1、研究生课程论文（作业）封面（ 2009 至 2010 学年度 第 2 学期）课 程 名 称：植物显微技术课 程 编 号：2.549学 生 姓 名：李微学 号：1004250年 级： 2010 级提 交 日 期： 年 月 日成 绩：_教 师 签 字：_开课-结课：第 周-第 周评 阅 日 期： 年 月 日东北农业大学研究生部制白三叶根的解剖结构观察白 三 叶 ， 学 名 ： Trifolium repens， 为 豆 目 科 三 叶 草 属 的 多 年 生 草 本 植 物 。 别 名 ：白 车 轴 草 、 荷 兰 翅 摇 、 白 三 草 、 白 花 三 叶 草 等 。 茎匍匐，无毛，茎长 30-
2、60 厘米。掌状复叶有 3 小叶，小叶倒卵形或倒心形，长 1225 厘米，宽 12 厘米，栽培的叶长可达 5 厘米，宽达 38 厘米，顶端圆或微凹，基部宽楔形，边缘有细齿，表面无毛，背面微有毛；托叶椭圆形，顶端尖，抱茎。花序头状，有长总花梗，高出于叶；萼筒状，萼齿三角形，较萼筒短；花冠白色或淡红色，旗瓣椭圆形。荚果倒卵状椭圆形，有 34 种子；种子细小，近圆形，黄褐色。花期 5 月，果期 8-9 月。本 实 验 采 用 石 蜡 切 片 法 ， 并 结 合 番 红 、固 绿 染 色 法 对 白 三 叶 根 的 解 剖 结 构 作 了 详 细 研 究 。1.试 剂 、 材 料 及 仪 器1.1 材
3、 料 ： 白 三 叶 （ Nicotiana tabacum） 的 根1.2 仪 器 与 试 剂 ： 旋 转 切 片 机 ； 展 片 台 ； 温 箱 ； 乙 醇 ： 分 析 纯 ； 二 甲 苯 ： 分 析 纯 ；甲 醛 ： 分 析 纯 ； 冰 醋 酸 ： 分 析 纯 ； 石 蜡 。2.方 法2.1 固 定 ： 将 根 和 根 尖 切 成 0.5cm 左 右 小 段 ， 转 入 70%的 FAA 溶 液 (70%乙 醇 ： 甲醛 ： 冰 醋 酸 =90： 5： 5)中 固 定 24 小 时 以 上 待 用 。2.2 脱 水 及 透 明 ： 70%酒 精 85%酒 精 95%酒 精 纯 酒 精 纯
4、 酒 精 2/3 纯 酒 精+l/3 二 甲 苯 1/2 纯 酒 精 +l/2 二 甲 苯 1/3 纯 酒 精 +2/3 二 甲 苯 纯 二 甲 苯 纯 二 甲 苯(每 个 梯 度 透 明 2h， 其 中 95%酒 精 时 加 适 量 番 红 过 夜 ， 纯 酒 精 及 纯 二 甲 苯 为 1h)。2.3 渗 蜡 ： 第 二 步 纯 二 甲 苯 后 加 入 适 量 蜡 削 至 饱 和 ， 并 置 于 37 烘 箱 中 过 夜 。 第 二天 早 上 把 烘 箱 调 至 65 后 ， 倒 出 1/2 的 体 积 ， 再 加 入 1/2 体 积 的 纯 蜡 倒 出 1/2 体积 ， 再 加 入 1/
5、2 体 积 的 纯 蜡 倒 出 1/2 的 体 积 ， 再 加 入 1/2 体 积 的 纯 蜡 全 部 倒 出 ，加 入 纯 蜡 全 部 倒 出 ， 加 入 100%纯 蜡 (每 个 梯 度 2h， 全 部 倒 出 为 1h)。2.4 包 埋 用 预 先 用 硬 纸 折 成 的 纸 船 ， 编 号 后 ， 把 从 65 烘 箱 中 取 出 的 纯 蜡 倒 入 纸 船中 ， 用 预 热 的 镊 子 把 材 料 迅 速 置 入 纸 船 中 ， 摆 好 位 置 ， 自 然 冷 却 。2.5 修 块 及 切 片 ： 待 纸 船 中 的 蜡 完 全 凝 固 后 ， 将 蜡 块 取 出 ， 用 单 面 刀
6、 片 修 刻 成 梯 形 ，粘 附 于 小 木 块 上 。 旋 转 切 片 机 切 片 ， 厚 度 为 8m。2.6 粘 片 及 展 片 ： 在 干 净 的 载 玻 片 上 涂 微 量 粘 片 剂 (1： 1 的 蛋 白 质 与 甘 油 )， 把 蜡 带按 顺 序 置 于 载 玻 片 上 ， 滴 适 量 蒸 馏 水 ， 置 于 45 的 展 片 台 上 ， 使 蜡 带 完 全 舒 展 。2.7 烘 片 ： 将 载 玻 片 置 于 38 的 烘 箱 中 4 7 天 ， 烘 干 。2.8 染 色 ： 把 烘 干 的 载 玻 片 放 在 染 色 架 上 ， 按 下 列 步 骤 进 行 染 色 ： 纯
