1、It is prohibited to use, disclose or copy this document without authorization.严禁任何无授权使用、泄露或复印。质粒丢失率检测 SOP文件编号Document No. SOP.AD.VE.02.08版本号Version No. 01职务或岗位 Title 姓名 Name 签名 Signature 日期 Date起草人/修订人Drafted By 分析工程师 穆玲玲 年 月 日审核人Reviewed By 分析主管 王涛 年 月 日审核人Reviewed By QA 专员 丁敏 年 月 日审核人Reviewed By 年
2、 月 日审核人Reviewed By 年 月 日审核人Reviewed By 年 月 日批准人Approved By 分析副总裁 朱祥平 年 月 日批准人Approved By QA 副总监 梅林 年 月 日生效日期Valid Since 年 月 日颁发部门Issued by 质量保证部复审日期Review Date 年 月 日文件拷贝号Copy No.文件分发至Distributed to质量保证部 分析开发部 生产部 行政办公室 财务部 技术转移部 药品注册部 工程部 人力资源部 IT 部 文件名称Document Name 质粒丢失率检测 SOP文件编号Document No. SOP.
3、AD.VE.02.08版本号Version No. 01文件页数Pages 2/5It is prohibited to use, disclose or copy this document without authorization.严禁任何无授权使用、泄露或复印。目录1. 目的 Purpose.32. 范围 Scope .33. 定义 Definition .34. 职责 Responsibilities .35. 引用标准 Reference to standard .36. 材料 Materials.37. 流程图 Flow Chart.38. 程序 Procedure.39. EH
4、S .410. 派生记录 Derived records .411. 相关文件 Reference documents .412. 注意事项 Notes.513变更记载 Change record .5文件名称Document Name 质粒丢失率检测 SOP文件编号Document No. SOP.AD.VE.02.08版本号Version No. 01文件页数Pages 3/5It is prohibited to use, disclose or copy this document without authorization.严禁任何无授权使用、泄露或复印。1. 目的 Purpose规
5、程描述了质粒丢失率检测的标准操作方法及步骤，使其检测操作规范化、标准化。2.范围 Scope适用于本公司重组人源化抗 VEGF 单克隆抗体（Fab）发酵时，诱导前与加热前的质粒丢失率检查。3. 定义 DefinitionE.coli：Escherichiacoli 大肠杆菌CFU：Cell Forming Unit 细胞形成单位Kana：Kanamycin 卡那霉素4. 职责 Responsibilities分析部负责维护本规程，分析主管，QA负责确保依据本规程实施。5. 引用标准 Reference to standard中国药典2015年版三部附录 G 质粒丢失率检查法。6. 材料 Mat
6、erials6.1 仪器全自动高压灭菌锅，超净工作台，37培养箱。6.2 试剂胰蛋白胨，酵母粉，NaCl，琼脂粉和卡那霉素溶液以及无菌的 PBS。6.3 器材蓝盖瓶，试管，空平皿，酒精灯，涂布器，移液器，枪头等。6.4 培养基的配制6.4.1 LB 固体培养基6.4.1.1 称取胰蛋白胨 2.50g、酵母粉 1.25g、NaCl2.50g、琼脂粉 2.50g 于蓝盖瓶中，加 Milli-Q 水至 250 mL，于高压蒸气灭菌锅内 121灭菌 20 min。6.4.1.2 30左右上述培养基在超净工作台里分装到空平板中，每个分装大约 15-20ml，凝固后放 28冰箱中可以保存一个月。6.4.2
7、 含卡那霉素的 LB 固体培养基6.4.2.1 将卡那霉素 250L(浓度为 50mg/ml)加入冷却至 30左右的 LB 固体培养基中，混匀，使其工作浓度为 50g/ml。文件名称Document Name 质粒丢失率检测 SOP文件编号Document No. SOP.AD.VE.02.08版本号Version No. 01文件页数Pages 4/5It is prohibited to use, disclose or copy this document without authorization.严禁任何无授权使用、泄露或复印。6.4.2.2 30左右上述培养基在超净工作台里分装到空
8、平板中，每个分装大约 15-20ml，凝固后放 28冰箱中可以保存一个月。注 ： 配 制 体 积 可 根 据 需 求 成 比 例 增 加 。7.流程图 Flow Chart无。8. 程序 Procedure8.1 诱导 前 的 菌 体 质 粒 丢 失 率 检 测8.1.1 用移液器吸取 100L 诱导 前 的 菌 体 ， 加 入 无 菌 PBS 900L， 稀 释 至 10-1， 以 此 类 推 稀 释 至 10-8；8.1.2 用移液器分别吸取 100L 的 10-6、 10-7 、 10-8 稀 释 度 的 菌 液 ， 分 别 涂 布 到 LB 固 体 培 养 基 平 板 上 ， 置37
9、培 养 箱 中 培 养 17 小 时 ；8.1.3 挑取 100 个生长良好的单菌落，分别接种到 LB 固 体 培养基和含卡那霉素的 LB 固 体 培养基平板上，置 37 培 养 箱 培 养 12-15 小 时 ；8.1.4 计 算 质 粒 丢 失 率 ： =（ LB固体培养基上的菌落数 -含 卡那霉素 LB固体培养基上的菌落数 ）LB固体培养基上的菌落数 100%8.2 加热前的菌 体 质 粒 丢 失 率 检 测8.2.1 用移液器吸取 100L 加热前 的 菌 体 ， 加 入 无 菌 PBS 900L， 稀 释 至 10-1， 以 此 类 推 稀 释 至 10-6；8.2.2 用移液器分别
10、吸取 100L 的 10-4、 10-5 、 10-6 稀 释 度 的 菌 液 ， 分 别 涂 布 到 LB 固 体 培 养 基 平 板 上 ， 置37 培 养 箱 中 培 养 17 小 时 ；8.2.2 挑取 100 个生长良好的单菌落，分别接种到 LB 培养基和含卡那霉素的培养基上，置 37 培 养 箱 培养 12-15 小 时 ；8.2.4 计 算 质 粒 丢 失 率 :=（ LB固体培养基上的菌落数 -含 卡那霉素 LB固体培养基上的菌落数 ）LB固体培养基上的菌落数 100%8.3 判 定 标 准无 。8.4 记 录填写质粒丢失率检测记录。9. EHS无。10.派生记录 Derive
11、d records质粒丢失率检测记录文件名称Document Name 质粒丢失率检测 SOP文件编号Document No. SOP.AD.VE.02.08版本号Version No. 01文件页数Pages 5/5It is prohibited to use, disclose or copy this document without authorization.严禁任何无授权使用、泄露或复印。11. 相关文件 Reference documents高压灭菌锅使用 SOPSW-CJ-1FD 超净工作台使用 SOP12. 注意事项 Notes无。13变更记载 Change record版本号Revision No.变更号CR No. 描述Description生效日期Valid Since年月日年月日
