1、244730082烟叶碱类物质及其测定意义一、烟叶碱类物质定义：烟草碱类物质包括两大类：植物碱和其它碱性含氮化合物。烟草植物碱主要是烟碱，降烟碱，假木贼碱和新烟草碱；其它碱性含氮物质如吡啶，吡咯，吡嗪，氨，甲胺，二甲胺等。二、测定意义：1、烟草碱类物质影响烟草的香气和吃味。2、烟碱是吸烟产生生理强度的物质基础。3、烟叶中烟碱含量高，劲头足 ，挥发碱和其它生物碱含量高则刺激性大。烟叶挥发碱的测定一、挥发碱定义：在 pH8 的缓冲溶液中进行蒸汽蒸馏，能逸出的那一部分氨类含氮化合物。主要包括：氨，胺，酰胺，游离烟碱。二、测定原理：用 pH8 的磷酸二氢钾硼酸缓冲液对烟草样品进行水蒸气蒸馏，流出液用
2、0.1mol/LHCl承接，再用 0.1mol/LNaOH 返滴剩余的 HCl，混合指示剂指示终点，计算出总的挥发碱含量。三、测定步骤：1、2-4g 烟样于 500ml 凯氏瓶中，加入少许石蜡和小瓷片防止发泡和沸溅，再加入 75ml缓冲液，通入水蒸气蒸馏。2、流出液用装有 15ml 的 0.1mol/LHCl 溶液的 1000ml 烧瓶承接，待蒸出液达到 800ml左右时，用硅钨酸的盐酸溶液测试是否将烟样中的挥发性碱蒸尽。3、流出液中加入 8-10 滴混合指示剂，用 0.1mol/LNaOH 滴定至溶液变为无色或灰白色，记下 NaOH 用量。同时做空白对照。四、结果结算：烟叶烟碱测定方法一、硅
3、钨酸重量法（经典法）：2447300821、原理：在强碱性介质（Ph10.5）NaOH 存在下进行蒸汽蒸馏，使全部植物碱包括烟碱、去甲基烟碱、假木贼碱和新烟碱等挥发而逸出，只有烟碱在酸性条件下可以被硅钨酸沉淀生成烟碱硅钨酸盐（白色沉淀） ，过虑洗涤得到纯净的烟碱硅钨酸盐白色沉淀，在800850高温下灼烧烟碱硅钨酸沉淀，得到无水硅钨酸残渣，根据无水硅钨酸残渣的重量计算出烟碱的含量。2、操作步骤：用 NaOH 蒸馏烟碱，制备待测液04g 烟样于 500mL 凯氏瓶或圆底烧瓶内，加入 3g NaOH，25g NaCl（催化剂，加速烟碱挥发）和 30mL 水通入水蒸汽蒸馏，流出液用 1：4HCl 承接
4、（也可以用 H2SO4）将流出液定容至 250mL 容量瓶中，即为烟碱待测液。注：待测液中是烟碱的盐酸盐与硅钨酸作用生成白色沉淀取 200mL 待测液于烧杯中，加入 1：4HCl 6mL ,12%硅钨酸 5 mL（估计每 10mg 烟碱应加入硅钨酸 2 mL） ，快速生成硅钨酸烟碱盐白色沉淀（不纯净）水浴加热，溶解不纯净的沉淀，然后让其自然冷却（不离开水浴锅，只是关掉水浴锅） ，重新结晶，得到纯净的大颗粒硅钨酸烟碱盐的针状晶体过虑冲洗该晶体（一定要将多余的硅钨酸全部冲洗干净，否则沉淀重量增加，结果偏高）将滤纸和沉淀晶体一块转移入一个已知重量的坩锅中，先低温炭化滤纸，再 800-850下高温灰化
5、灼烧硅钨酸烟碱盐，得到无水硅钨酸残渣，冷却称重，按照公式计算烟碱含量即可。注：所用滤纸是定量滤纸，也叫无灰滤纸，烧后无残渣。加入硅钨酸后即刻生成沉淀，非常快，但是不纯净，需重新结晶。3、结果结算4、硅钨酸重量法测定烟碱注意事项：各个操作过程烟碱不能有损失。a 蒸馏装置不能漏气，防止蒸馏过程中损失烟碱。b 过虑烟碱盐沉淀时，不能损失沉淀。c 检验烟碱是否蒸净，时间不能过早，次数不能过多。d 灼烧沉淀时，应先在 200-300下低温灼烧，先把滤纸炭化掉，然后再用 800-850高温灼烧，生成无水硅钨酸。要有足量沉淀，以减小称量误差沉淀颗粒要大而纯净为好。因为如果颗粒过小，易穿虑，使结果偏低。过虑时
6、应充分洗涤沉淀，以得到纯净的硅钨酸盐白色沉淀，否则结果偏高。必须用 26 个结晶水的硅钨酸，因为：a 生成的沉淀颗粒大 ，好过虑 b 结晶水定量参与了反应。二 、烟碱测定紫外分光光度法（国标法）：1、原理：在强碱性介质（Ph10.5）NaOH 存在下进行蒸汽蒸馏，使全部植物碱包括烟碱、去甲基烟碱、假木贼碱和新烟碱等挥发而逸出，然后根据烟碱对 259nm 紫外光具有最大244730082吸收，并且吸光度与烟碱含量正相关的性质，用紫外分光光度计测得待测液烟碱的吸光值，并进一步计算出烟碱的含量。2 测定步骤测液制备（同硅钨酸重量法） ，流出液改用 1mol/L 的 H2SO4 承接，也是定容到250