7、 二 甲 苯 (1h) 纯 二 甲 苯 (1min) 2/3 纯 酒 精 +l/3 二 甲 苯 (2min) 1/2 纯 酒 精 +l/2 二 甲 苯 (2min) 1/3纯 酒 精 +2/3 二 甲 苯 (2min) 100%酒 精 (1min) 90%酒 精 (2min) 85%酒 精 (2min) 70%酒 精 (2min) 50%酒 精 (2min) 30%酒 精 (2min) 蒸 馏 水 (2min) 1%番 红(5min) 蒸 馏 水 (2min) 30%酒 精 (2min) 50%酒 精 (2min) 75%酒 精 (2min) 85%酒精 (2min) 95%酒 精 (2min
8、) 0.5%固 绿 (15 30s) 95%酒 精 (2min) 100%酒 精(1min) l/2 二 甲 苯 +1/2 酒 精 (2min) 纯 二 甲 苯 (1min) 纯 二 甲 苯 (1min)。2.9 封 片 、 干 燥 及 观 察 ： 中 性 树 胶 封 片 ， 于 38 烘 箱 中 干 燥 。 Nikon 显 微 镜 观 察 并照 相 。3.结 果 与 分 析3.1 白 三 叶 根 部 横 切 面 ： 无 明 显 的 表 皮 ， 外 皮 层 细 胞 排 列 紧 密 而 整 齐 ； 细 胞 间 有 明显 空 隙 ； 能清楚地看到根的初生结构由外至内分别为皮层、维管柱、中柱鞘和木质
9、部等（ 见 图 1， A） ； 木 质 部 细 胞 少 ， 可 看 到 明 显 的 木 栓 层 和 栓 内 层 （ 见 图 1， A 和 B） 。A 1010 B 1020图 1.白 三 叶 根 部 的 横 切 面3.2 根 尖 纵 切 面 ： 根 尖 各 个 结 构 分 区 明 显 ， 有 分 生 区 、 伸 长 区 、 成 熟 区 ； 表 皮 细 胞排 列 紧 密 ， 细 胞 呈 方 形 ； 伸 长 区 内 有 明 显 的 液 泡 ， 表 皮 好 像 有 突 起 。图 2.白 三 叶 根 尖 横 切 面 10204.讨 论 白 三 叶 于 16 世 纪 后 期 在 荷 兰 首 先 栽 培
10、， 现 在 温 带 地 区 广 泛 分 布 。 喜 温 暖 湿 润 气候 ， 适 应 性 广 ， 耐 酸 性 强 ， pH4.5 的 土 壤 仍 能 生 长 ， 除 盐 碱 土 外 ， 排 水 良 好 的 各 种土 壤 均 可 生 长 。 再 生 性 好 ,耐 践 踏 ,属 放 牧 型 牧 草 。 所 以 其 根 部 细 胞 排 列 紧 密 ， 间 隙 大 ，木 质 部 发 达 ， 表 皮 层 较 厚 ， 能 够 适 应 酸 性 环 境 。 根 部 结 构 与 其 生 长 习 性 密 切 相 关 。制 作 石 蜡 切 片 如 用 番 红 固 绿 染 色 法 ， 其 操 作 过 程 可 做 如
11、下 调 整 ： 将 在 95%乙 醇加 番 红 过 夜 ， 改 为 在 1/2 纯 酒 精 +l/2 二 甲 苯 加 番 红 过 夜 。 这 样 有 如 下 优 点 ： 1） 时 间安 排 上 完 全 可 行 ， 虽 然 时 间 跨 度 为 11 个 小 时 ， 但 中 间 休 息 时 间 相 对 充 分 ； 2） 可 减少 在 后 续 步 骤 中 乙 醇 将 过 多 的 番 红 洗 脱 下 来 ， 保 证 修 块 时 材 料 与 石 蜡 颜 色 对 比 明 显 ；3） 1/2 纯 酒 精 +l/2 二 甲 苯 既 含 有 酒 精 又 含 有 二 甲 苯 ， 长 时 间 与 材 料 接 触 既
12、 可 以 保 证 材料 充 分 脱 水 ， 又 能 使 二 甲 苯 充 分 进 入 材 料 ， 为 下 一 步 浸 蜡 做 好 准 备 。番 红 固 绿 染 色 法 染 色 时 ， 需 要 先 复 水 染 番 红 ， 再 在 95%酒 精 时 染 固 绿 ， 再 用 二甲 苯 透 明 。 这 样 既 费 时 ， 又 费 酒 精 、 二 甲 苯 等 实 验 耗 材 。 因 此 ， 可 以 考 虑 用 其 它 浓 度的 试 剂 配 制 番 红 和 固 绿 ， 并 调 整 染 色 时 间 ， 以 达 到 在 最 段 时 间 内 、 用 最 少 的 试 剂 达 到 与原 方 法 相 同 、 甚 至 是 更 好 的 染 色 效 果 。通 过 本 实 验 的 学 习 实 践 不 仅 使 我 学 会 了 番 红 固 绿 的 染 色 方 法 和 石 蜡 切 片 的 制 作 方法 ， 还 掌 握 了 一 种 对 植 物 生 理 生 态 结 构 进 行 解 剖 学 观 察 的 新 方 法 ， 对 以 后 的 植 物 病 理 分析 的 多 样 性 奠 定 了 基 础 。
