1、骨骼肌组织分离细胞核、胞浆、线粒体1 50mg 胫前肌组织，置于已预冷的玻璃培养皿，用剪刀剪碎。2 剪碎的组织加入 300-500uL STM buffer，于冰上研磨 1min 以使均质化（using a tight-fitting Teflon pestle attach to a potter S homogenizer set to 600-1000rpm），检查组织是否已均匀化，若否，重做均质化步骤。3 均质化组织加入离心管，冰浴 30min，最大速度离心 15 秒，4。然后 800g 离心 15 分钟。沉淀标志为 P0，上清 S0。沉淀 P04 沉淀 P0 为细胞核和细胞碎片残骸。
2、用 300-500uL STM 溶液重悬，最大速度vortex 15 秒，500g 离心 15min 。沉淀标为 P1，上清 S1 弃去。此时可以用显微镜检测细胞核纯度：取 P1 少量溶于台盼蓝溶液，放入血球计数器（haemocytometer）显微镜下检测，若其中含有很多细胞碎片，则重复此步操作。5 此步为提高 P1 的纯度：将步骤 4 沉淀重悬于 300-500uL 的 STM 溶液，最大速 vortex 15 秒，然后 1000g 离心 15min ，沉淀标识为 P5 ， 上清 S5 弃去。6 用 200-500uL 的 NET 重悬，用枪头吹打至均匀（using a pipette t
3、o triturate until homogeneous），最大速 vortex 15 秒，置冰上 30min ，该组分即含有 nuclei 组分，超声（at a high setting for 10-15s with 30s pauses whilst being kept on ice throughout.）9000g 离心 30 分钟，4。上清 S6 即为 nuclear fraction。上清 S07 S0：cytosolic and mitochondrial fractions 。离心 800g ，10min ，上清 S2 保留，沉淀 P2 可弃去亦可与 P0 合并。8 S2
4、 11000 g 10min 离心，上清 S3（包含 cytosol and microsomal fraction）用冷的纯（100% ）丙酮在-20 沉淀至少 1 小时后 12000 ，5min 。沉淀 P7 重悬于100-300ul 的 STM buffer，标志为 cytosolic fraction，其中可能包含一些微粒体（microsomal content）。9 沉淀 P3 重悬于 100-200uL 的 STM ,11000g 离心 10 分钟，沉淀 P4 为线粒体组分。该组分重悬于 SOL buffer，超声（at high seting for 5-10 seconds w
5、ith 30 second pauses ）标志为 mitochondrial fraction。Buffers:STM: 250mM sucrose50mM Tris-HCl pH7.45mM MgCl2Protease and phosphatase inhibitor cocktailsNET HEPES pH 7.9MgCl2 0.5MEDTA 0.2mMGlycerol 20%Triton-X-100 1%Protease and phosphatase inhibitor cocktailsSOL Tris HCl 50mM pH 6.8EDTA 1mMTriton-X-100 0.5%Protease and phosphatase inhibitor cocktails文献：a simple protocol for the subcellular fractionation of skeletal muscle cells and tissue。
