1、饲 料 学 实 验 指 导王艳青 齐智利华中农业大学动物营养与饲料科学系目 录实验一 饲料样品的采集与制备 1实验二 饲料中水分的测定 3实验三 粗脂肪的测定 4实验四 饲料燃烧热的测定 5实验五 粗蛋白的测定- 凯氏定氮法 8实验六 饲料容重测量 9实验七 粗灰分的测定 10实验八 钙的测定（高锰酸钾法） 11实验九 饲料中总磷量的测定 13实验十 饲料中水溶性氯化物的测定（快速法） 14实验十一 饲料中粗纤维的测定 141饲料样品的采集与制备一、 样本的采集与制备的意义采样从大量的饲料中采取供分析用少量样本的过程。制样把采集的初级样本按一定的方法与要求（如四分法或等格分取法将初级样本缩减，
2、将湿样本制备成风干样，并粉碎、过筛等）进行处理，制成分析样本的过程。饲料化学分析结果的可靠性，不仅取决于化学分析本身的准确性，更重要的还取决于样本的采集与制备。饲料的化学成分因饲料的品种、生长阶段、栽培技术、土壤、气候条件以及加工调制和贮存方法等因素不同而有很大的差异，甚至在同一植株的不同部位差异也很大。但在一般情况下，均以少量样本的分析结果评定大量饲料的营养价值，所以，采集的饲料样本必须具有代表性。二、 名次概念1.初级样本：从大量的饲料中，在不同的位置（点）和深度（层次）所取样本的总和。2.次级样本：初级样本经充分混匀后，按一定的方法缩减为少量，携入实验室供用，即为次级样本。其量因饲料而异
3、，风干后一般应有 120-200g。3.分析样本：风干样品经粉碎、装瓶，被作分析用的样本。其量应不小于 120g 。4.分析称样：从分析样本中称取一定量，供测定分析用。其量根据分析项目而定。三、取样方法1.四分法取样：多用于将初级样本缩减为次级样本，或将次级样本缩减为分析样本。用于粉状、粒状或切短的粗饲料的缩减。2.等格分取法取样，适用于青饲料的初级样本的缩减，将初级样本迅速切碎，混匀，铺成正方形，划分为若干小块，取出的样品为次级样本。四、 采样饲料的差异越大，使采样具有代表性的手续愈复杂。1.籽实、糠麸及粉状饲料（1）饲料堆上采样，至少选 5 点，每点分布于三层（上层在表面以下 10cm 处
4、，中层在中间，下层在地层以上 10cm 处） 。每点取样量为 0.2kg 以上，总量不少于 1kg（初级样本） 。（2）袋中取样，选取 5 袋以上（每隔 2 或 4 或 6 或 8 或 10 袋取一袋） ，然后从袋子的不同深度取样，每袋取 0.2kg 以上，总量不少于 1kg（初级样本） 。将采集的初级样本用四分法缩减为 200g 以上，估计含水量大于 15时需取两份，一份测干物质，一份制备风干样。再将次级样本粉碎，制成分析样本，装瓶，待测。2.青绿饲料2（1）田间采样因植株高低，生长的均一程度，密度大小不同而异。高植株作物宜采用“株选” ，低植株作物多采用“段选” 。若长势和密度均一时，可按
5、对角线或平行线等距离选点。反之，依照生长强度以及密度均匀程度，按比例选点。取多点、多株、多段样本混合。小株植物可少取，大株植物可多取；长势均一者少取，反之则多取。每 10 亩地至少选10 个点，采用“把选” 、 “段选”或“株选” ，若采用株选，需增加点数。样本总量不得低于 10kg，刈割高度应距地面 5cm。（2）饲前采样将青饲料刈割切碎，饲喂前每次按 5 点取 2kg 样本，测定干物质，并制备风干样。分阶段采样 4-5 次，将每次的风干样混合均匀，用四分法取分析样本 200g 以上。（3）干草和藁秆饲料a.堆垛采样：在垛的各个侧面选取 10 个以上的点，在每个样点的 30-50cm 深处取
