1、微量加样器1、微量加样器的使用原理及分类（1）分类：根据其加样的物理学原理，可分为空气垫加样器 (又称活塞冲程); 无空气垫的活塞正移动加样器，这两种加样器具有不同的特定应用范围。（2）使用原理：活塞冲程(空气垫)加样器可很方便地用于固定或可调:体积液体的加样， 加样体积的范围在小于 1ul 10 ml 之间加样器中的空气垫的作用是将吸于塑料吸头内的液体样本与加样器内的活塞分隔开来， 空气垫通过加样器活塞的弹簧样运动而移动， 进而带动吸头中的液体， 死体积和移液吸头中高度的增加决定了加样中这种空气垫的膨胀程度 因此， 活塞移动的体积必须比所希望吸取的体积要大约 2% 4%， 温度 气压和空气湿
2、度的影响必须通过对空气垫加样器进行结构上的改良而降低， 使得在正常情况下不至于影响加样的准确度 一次性吸头是本加样系统的一个重要组成部分， 其形状 材料特性及加样器的吻合程度均对加样的准确度有很大的影响以活塞正移动为原理的加样器和分配器与空气垫加样器所受物理因素的影响不同， 因此， 在空气垫加样器难以应用的情况下， 活塞正移动加样器可以应用， 如具有高蒸汽压的 高黏稠度以及密度大于 2. 0 g /cm3的液体;又如在临床聚合酶链反应(PCR)测定中， 为防止气溶胶的产生， 最好使用活塞正移动加样器 活塞正移动加样器的吸头与空气垫加样器吸头有所不同2、定期对微量加样器的校准新购的微量加样器的失
3、准率为 1.56,使用 10 000次以下的微量加样器的失准率为 4.00%使用 10 000 50 000次以 上的微量加样器的失准率为 8.82 %, 使用 50 000 100 000次以上的微量加样器的失准率为 21.7%,使用 500 000次以上的微量加样器的失准率为 47.6%,可见, 无论是新购还是使用过的加样器失准率都较高, 必须定期进行校准。常用的方法有高铁氰化钾法、水称重法、 水银称重法等, 前两种方法准确性较差, 后一种方法虽然优于前两种, 但操作麻烦, 需一定的设备, 且水银容易蒸发, 对人体有害。在实验教学中我们一般常用光电比色法进行校准。具体方法是, 取 3只试管
4、分别加入蒸馏水 5.0 m , l用校正过的血红蛋白吸管吸 0.3 % 曙红液 20ul混匀, 作为标准管, 在 721分光光度计上, 波长 508 nm, 蒸馏水校零,平行3管测定,对吸光度均值, 测定管除用待校正的微量加样器代替血红蛋白吸管外, 其它操作同前。计算: 实际容量 (ul) = A测 /A标X200相对误差 (% ) = (实际容量 - 刻度容量 /刻度容量 ) X100 %相对误差 3 % 则应送检定所重新检定方可使用。3、影响因素：一般来说， 为防止所吸取体积上出现误差， 有一些基本的操作原则必须遵守 对吸取体积误差影响的因素主要有三个方面: 流体静压; 吸头润湿; 流体动
5、力学 当样本体积从毫升范围降低至微升范围时， 物理作用力的关系即发生变化， 对于加样来说， 其意味着液体表面的作用力效应与其体积或质量(例如重力)的作用力效应相比有所增加， 因此， 加样器生产厂家在设计和构建加样器和吸头中必须仔细考虑这种情况， 而且在使用时也必须注意（1） 流体静压:在吸取液体时， 加样器吸头只能浸入液体几毫升以确保与排出液体时相同的流体静压条件， 因此， 加样器必须以几乎垂直的方式加取液体， 因为倾斜的方式将减少液体柱的高度， 导致吸取的液体过多 如果加样器以 30下以垂直方式吸取液体， 可吸取至0. 15%更多的液体（2） 吸头润湿:当吸头排空时， 仍会有一些残留的液体以
6、薄膜的形式保留在吸头的侧面， 其量取决于液体和吸头表面的相互作用， 因此， 其是一个常数， 但依液体材料的不同而不同对于水溶液， 这种润湿影响在构建加样器时就应考虑 对于蛋白液等黏度高的液体， 建议在加样前吸液体数次， 以保证加样的一致性（3） 流体动力学:对体积吸取的第三个影响是从加样器吸头外壁液体的释放， 在此过程中， 吸头的几何形状起一个关键的作用 为确保加样中的稳定条件， 加样器吸头应靠在管壁上，于吸头中释放 如果吸头安装不正确或使用不相配的吸头，相对加样误差将达到0. 4%以上4、加样器5、设定容量6、P型移液器的应用范围7、微量移液器（micropipettor）的使用说明（1）设
7、定取液值：转动移液器的调节旋钮，反时针方向转动旋钮，可提高设定取液量。顺时针方向转动旋钮，可降低取液量。在调整旋钮时，不要用力过猛，并应注意使移液器显示的数值不应超过其可调范围。（2）吸液： 1 选择吸头(Tip) 放在移液器套筒上，稍加压力使之与套筒之间无空气间隙。2 把按钮压至第一停点（图A），垂直握持加样器，使吸头浸入液面下3-5毫米处，然后缓慢平稳地松开按钮，吸入液体（图B）。（3）放液：1 将吸头口贴到容器内壁底部并保持倾斜，平稳地把按钮压到第一停点（图C），再把按钮压到第二停点以排出剩余液体（图D）。2 压住按钮，同时提起加样器，使吸头贴容器壁擦过（图D）。松开按钮（图E），按吸头
8、弹射器除去吸头。8、注意事项实验室基本上以使用连续可调的加样器为主 连续可调式加样器在使用时应注意以下几点， 从而使加样器能发挥最佳性能（1）取液之前， 所取液体应在室温(15 25)平衡（2） 操作时要慢和稳（3）连续可调试加样器在取样加样过程中应注意移液吸头不能触及其他物品， 以免被污染;移液吸头盒(架子) 废液瓶 所取试剂及加样的样品管应摆放合理， 以方便操作过程避免污染为原则（4）连续可调试加样器在使用完毕后应置于加样器架上,远离潮湿及腐蚀性物质（5）吸头浸入液体深度要合适，吸液过程尽量保持不变（6） 改吸不同液体样品或试剂前要换新吸头（7） 发现吸头内有残液时必须更换（8） 新吸头使
9、用前应先预测(9 )为防止液体进入加样器套筒内， 必须注意以下几点:压放按钮时保持平衡; 加样器不得倒转; 吸头中有液体时不可将加样器平放; P5000 及 P10ML 加样器一定要加滤芯(10) 勿用油脂等润滑活塞或密封圈(11) 不可把容量计数调超其适用范围(12) 液体温度与室温有异时， 将吸头预洗多次再用(13) 移液温度不得超过70(14) 使用了酸或有腐蚀蒸气的溶液后， 最好拆下套筒， 用蒸馏水清洗活塞及密封圈(15) 连续可调式加样器在使用完毕后应置于加样器架上，远离潮湿及腐蚀性物质9、加样器的维护 （1）套筒螺帽松动 用手拧紧螺帽。 （2）活塞或密封圈受化学腐蚀 更换活塞和密封圈。用蒸馏水洗涤套筒内壁。 （3）发现套筒内有液体，可依下法清洁：卸下弹射器，拧下螺帽并用蒸馏水洗涤套筒、活塞、密封圈及O型环，干燥后重新组装。 （4）发现吸液时有气泡 将液体排回原容器；检查吸头浸入液体是否太深；换个吸头重新吸取样本。
