1、柑橘碎叶病摘要：本文先从柑橘碎叶病的发生概况，传播途径，危害症状以及防治方法等一些宏观方面进行概述。然后再从微观方面写引起柑橘碎叶病的病毒及其检测方法。关键词：碎叶病 危害症状 防治方法 检测柑橘碎叶病(Tatter leaf) 于 1962 年在美国加利福尼亚的北京来檬上首先发现。受感染的北京来檬不表现症状，但嫁接接种于厚皮柠檬时，新叶上出现叶片扭曲、叶缘残缺呈破碎因而得名。报道有碎叶病的国家，除美国外，还有南非、澳大利亚、日本、菲律宾和韩国。1.概况在国内，1984 年台湾首先报道、蕉柑和柳橙感染柑橘碎叶病毒，后又发现默科特、温州蜜柑、华盛顿脐橙、无酸甜橙、和葡萄柚亦受感染。浙江黄岩的本地
2、早、少核本地早、槾橘、早橘、朱红、乳橘、北京来檬、兴津温州蜜柑及温州的柳橙等 10 个品种的枳砧或枸头橙砧的植株都感染碎叶病毒。四川重庆江北农场的北京来檬，国家果树种质重庆柑橘圃的蕉柑、柱柑、五布红心柚、古老钱沙田柚、相橘、冰糖橙、莳橘等受碎叶病感染。广西柳州的蕉柑、新会橙、暗柳橙、柱柑，广东的杨村新会橙、汕头蕉柑，福建漳州的槿柑，湖南的冰糖橙和大红甜橙以及湖北的黄陵无核橙等亦受柑橘碎叶病毒的侵染。它主要危害以枳和枳橙作砧木的柑橘树，引起植株黄化、衰弱，甚至整株枯死。2.传播途径2.1 通过嫁接传病毒据报道，用带碎叶病毒的北京来檬嫁接接种在以腊斯克枳橙、特洛亚枳橙、卡里佐枳橙和枳作砧木的甜橙上
3、，会引起接合部肿大，树体矮化衰弱。2.2 通过受污染的刀剪传播据报道，通过污染的刀剪在香橼之间传病，传毒率达 92%以上。2.3 通过菟丝子从长春花传到枳橙3.危害症状 3.1 以枳及枳橙作砧的柑橘植株染病后砧穗接合部环缢靠近接口的接穗部肿大。剥开接合部树皮，可见接穗与砧木间的木质部有一圈缢缩线，受强风等外力推动，病树砧穗接合处易断裂，裂面光滑 。3.2 在叶片出现黄色透明斑点，圆形或不规则形，叶片边缘缺损叶片畸形且叶脉透明。3.3 在茎上首先出现水渍状的纵向沟条，后变成黄白色条斑，稍凹陷，剥开黄斑处的树皮，茎的木质部没有凹陷，有时条斑联合成斑块，枝条弯曲。3.4 地上部黄化、落叶。植株生长衰
4、弱、矮化、结果很少，甚至枯死 。4.防治方法4.1 选择无病母本 通过指示植物鉴定淘汰带毒母树，选择无病植株繁殖苗木。4.2 热处理消毒 据国外报道，在室内人工控制温度和光照条件下用白天(有光照，16h)40温度、黑夜(无光照，8h)30温度对盆栽植株进行热处理，3 个月后取枝条嫁接可获得无毒后代。4.3 热处理加茎尖嫁接脱毒 将带病植株置于每天光照和黑暗各 12h，35处理 1932 天，接着取 02mm 长的茎尖进行茎尖嫁接，可获得无病毒苗。4.4 工具消毒 对修枝剪和嫁接刀等工具可用含 5.3%次氯酸钠的漂白粉 10 倍液消毒，并立即用清水冲洗后擦干，然后应用。在苗圃，为避免人为造成汁液
5、传播，亦应注意工具消毒和免用手指抹去萌蘖。4.5 病树拔除重栽 对于已受碎叶病侵染且表现嫁接部障碍的枳砧柑橘树，有些地方采用靠接耐病砧木(如红橘)的办法，可在一定程度上恢复树势，但恢复需要的时间较长，复原的病树仍是碎叶病的传染源，在目前中国普遍采用枳作砧木，而碎叶病树零星发生的情况下，这种方法不宜推广，病树处理仍以拔除后重栽为好。4.6 建立无病苗圃，培育无病苗木。从田间选取健康的优良单株，经用指示植物腊斯克枳橙检测，证明不带碎叶病毒，则可作为接穗无病母树。另外也可选取健康的、优良单株嫁接苗，用 3044 摄氏度处理 2 星期后，在生长点切取 0.2 毫米微芽进行茎尖嫁接，便可获得无碎叶病毒的