6、样，总量应不少于 20kg。b.草捆内采样：在不同位置选 5 捆以上，不得少于总捆数的 3，打开后从外到内采15-20 株。c.饲前采样：在铡短的草堆中多次重复取样，总量不少于 20kg。将采集的初级样本铡成 2-3cm，混匀，以等格分取法取 200-1000g 次级样本。严禁从堆垛、草捆中用力拉扯饲料，以免叶片、幼嫩部分脱落。（4）青贮饲料a.圆形窖表层 0.5m 以下，底层 0.5m 以上的不同深度处以及同一平面的不同点分阶段采样 3-5次。每次以窖中心为圆心，在距离窖壁 30-50 cm 处画一圆圈，然后由圆心及互相垂直的两直径与圆圈相交的各点进行采样，每点用锐刀切取 202020cm3
7、 的饲料块。b.长方形青贮窖取样从窖的不同垂直切面取样 3-5 次，除去上部草层 50cm，在距离窖两壁及窖底各 30-50cm 处作四边形，再将各边中点相连，在各线相交点采样。c.1m 一下的断面上取 10010020 cm3 的饲料块。每次将样本混合，用等格分取法缩减至 2000g，测定干物质，制备风干样。将各次的风干样混匀，粉碎，用四分法取 200g 装瓶备用。（5）块根、块茎和瓜果类饲料在田间或贮藏窖的不同位置随即采集新鲜完整的样本约 30kg，粗略清楚泥土及夹杂物，按大、中、小分堆，等比例随机取出 10kg 初级样本，带回实验室洗去泥土（勿伤表皮） ，用毛巾揩去表水。每个从上至下纵切
8、，取对角线的 1/4、 1/8 或 1/16 约 2kg 次级样本，分为两份，一份用以测定干物质，一份用以制备风干样。（6）块状饲料，选出 5 块。3a：圆形，等分为 6 块、8 块或 32 块，用力刀或锯取对角两块，共计 10 块。b：方形，用锯取对角二长条，共计 10 条。c；穿孔法取样五、 样本处理（1）脱去自由水，制备风干样，含水量在 15以上的样品。（2）粉碎，40 目筛（孔径 0.42mm） 。粉碎前应将粉碎机清洁干净，最先粉碎的样本弃去。（3）装入磨口瓶，贴标签。样品名称、制备日期、制备人和采样地点。六、 样本保存（1）干燥黑暗处，样本室内的温度和湿度力求稳定。（2）若需长期保存
9、，可用纸包少量樟脑放入瓶中。（3）长期保存的样本瓶，标签应涂蜡，瓶塞要密封。饲料中水分的测定一、原理试样在（1052）烘箱内烘干至恒重，失去的质量为水分。二、主要的仪器设备（1）植物样品粉碎机（2）分析天平（3）电热式恒温烘箱（4）干燥器三、样品的选取和制备（1）选取有代表性的原始样品不少于 1000g。按四分法缩减到 500g，再缩至 200g，风干或 60烘干，用植物样品粉碎机（0.45mm）粉碎。（2）多汁的鲜样，如青贮、牧草等，应制成风干样品：用已知重量的瓷盘称取 200-300g（准确至 0.0lg）鲜样， 120烘 15min，使酶灭火，立即将瓷盘移入 65烘箱内烘 8-12h，取
10、出，在空气中冷却回潮 24h，称量。直至两次称重之差不超过 0.5g 为止，失重即初水分。 10鲜 样 本 重风 干 样 重 ）（ 鲜 样 重初 水 分 （ ） 四、测定步骤（1）将称样皿洗净，105烘 1h，干燥器内冷却 30min，称量。再烘 30min，冷却，称量，直至两次称量之差小于 0.0005g 为恒重。（2）称取 25g 样品，均匀平摊在已恒重的称量皿中。在(1052) 恒温烘箱内烘干424h 取出，放在干燥器内冷却 30min，称量，再烘 1h，冷却、称量。直至两次称量之差小于 0.002g 为恒重。五、计算 10)(122mOHww（H 20）饲料中水分的质量分数，；m110
11、5烘干前试样和称量皿总质量， g；m2105烘干后干物质和称量皿总质量， g；m0105烘干的称量皿质量， g。含水量在 10%以上，允许相对偏差为 1%；含水量在 5%-10%，允许相对偏差为 3%；含水量在 5%以上，允许相对偏差为 5%。六、注意事项（1）多汁的鲜饲料样品，应先测定初水分 10)(2120mOHw式中：w 0（H 2O）饲料初水分的质量百分数，；m1鲜样质量，g；m265烘干后干物质质量， g。)()(%10)()( 22020 OHwoT （2）奶制品和动植物油脂样品中水分的测定，多采用减压蒸馏法。（3）脂肪含量高的样品，烘干时间长反而增重，是脂肪氧化所致。（4）含糖分
