1、 AMEKO TEL:+86-021-65676535 65677533 FAX:+86-021-55785279 E-mail: 1 人淀粉样蛋白 1-42 (A 1-42)酶联免疫 检测 试剂 盒使用说明书 AE91114Hu 使用前 仔细 阅读 本说明书 。 本 酶联免疫试剂盒是基于 双抗体 夹心 技术原理，来 检测人 褪黑素 (A 1-42)， 只能用 于研究用途 ， 不得用于医学诊断。 用 途 ： 用于 人血清、血浆及相关液体样本中 褪黑素 (A 1-42)测定。 工作原理 本试剂盒采用的 是 生物素双抗体 夹心酶联免疫吸附法 （ ELISA）测定 样品中人 褪黑素 (A 1-42)
2、水平。向 预先包被 了人 褪黑素 (A 1-42)单克隆抗体的酶标孔中加入人 褪黑素 (A 1-42)，温育；温育后，加入 生物素 标记的抗 褪黑素 (A 1-42)抗体 。再与链霉亲和素 -HRP 结合，形成免疫复合物，再经过温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入底物 A、 B，产生蓝色， 并在酸的作用下转化成最终的黄色。 颜色的深浅与样品中人 褪黑素 (A 1-42)的浓度呈正相关。 试剂盒组成 试剂盒组成 48 孔配置 96 孔配置 保存 说明书 1 份 1 份 封板膜 2 片（ 48） 2 片（ 96） 密封袋 1 个 1 个 酶标包被板 1 48 1 96 2-8保存 标准品 6400
3、 pg/ml 0.5ml 1 瓶 0.5ml 1 瓶 2-8保存 标准品稀释液 3ml 1 瓶 6ml 1 瓶 2-8保存 链霉亲和素 -HRP 3 ml 1 瓶 6 ml 1 瓶 2-8保存 生物素标记的抗 褪黑素 (A 1-42)抗体 0.5ml 1 瓶 1 ml 1 瓶 2-8保存 显色剂 A 液 3 ml 1 瓶 6 ml 1 瓶 2-8保存 显色剂 B 液 3 ml 1 瓶 6 ml 1 瓶 2-8保存 终止液 3ml 1 瓶 6ml 1 瓶 2-8保存 浓缩洗涤液 （ 20ml 20 倍） 1 瓶 （ 20ml 30 倍） 1 瓶 2-8保存 AMEKO TEL:+86-021-6
4、5676535 65677533 FAX:+86-021-55785279 E-mail: 2 需要而未提供的试剂和器材 1 37 恒温箱。 2 标准规格酶标仪。 3 精密移液器及一次性吸头 4 蒸馏水， 5 一次性 试管 6 吸水纸 注意事项 1 从 2-8取出的试剂盒，在开启试剂盒之前要室温平衡至少 30 分钟。 酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。 2 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差 3 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准 . 4 为 避 免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和 封板膜 。 5 不用的其它试剂应包装好或盖好
5、。不同 批号的试剂不要混用。保质前使用。 6 底物 B 对光敏感，避免长时间暴露于光下。 洗板方法 手工洗板方法：甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将 稀释后的 洗涤液至少 0.35ml 注入孔内，浸泡 1-2 分钟。根据需要，重复此过程数次。 自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中 AMEKO TEL:+86-021-65676535 65677533 FAX:+86-021-55785279 E-mail: 3 标本要求 1 不能检测含 NaN3 的样品 ，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（ HRP）活性。 2 标本采集后尽早进行
6、提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可 将标本放于 -20保存，但 应 避免反复冻融 。 操作程序 1. 标准品的稀释： (本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。 ) 3200 pg/ml 5 号标准品 120 l 的原倍标准品加入 120 l 标准品稀释液 1600 pg/ml 4 号标准品 120 l 的 5 号标准品加入 120 l 标准品稀释液 800pg/ml 3 号标准品 120 l 的 4 号标准品加入 120 l 标准品稀释液 400pg/ml 2 号标准品 120 l 的 3 号标准品加入 120 l 标准品稀释液
7、200pg/ml 1 号标准品 120 l 的 2 号标准品加入 120 l 标准品稀释液 2. 根据代测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。 3. 加样： 1）空白孔， 空白对照孔不加样品，生物素标记的抗褪黑素 (A 1-42)抗体，链霉亲和素 -HRP，只加显色剂 A 2) Standard wells: add Standard 50l and Streptavidin-HRP 50l; 3) testing Sample wells: add sample 40l,then add anti A1-
8、42 -antibody 10l , Streptavidin-HRP 50l. closing plate with Closure plate membrane ,incubate for 60 min at 37 . 4.Configurate liquid: 30-fold(or 20-fold) wash solution diluted 30-fold (or 20-fold) with distilled water and reserve. 5.washing： Uncover Closure plate membrane, discard Liquid, dry by swi
9、ng, add washing buffer to every well, still for 30s then drain, repeat 5 times, dry by pat. 6.color： Add Chromogen Solution A 50ul and Chromogen Solution B to each well, evade the light preservation for 15 min at 37 7.Stop the reaction： Add Stop Solution50l to each well, Stop the reaction(the blue c
10、olor change to yellow color). 8.assay： take blank well as zero , Read absorbance at 450nm after Adding Stop Solution and within 10min. 9. Calculate of result AMEKO TEL:+86-021-65676535 65677533 FAX:+86-021-55785279 E-mail: 8 Steps description Standard, Sample diluent Add Standard, Sample diluent, Biotinylated and HRP ,incubate for 60 min at 37 . Wash 5 times,Add Chromogen Solution A and B, incubate for 15 min at 37 . Add Stopp Solution Read absorbance at 450nm within 10 min calculate Assay range 100pg/ml 3200 pg/ml Storage and validity 1 Storage： 2-8 . 2 validity： six months.