7、mL（V1） 。比色: 取 25 mL 待测液 V1，用 0.025mol/L 的 H2SO4 定容至 100 mL，同时作一空白对照：直接量取 25 mL 1mol/L 的 H2SO4，用 0.025mol/L 的 H2SO4 定容至 100 mL（V2） 。以空白对照为参比液，测定 236nm，259nm 和 282nm 处的吸光值。各处的吸光值读数最好都在 0.20.8 之间。分光光度法读数本身就存在误差，0.20.8 误差小于 3.6； 0.121.2 误差大于5。3、结果计算：1.059：与硅钨酸重量法相比的校正系数注：A259-1/2(A236+A282)的来历和作用（梯形中位线法
8、）作用：消除溶液杂质干扰来历：纯烟碱在 236nm 和 282nm 处基本无吸收峰，对 259nm 有最大特征吸收峰，待测液中因为有杂志干扰，在 236nm 和 282nm 处有吸收，使烟碱吸收曲线上移。而 236，259，282正好构成等差数列，依据梯形中位线计算方法，可以将 259nm 处上移的部分减去。4、注意事项V1 待测液体积 250mL 要准确 A259-1/2(A236+A282)中干扰物质的来源：a 从烟样中同时蒸馏出来的其他碱类物质（非人为因素）b 所用容器，试剂不纯净也可以引入干扰物质c 蒸馏装置使用时间过长，烟碱会或多或少地沉淀到装置内壁上，影响下次蒸馏结果，使用前应用乙
9、醇清洗内壁，然后空蒸除去乙醇。 所用石英比色皿（200 元/个） ，要小心使用，不能打破了。石英比色皿可以透紫外光，也可以透可见光，玻璃比色皿仅透可见光。精密仪器地使用比色皿上标有箭头，表示和光的方向一致，测定误差最小。石英比色皿用久了内壁也会粘有烟碱，也需要用乙醇浸泡洗涤A259 读数范围 0.20.8 或 0.20.7用仪器紫外光是氢灯发出的，同时也亮着钨灯（发可见光） ，钨灯发的光不进入光栅，仅起加热稳定仪器的作用（冬天）仪器不能连续的开开关关，否则易击穿氢灯。氢灯不好换，需要上下左右地调节，十分费事。三、烟碱测定烟酸提取脱色法（快速法）：1、原理：烟叶中的烟碱主要和有机酸结合成烟碱盐的
10、形式存在，烟碱和无机酸结合比有机酸强，因此用一定浓度的无机酸提取，完全可以把烟碱从烟叶中分离出来，再用活性炭脱去提取液中的杂色，然后根据烟碱对 259nm 紫外光具有最大吸收，并且吸光度与烟碱含量正相关的性质，用紫外分光光度计测得待测液烟碱的吸光值，并进一步计算出烟碱的含量。2447300822、操作步骤待测液制备：30mg 烟样于 150mL 三角瓶中，加入 1/3 角勺活性炭和 25mL 4HCl，振荡 10min（边提取边脱色）过虑并用蒸馏水定容到 100mL 容量瓶中，即得到待测液。同时作空白对照：25mL 4HCl 直接用蒸馏水定容到 100mL 即可。测定 以空白对照为参比液，测待
11、测液在 259nm，236nm 和 282nm 处的吸光值3、结果计算（同紫外分光光度法）：4、注意事项：不要用颗粒状活性碳，因为脱色效果不好。1/3 角勺活性碳对烤烟是过量的（2.6 倍烤烟样品量的活性碳就可以了） ，这个活性炭用量对烟碱含量较高的白肋烟和深色晾烟也适用。测定后所用的三角瓶，要立即冲洗干净: 时间长了，活性炭不易被洗净。三种方法优缺点：1、硅钨酸重量法最准确，因为含有 26 个结晶水的硅钨酸定量的把烟碱沉淀下来，其他的生物碱如降烟碱，新烟碱，假木贼碱等不被沉淀。重量法虽然不用贵重仪器，但是对试剂和试验过程要求很严格：a 必须是 26 个结晶水的硅钨酸，b 沉淀要清洗完全，c 过虑要完全，且不能有穿虑现象。d 因为是称重，所以要形成足够多的沉淀，仅适用常量分析。2、分光光度法：准确性不及重量法，因为去甲基烟碱在 259nm 处也有吸光值，且需要贵重的紫外分光光度计，但是测定过程相对较简单，校正之后结果也具有一定的准确度，因此被定为国标法3、烟酸提取脱色法：准确性最低：因为提取杂质多，又需要活性炭脱色，从提取到比色整个过程都存在误差，但是操作简单。