12、高、脂肪高、易氧化或焦化样品，应使用减压干燥法或冷冻干燥法测定水分。（5）含水量相差很大的样品不应该放在同一个烘箱中干燥。粗脂肪的测定一、原理根据饲料样品中脂肪不溶于水而溶于有机溶剂的特性，用无水乙醚做提取剂，使样品在乙醚中反复浸提，脂肪溶于乙醚并收集于盛醚瓶中，根据饲料样品的质量在抽提前后的变化，求出醚浸出物的含量，即粗脂肪的含量。二、主要的仪器设备1.电热恒温水浴锅2.鼓风电热烘箱53.索氏脂肪提取器三、试剂无水乙醚（AR） 。四、分析步骤（1）选取有代表性的试样，用四分法缩减至 200g，风干或 65烘干后粉碎，过0.42mm 试验筛。（2）样品烘干：称取 12g（准确至 0.0002g
13、）饲料样品，置于已编号的中速定量滤纸包中，105烘 3h，冷却 30min 后称量。（3）抽提：将滤纸包放人抽提器内，加入无水乙醚，滤纸包应完全浸入乙醚，同时打开冷凝水管水流，6575水浴加热，乙醚沸腾后蒸发，乙醚蒸气至冷凝管处冷凝为液体流回抽提腔。当浸提管中乙醚积聚到一定高度时，可由虹吸管回流至盛醚瓶内，周而复始，反复浸提。抽提时间视样品中脂肪含量而定，一般为 624h，直至抽提干净为止。 （点滴对比法：用干净表面皿分别点滴萃取液和未抽提乙醚各 1 滴进行痕迹对比，差异不大时认为脂肪已抽提干净。（4）将滤纸包取出，放置在干净的表面皿上，让乙醚在通风处充分挥发后放入原铝盒中，在 105烘干 1
14、2h，冷却 30min 后称量，直至恒重。五、计算EE（）= 1021mml脱脂前滤纸包质量，g；m2脱脂后滤纸包质量，g ；m风干试样质量，g。粗脂肪含量在 10%以上，允许相对偏差为 3%，粗脂肪含量在 10%以下，允许相对偏差为 5%。六、注意事项1.乙醚易燃烧，实验室内严禁明火。2.包滤纸包时，将手洗净，戴手套操作。3.滤纸包要用铅笔编号。4.无水乙醚应不含有水分及其他杂质。饲料燃烧热的测定饲料的燃烧热即饲料所含总能(GE)，是饲料在燃烧过程中完全氧化成最终的尾产物（CO 2， H2O 及其他气体）所释放的热能。单位质量物质的燃烧热为该物质的热价值，单位：kJ g。61.实验目的：了解
15、氧弹式热量计的简单结构，饲料热的测定原理和具体操作步骤。2.原理在绝热条件下，1mo1 有机物完全燃烧所产生的热量，称为该物质的燃烧热。将饲料在氧弹内通入氧气使其完全燃烧，测定该氧化反应放出的热量，从而计算单位质量物质放出的热能，称为该物质的热价值或总能（GE） 。3.主要的仪器设备（1）植物样品粉碎机（2）压样机。（3）绝热型氧弹热量计（4）氧气钢瓶4.试剂 （1）苯甲酸（2）镍铬燃烧丝（3）氧气5.测定步骤5.1 准备工作（1）样品的准备：采集的饲料样品用四分法缩减至 200g，经粉碎，过筛，用压样机压成 0.51.0g 的小片，放人干燥器，备用。（2）坩埚的准备：将坩埚洗净烘干，用铅笔编
16、号后置于高温炉中 550-600灼烧30min 后放在干燥器中冷却称量。（3）引火丝的准备：量取 10cm 的引火丝数根，然后称量求其平均值备用。（4）加水及充氧：将压好的样品片于 105烘干 4h，冷却，称量(m)，放人铂坩埚内。把铂坩埚移至氧弹电极支架上，将连接在两根电极柱上的 10cm 长镍铬燃烧丝的中部接近样品。然后向氧弹底部加 10mL 水，把电极装入氧弹内，套上垫圈，旋紧弹帽，经减压阀慢慢向氧弹内充氧气至 0.5MPa，使空气排尽，再充压至 2.0MPa。（5）内外水套的准备及热量计的安装：将自动容量筒中准备好的 2000g 纯水(室温) 注入内套筒中，主机的外套应充满水，调节外套
