1、植物保护学院农药系 农药生物测定实验 姜兴印农药生物测定实验指导（自编试用 1.0）主 编：姜兴印副主编：赵春青 张卫光制药工程专业用山东农业大学植物保护学院2008 年 9 月植物保护学院农药系 农药生物测定实验 姜兴印1棉铃虫人工饲料制备一、实验目的学习棉铃虫人工饲料制备技术和方法。本方法还适合玉米螟等人工饲料的制备。二、实验用品和仪器设备仪器设备：天平、高压灭菌器、罐头瓶、电饭锅、筛子（40 目） 、量筒、搪瓷盘、温度计实验物品：小麦粉、玉米粉、黄豆粉、啤酒酵母粉、琼脂、棉叶、V C、棉油、苯甲酸钠、山梨酸钾、兽用链霉素、水等三、实验方法1. 配方：用料 用量（g） 用料 用量（g）小麦
2、粉 300 琼脂 45玉米粉 300 山梨酸钾 10大豆粉 200 苯甲酸钠 5棉叶（风干） 35 链霉素 200 万单位Vc 10 棉油 5ml酵母粉 80水 2000ml2. 小麦粉、玉米粉、黄豆粉、酵母粉和棉叶装入罐头瓶中，高压灭菌40min.（120）3. 水+ 琼脂煮开冷却至 70，加入 Vc、防腐剂、棉油混匀，再加入混合好的其他成分，充分混匀。4. 倒入搪瓷盘，加盖冷却后放入冰箱中备用。四、质量检查饲料冷却后观察颜色和固化成型情况。植物保护学院农药系 农药生物测定实验 姜兴印2五、实验报告农药生物测定药剂配制一、实验目的学习生物测定药剂配制的实验操作技术和方法。二、实验用品和仪器设
3、备电子天平、计算器、烧杯、移液管、吸耳球、记号笔、容量瓶、量筒等。实验原药：93%顺式氯氰菊酯，95%吡虫啉实验制剂： 50%多菌灵 WP，2.5%功夫 EC(w/w)，33%施田补 EC(w/v)三、实验方法1. 原药母液的配制与稀释（1）用丙酮配制 2顺式氯氰菊酯母液 50mL，然后稀释成 200mg/L 50mL丙酮液。（2）用丙酮配制 1吡虫啉母液 50mL，然后稀释成 125mg/L 50mL 丙酮液（3）将顺式氯氰菊酯和吡虫啉按照 5：2 的比例混合，配制 1.5%混剂50mL 丙酮液。2. 制剂的稀释（1）50% 多菌灵 WP，稀释成 200mg/L 100mL 的水溶液（烧杯）
4、 。（2）2.5% 功夫 EC，稀释成 1000mg/L 100mL 的水溶液（烧杯） 。（3）33% 施田补 EC，稀释成 150mg/L 100mL 的水溶液（烧杯） 。四、结果计算和处理将以上每一种母液配制和稀释需要原药和制剂的量计算，并详细描述配制和稀释过程。五、实验报告撰写实验报告。植物保护学院农药系 农药生物测定实验 姜兴印3杀虫剂毒力测定微量点滴法一、实验目的学习微量点滴法测定杀虫剂触杀毒力的实验操作技术和方法，学习和使用微量点滴仪。二、实验用品和仪器设备生化培养箱、电子天平、计算器、微量点滴仪、烧杯、移液管、养虫盒、镊子、滤纸、记号笔、容量瓶等。实验药剂：顺式氯氰菊酯，2.5、
5、5.0，10，20，40mg/L实验材料：玉米螟 5 龄幼虫三、实验方法1. 药剂配制与稀释用丙酮配制 1顺式氯氰菊酯母液，然后稀释成系列浓度。2. 试虫选取与称重选择个体大小一致的 5 龄幼虫，每个处理浓度 3 次重复，每个重复 20 头幼虫，电子天平称重求平均虫重。3. 微量点滴仪的使用方法和注意事项4. 药剂点滴点滴部位：幼虫前胸背面，点滴量 1.0uL 左右，以溶剂处理为对照。5. 点滴后的幼虫放置在养虫盒内，5 头/盒，饲喂人工饲料，置于 28的生化培养箱中。四、结果检查和处理处理 48h 后检查死亡数，用毛笔尖端或尖头镊子轻轻触动虫体，以不能正常爬行者为死亡。计算死亡率和校正死亡率
6、，并求毒力回归方程和 LD50 值。五、实验报告撰写实验报告，并对实验结果进行讨论分析。植物保护学院农药系 农药生物测定实验 姜兴印4杀虫剂毒力测定浸渍法一、实验目的学习浸渍法（浸虫和浸叶法）测定杀虫剂触杀毒力和胃毒毒力的实验操作技术和方法。二、实验用品和仪器设备生化培养箱、电子天平、计算器、浸虫器、烧杯、移液管、养虫盒、镊子、滤纸、记号笔、容量瓶等。实验药剂：80氟虫腈 WG 实验材料：小菜蛾 3 龄幼虫，甘蓝叶片三、实验方法1. 药剂配制与稀释将药剂稀释 1.0105，2.0105，4.0105，8.0105，以清水为对照。2. 采用浸渍法先将甘蓝叶片在不同浓度的药液中处理 35s，放在报