6、繁殖材料。4.7 采用抗、耐病砧木。 柑桔碎叶病毒主要为害枳砧柑桔。避免用枳作砧木。采用枸头橙、酸桔、红桔等作砧木。5.病原柑桔碎叶病是由一种曲杆状病毒引起的病毒病。CTLV中基因组含6 500多个核苷酸，大小为650纳米19纳米。 1病毒性质不稳定，钝化温度为4045，体外存活期为24h。在碎叶病毒发现的初期，根据某些寄主接种后症状的表现与消失，认为在北京来檬中同时含有碎叶病毒和枳橙矮化病毒，但后来的研究并没有为这两种病毒的划分提供进一步的实验证据。目前，一般认为柑橘碎叶病毒是碎叶病的病原。6.检测方法6.1 材料感染CTLV的枳壳为试材，以实生枳壳苗为阴性对照6.2 引物的筛选与合成CTL
7、V引物合成参照Takao等 2的方法，CTLV扩增片段距ploy 一(A)端l 000 bp以内，由上海生物工程技术有限公司合成。6.3方法6.3.1单一PCR反应体系在02 mL PCR管中加入10 x buffer 25L.，10 mmolL dNTPs 05L. ，20 mmolL 镁离子lL.，10 mmolL引物 1L.，cDNAlL.，Taq DNA聚合酶004 uL.，用灭菌的双蒸馏水补足25L.。 16.3.2多重PCR反应体系 3 dNTPs的浓度提高到05 mmolL，镁离子设7个处理(15、20、25、30、35、40、45 mmolL)，Hotstar Taq酶01UL
8、. ，病毒特异引物03 lamolL。反应程序：94预变性3 min；940C变性30 s，60退火30 s，72延伸l min，35个循环，最后一个循环72延伸10 min。所用PCR试剂购于北京天为时代生物技术有限公司。PCR均在PTC 100，MJResearchINCPCR扩增仪上进行。 16.4PCR产物的检测分析和测序PCR产物的电泳分析：1TBE电泳缓冲液，25琼脂糖凝胶(含EB 05斗gmL)，5L上样，100 v稳压电泳至谱带完全分开。在BIO IMAGING SYSTEM观察结果。PCR产物测序由上海鼎安生物科技有限公司完成。 1参考文献1 肖远辉,曾继吾,张秋明,周碧容.
9、2007.柑橘衰退病、裂皮病和碎叶病的多重 RT-PCR 检测方法研究.植物病理学报,37(1)：31 - 35.2 张天淼编著 .2000.柑桔病毒病.中国农业出版社,12:23 - 24.3 赵学源,蒋元晖 . 2004.柑桔病毒病和类似病毒病的发生与防治,广西园艺,15(5)：4 - 10.赣南师范学院 20102011 学年第二学期柑桔病理学课程论文行政班级 08 生物科学 学 号 080907055 姓 名 尹小婷 选课班级 08 生物科学 任课教师 易 龙 成 绩 论文题目：柑橘碎叶病论文要求：结合所学专业课程的内容，自选一个论文题目。要求内容丰富、论证充分、合理、有自己的观点；格式规范、语言流畅。教师评语：评价指标 A B C 评 分观点 正确，有自己观点，有创新性较正确，有自己的观点错误，或没有自己的观点，抄袭行文 语言流畅，层次分明，中心突出语言较流畅，结构合理文字不通，条理不清论证 材料丰富，论证充分，逻辑性强材料较多，论证基本合理缺乏证据，简单拼凑规范 符合论文格式与规范基本符合论文格式与规范不符合论文格式与规范总成绩取平均值：教师签字：年 月 日