17、温度并控制到适当位置，使其温度高于内套水温 05-07。一般情况下冬季设定室温 1819，夏季设定室温 20-25。氧弹应放在内筒的合适位置，勿使搅拌器的叶子与内筒或氧弹接触。然后插上电极鞘，盖上盖子，调节贝克曼温度计。5.2 测定工作接通电源开关，开动搅拌器，开始进行测定。（1）燃烧前期：是热量计与外界环境热交换的平衡期。搅拌器开动 3-5min 后，等水温均匀后开始记录温度，每分钟 1 次，当温度接近恒定时，连续 3 次温差不超过 0.001为7止，最后一次读温是初始温度。（2）燃烧期：点火，样品开始燃烧，产生的热经氧弹壁迅速传至周围的水中，水温上升，此时应半分钟读温一次。直至温度不再上升
18、为止，燃烧即将结束。（3）燃烧后期：燃烧结束即为末期的开始，首先将计时装置拨至 1 分钟处，待温度稳定后开始读数，连续 3 次温差不超过 0.001时为止。5.3 结束工作测定结束后，停止搅拌，关闭电源，小心取下贝克曼温度计，擦干后放好，然后打开盖子，拔去电极鞘，从内筒取出氧弹。把取出的氧弹排气阀打开，慢慢放出废气。旋开氧弹帽，取出电极头。从弹头电极上小心取下未燃烧完的镍铬燃烧丝，拉直测量其剩余长度。用洗瓶冲洗氧弹体内壁、弹盖内面、电极柱和铂坩埚 2、3 次。用水冲洗氧弹各内壁，擦干，准备测定下一个样品。6结果计算饲料样品的燃烧值或总能 E 下式计算E=（K（T-T 0） ）- gb）/m式中
19、：E饲料样品的总能，MJg；m试样质量，g；K热量计的热容，MJ；g引火丝质量b引火丝热值T末期最终温度T0初期最终温度每试样取两个平行样测定，取平均值，允许相对偏差5。7注意事项(1）氧弹和内水套均系金属铸造，注意保护各抛光面，防止划痕变形，否则影响测定结果的准确度。(3)仪器一旦调试后，使用人员应严格遵守上述操作步骤，非经实验室指导教师许可不得擅自调试或旋动其他阀门或开关。(4)温度的测定要使用贝克曼温度计，属于精密测温仪器，最小刻度为 0.01，用放大镜可读至 0.001。8、水当量的测定概念：水当量是热量计整个体系的热容量。原理：热量计整个体系的热容量，为了计算方便，用相当于水的质量。
20、即使整个体系温度上升 1 度所需要的热量，使多少克水温度上升 1 度。方法：用有一定已知热值的纯有机化合物来代替饲料样品， ，如苯甲酸 ，蔗糖等。水8当量测定结果不少于 5 次，且每次测定值不超过平均值的0.1%。热量计的热容量又称水当量；它是用标准热值物质(如苯甲酸) 来测定的，测定的步骤同样品测定步骤，用苯甲酸代替样品。热量计的热容 K 按下式计算K=（Qa-gb）/（ T-T0）式中：K热量计的热容， MJ；Q苯甲酸标准热值 26.46，MJ g；a苯甲酸质量；g引火丝质量b引火丝热值T末期最终温度T0初期最终温度粗蛋白的测定- 凯氏定氮法1. 原理用浓硫酸将含氮化合物转化为硫酸铵，将生
21、成的硫酸铵在强碱性条件下蒸馏出氨，经硼酸溶液吸收，再用标准酸溶液滴定，将测得的氮含量乘以换算系数 6.25，即粗蛋白的含量。2. 主要的仪器设备（1）实验室样品粉碎机（2）可调电炉（3）凯氏烧瓶（4）凯氏蒸馏装置3试剂（1）硫酸(AR)。（2）混合催化剂：硫酸铜（CuS0 45H20）与硫酸钾或硫酸钠按 1：15 混合后磨碎（3）40氢氧化钠溶液：称取 40g 氢氧化钠溶于 100mL 蒸馏水中。（4）2硼酸溶液：称取 20g 硼酸（H 3B03，AR）溶于 1000mL 蒸馏水中。（5）混合指示剂：将 0.1甲基红乙醇溶液与 0.5溴甲酚绿乙醇溶液，按 1：1 等体积混合。（6）0.1000molL 盐酸(HCl)标准溶液：取 8.3mL 盐酸（AR）注入 1000mL 蒸馏水。用无水碳酸钠（280烘干）标定。称取无水碳酸钠 0.2000g，溶于 50mL 水，加混合指示剂，用 0.1molL 盐酸滴定至暗红色。同时滴定空白，加以校正。（7）蔗糖(AR)。（8）硫酸铵(AR)。