7、纸上晾干，放在养虫盒里，每盒 1 片。3. 用浸虫器将小菜蛾幼虫在药液中浸渍处理 35s，每一浓度处理 30 头，分为3 次重复，每一重复 10 头幼虫放在 1 个养虫盒内。4. 28生化培养箱饲养。四、结果检查和处理处理 3d 后检查结果，用毛笔尖端或尖头镊子轻轻触动虫体，以不能正常爬行者为死亡。计算死亡率和校正死亡率，并求毒力回归方程和 LC50 值。五、实验报告撰写实验报告，并对实验结果进行讨论分析。植物保护学院农药系 农药生物测定实验 姜兴印5杀虫剂触杀毒力测定-滤纸片药膜法一、实验目的学习滤纸片药膜的准备方法和利用药膜测定杀虫剂对鳞翅目初孵幼虫的毒力。二、实验用品和仪器设备电子天平、
8、计算器、烧杯、移液管、吸耳球、记号笔、容量瓶、量筒、滤纸、大头针、泡沫板、毛笔、培养皿、秒表、丙酮、石油醚、缝纫机油等。实验原药：90%辛硫磷原油实验材料：玉米螟初孵幼虫三、实验方法1.混合溶剂的配制丙酮：石油醚：缝纫机油1：3：12.原药母液的配制用混合溶剂配制 1辛硫磷母液 50mL。3.药膜的制备取直径 9cm 滤纸，放于用三根大头针做成的支架上，吸取 1mL1%辛硫磷母液，从滤纸中心向外均匀环形滴加，使其充分湿润，待溶剂挥发后，放于直径 9cm 的培养皿内备用，以混合溶剂处理为空白对照。4.初孵幼虫的处理用软毛笔迅速挑取玉米螟初孵幼虫 30 头于滤纸上，并立即计时，培养皿的一侧加一微光
9、源，玉米螟由于有趋光性，会迅速爬向光照得一方，不断转动培养皿，使玉米螟保持爬动，以不能爬动的为死虫，观察幼虫击倒时间及头数，重复 3 次。四、结果计算和处理计算各个处理幼虫的击倒率和校正击倒率，求得毒力回归方程和击倒中时(KT50)。五、实验报告植物保护学院农药系 农药生物测定实验 姜兴印6撰写实验报告，并对实验结果进行分析和讨论。杀螨剂毒力测定浸玻片法一、实验目的学习浸玻片法测定杀螨剂的实验操作技术和方法。本方法适合测定螨体背部刚毛较短的各种雌成螨。二、实验用品和仪器设备生化培养箱、电子天平、计算器、双目解剖镜、烧杯、移液管、载玻片、双面胶带、零号毛笔、记号笔、搪瓷盘、吸水纸、薄海绵、剪刀等
10、。实验药剂：2.5功夫乳油，2000、4000、8000、16000、32000实验材料：山楂叶螨三、实验方法1. 将双面胶带剪成 2cm 长，贴在载玻片的一端。2. 用零号毛笔挑起 34 日龄的雌成螨，迅速将其背部粘在胶带上，每行粘 10头，粘 23 行。3. 双目解剖镜仔细观察粘在胶带上的螨，用毛笔除去粘在胶带上不规则的螨，如足、腹面、头部等粘在胶带上，只保留符合规定的雌成螨。25，相对湿度80左右的条件下放置 4h 后，再用解剖镜观察，足能够正常活动的个体符合实验要求，去除不合格的其它个体，并记录存活个体数。4. 用水将实验药剂配制成 5 个系列浓度，置于 100mL 烧杯中，用手持玻片
11、无螨的一端，将粘有螨的一端在药液中浸渍 5s，取出后用吸水纸吸去多余的药液。对照用清水处理。每个处理重复 34 次。5. 在搪瓷盘中铺设厚度为 1.0cm 的海绵或吸水纸，其上铺蓝布，加水湿透海绵（或吸水纸）和蓝布，不要积水。将玻片平放在上面，置于 25的生化培养箱中。四、结果检查和处理处理 24h 后检查死亡数，用毛笔尖端轻轻触动螨足，以不动者为死亡。计算死亡率和校正死亡率，并求毒力回归方程和 LC50 值。植物保护学院农药系 农药生物测定实验 姜兴印7五、实验报告撰写实验报告，并对实验结果进行讨论分析。杀菌剂室内毒力测定生长速率法一、实验目的学习生长速率法测定杀菌剂室内毒力的实验操作技术和
12、方法。二、实验用品和仪器设备生化培养箱、电子天平、计算器、直尺、培养皿、烧杯、移液管、打孔器（直径 0.5cm） 、移菌环、酒精灯、记号笔、容量瓶、三角瓶（50mL、250 mL） 、超净工作台、PDA 培养基、微波炉、高压灭菌器、电饭煲、马铃薯、葡萄糖、琼脂等。实验药剂：95%乙霉威原药 实验材料：灰葡萄孢菌三、实验方法1. PDA 培养基的制备和灭菌，培养皿、移液管、三角瓶（50mL）灭菌。2. 灰葡萄孢菌的培养PDA 平板培养灰葡萄孢菌，菌落生长达 2/3 皿。3. 药剂配制与稀释先将原药用丙酮配制 1%母液，再用丙酮稀释成25、50、100、200、400mg/L，以丙酮为对照。4.
