭（ethidium bromide）小心称取 1g 溴化乙锭，转移
15、到广口瓶中，加 100ml 水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管，于 4贮存。凝胶上样液（gel loading solutions）6碱性凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分用量0.3 N 氢氧化钠6 mmol/L EDTA18聚蔗糖（400 型）0.15溴甲酚绿0.25二甲苯青 FF水 300ul 10N 氢氧化钠120ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）1.8g15mg25mg补足到 10ml 6聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分用量0.15溴酚蓝0.15二甲苯青 FF5 mmol/L EDTA15聚蔗糖
16、（400 型）水 1.5ml 1溴酚蓝1.5ml 1二甲苯青 FF100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）1.5g补足到 10ml 6溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分用量0.25溴酚蓝0.25二甲苯青 FF15聚蔗糖（400 型）水 2.5ml 1溴酚蓝2.5ml 1二甲苯青 FF1.5g 补足到 10ml 6甘油凝胶上样液（4贮存）成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分用量0.15溴酚蓝0.15二甲苯青 FF5 mmol/L EDTA50甘油水 1.5ml 1溴酚蓝1.5ml 1二甲苯青 FF100ul 0.5mol/L E
17、DTA（pH8.0）3ml 3.9ml 6蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分用量0.15溴酚蓝0.15二甲苯青 FF5 mmol/L EDTA40聚蔗糖水 1.5ml 1溴酚蓝1.5ml 1二甲苯青 FF100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）4g 补足到 10ml 10十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分用量0.2溴酚蓝0.2二甲苯青 FF20mg20mg200 mmol/L EDTA0.1SDS50甘油 水 4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)100ul 10 SDS5ml补足到 10ml
18、 三.常用培养基LB 培养基将下列组分溶解在 0.9L 水中：蛋白胨 10g酵母提取物 5g氯化钠 10g如果需要用 1N NaOH（1ml ）调整 pH 至 7.0，再补足水至 1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉 12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉 7g/L。SOB 培养基将下列组分溶解在 0.9L 水中：蛋白胨 20g酵母提取物 5g氯化钠 0.5g1 mol/L 氯化钾 2.5ml用水补足体积到 1L。分成 100ml 的小份，高压灭菌。培养基冷却到室温后，再在每 100ml 的小份中加 1ml 灭过菌的 1mol/L 氯化镁。SOC 培养基成分、方法同 SOB 培养基的配制，只是在培养基冷
19、却到室温后，除了在每 100ml 的小份中加 1ml 灭过菌的 1mol/L 氯化镁外，再加 2ml 灭菌的 1mol/L 葡萄糖（18g 葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到 100ml，用 0.22um 的滤膜过滤除菌） 。TB 培养基将下列组分溶解在 0.9L 水中：蛋白胨 12g酵母提取物 24g甘油 4ml各组分溶解后高压灭菌。冷却到 60，再加 100ml 灭菌的 170mmol/L KH2PO4/0.72 mol/L K2HPO4 的溶液（2.31g 的 KH2PO4 和 12.54gK2HPO4 溶在足量的水中，使终体积为 100ml。高压灭菌或用 0.22um 的滤膜过滤除菌）
20、。2YT 培养基将下列组分溶解在 0.9L 水中：蛋白胨 16g酵母提取物 10g氯化钠 4ml如果需要用 1N NaOH（1ml ）调整 pH 至 7.0，再补足水至 1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉 12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉 7g/L。YPD 培养基将下列组分溶解在 0.9L 水中：蛋白胨 20g酵母提取物 10g葡萄糖 20g用水补足体积为 1L 后，高压灭菌。建议在高压灭菌之前，对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加 1.6g 色氨酸，因为 YPD 培养基是色氨酸限制型培养基。为了配制平板，需要在高压灭菌前加入 20g 琼脂粉。四.常用抗生素氨苄青霉素（ampicillin ） （1
21、00mg/ml ）溶解 1g 氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至 10ml。分装成小份于-20 贮存。常以 25ug/ml50ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。羧苄青霉素（carbenicillin） （50mg/ml）溶解 0.5g 羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至 10ml。分装成小份于-20 贮存。常以 25ug/ml50ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。甲氧西林（methicillin） （100mg/ml）溶解 1g 甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至 10ml。分装成小份于-20 贮存。常以 37.5ug/ml 终浓度与 100ug/ml 氨苄青霉素一起添加于生
22、长培养基。卡那霉素（kanamycin） （10mg/ml）溶解 100mg 卡那霉素于足量的水中，最后定容至 10ml。分装成小份于-20 贮存。常以 10ug/ml50ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。氯霉素（chloramphenicol） （25mg/ml）溶解 250mg 氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至 10ml。分装成小份于-20 贮存。常以 12.5ug/ml25ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。链霉素（streptomycin） （50mg/ml）溶解 0.5g 链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至 10ml。分装成小份于-20 贮存。常以 10ug/ml50
23、ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。萘啶酮酸（nalidixic acid） （5mg/ml）溶解 50mg 萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至 10ml。分装成小份于-20 贮存。常以 15ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。四环素（tetracyyline） （10mg/ml ）溶解 100mg 四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至 10ml。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20贮存。常以 10ug/ml50ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。蛋白质电泳技术作者：bioinfo 实验频道来源：生物谷整理 点击数： 8858 更新时间：2004
24、-8-6SDS/Polyacrylamide Gel ElectrophoresisStandard SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (Laemmli)-gel preparation. Volumes given are sufficient for small (8 cm X 10 cm X 1.5 mm) gel format (10 ml of monomer). Scale up volumes as needed. 1. Pour the Separating GelSet up your gel apparatus, prepare
25、separating gel monomer. Add TEMED just prior to pouring gel (I “pour“ the gels using a pasteur pipet and a rubber bulb). Allow to polymerize before adding stacking gel by overlaying gently with water or n-butanol. With higher % gels, one can immediately pour the stacking gel on the unpolymerized sep
26、arating gel. Be careful not to mix the two layers. Separating Gels, in 0.375 M Tris, pH 8.87% 10% 12% 15%distilled H2O 5.1 ml 4.1 ml 3.4 ml 2.4 ml1.5 M Tris-HCl, pH 8.8 2.5 ml 2.5 ml 2.5 ml 2.5 ml20% (w/v) SDS 0.05 ml 0.05 ml 0.05 ml 0.05 mlAcrylamide/Bis-acrylamide(30%/0.8% w/v) 2.3 ml 3.3 ml 4.0 m
27、l 5.0 ml10% (w/v) ammonium persulfate 0.05 ml 0.05 ml 0.05 ml 0.05 mlTEMED 0.005 ml 0.005 ml 0.005 ml 0.005 mlTotal monomer 10.005 ml 10.005 ml 10.005 ml 10.005 ml2. Pour the Stacking GelAfter the separating gel has polymerized, decant the overlay, prepare the stacking monomer, add the TEMED, and po
28、ur. Insert the comb and allow to polymerize completely before running. Stacking Gels, 4.0% gel, 0.125 M Tris, pH 6.8distilled H2O 3.075 ml0.5 M Tris-HCl, pH 6.8 1.25 ml20% (w/v) SDS 0.025 mlAcrylamide/Bis-acrylamide(30%/0.8% w/v) 0.67 ml10% (w/v) ammonium persulfate 0.025 mlTEMED 0.005 mlTotal Stack monomer 5.05 mlFor best results: 1. Make ammonium persulfate solution fresh daily. 2. Degas solutions before adding TEMED for 15 min at room temperature. 3. Running the gelI usually run my gels at constant current, 25-50 mA, depending on gel size. Heres the recipe for 5X SDS-PAGE runnin