13、带药 PDA 平板的制备和接菌在无菌的超净工作台上，50mL 三角瓶中准确加入 4.0mL 药液，再加入冷却至 50左右融化的 PDA 培养基至 50mL 刻度线，迅速摇匀后平均倒入到 3 个直径 9cm 的培养皿中，制备成带药平板，每个浓度 3 次重复。以丙酮为对照。用灭菌的打孔器在灰葡萄孢菌菌落的边缘打取菌饼，接入到带药平板中央。25生化培养箱培养。四、结果检查和处理处理 3d 后检查结果，用直尺测量菌落直径，计算各处理的抑制率，并求毒力回归方程和 EC50 值。植物保护学院农药系 农药生物测定实验 姜兴印8五、实验报告撰写实验报告，并对实验结果进行讨论分析。杀菌剂毒力测定圆叶片法一、实验
14、目的学习利用圆叶片法测定杀菌剂对黄瓜霜霉病菌生物活性的基本要求和方法。二、实验用品和仪器设备光照生化培养箱、电子天平、计算器、烧杯、移液管、容量瓶、培养皿、玻棒、镊子等。实验药剂：霜霉威，烯酰吗啉等试验菌种：黄瓜霜霉病菌（pseudoperonospora cubensis） 。实验材料：黄瓜叶片三、实验方法1. 黄瓜霜霉病菌孢子悬浮液的制备室内用无菌水洗涤黄瓜霜霉病病叶的孢子，经过离心除去孢子梗等杂质，并稀释成 1105 个孢子/mL 孢子悬浮液，保存于 4冰箱中备用。2. 药剂配制在预试试验的基础上，将试验药剂用 0.1%吐温 80 水溶液稀释成 5-7 个系列浓度。3. 圆叶片处理用 2
15、.0cm 打孔器在无病黄瓜叶上打取圆叶片，在药液中浸渍 5min 后取出晾干，放在培养皿内，皿内用滤纸保湿，每片圆叶片叶背面向上，中心滴加 10ul孢子悬浮液，置于 19生化培养箱内培养，光照黑暗 12h 交替。每个浓度重复 4 次，以 0.1%吐温 80 水溶液浸渍圆叶片并滴加孢子悬浮液的处理为对照。四、结果检查和处理7d 后检查病斑长、短轴，计算防效，并用 DPS 数据处理软件对结果进行处理，求毒力回归方程和 EC50 和 EC90。植物保护学院农药系 农药生物测定实验 姜兴印9五、实验报告撰写实验报告，并对实验结果进行讨论分析。杀菌剂毒力测定盆栽法一、实验目的学习利用盆栽法测定井冈霉素对
16、小麦纹枯病的毒力。二、实验用品和仪器设备光照生化培养箱、电子天平、计算器、烧杯、移液管、容量瓶、花盆（大号塑料杯） 、玻棒、土壤等。实验药剂：井冈霉素，100，50，25，12.5mg/L；CK试验菌种：小麦纹枯病菌，PDA 平板培养的菌丝。实验材料：小麦种子三、实验方法1. 配制井冈霉素各浓度的水溶液，并将提前选择好的小麦种子在药液中浸泡 1h，取出晾干。2. 将过筛的风干土壤装入花盆内 4/5，并浇水湿透，加入 PDA 平板培养的小麦纹枯病菌，每皿菌种平均加入到 12 个花盆内土壤的表面。3. 播种，5 粒/盆，覆盖 1.5cm 厚度的风干土壤。4. 光照生化培养箱内 20培养 21d，光
17、照：黑暗=10h：14h，定期浇水，保持湿度。四、结果检查和处理处理 21d 后检查小麦幼苗发病情况，并按照要求将发病情况分级，计算病情指数和防效，并求毒力回归方程和 EC50 和 EC90。小麦幼苗病级分级标准：0级，不显症状；1级病斑占叶鞘宽1/2以下；2级病斑占叶鞘宽1/2-3/4；3级病斑占叶鞘宽3/4以上至全叶鞘。五、实验报告10)( 最 高 代 表 级 值数 ）调 查 总 病 叶 数 （ 或 病 株 表 级 数 值病 叶 数 （ 或 病 株 数 ） 代或 病 株 数各 级 病 叶 数病 情 指 数 10对 照 组 平 均 病 情 指 数处 理 组 平 均 病 情 指 数对 照 组 平 均 病 情 指 数防 治 效 果 （ ）
