1、细胞培养,司徒镇强 2003- 4,细胞培养的优点,1.活细胞：能长时间、直接观察、研究 活细胞的形态、结构、生命活动,2.可控制：可控制-选择对象：均一性、重复性 哪一种：类型：上皮？间质？- 性质：正常？肿瘤？- 阶段：可控制-调节条件：各种因素 物理、化学、生物等因素,可控制-利用方法： 采用各种研究技术、记录方法： 研究：倒置生物显微镜、荧光显微镜、 电子显微镜、流式细胞术、激光共焦 显微镜、免疫组织化学、原位杂交、 同位素标记- 记录：摄影照片、缩时电影、电视-,优点3.应用广： 学科多： 对象广： 各种动物：低等动物-高等动物-人类 一种动物：不同年龄- 不同组织- 正常或异常（肿
2、瘤-）,4.较经济：可提供大量、同时、重复性好的、 生物学性状相似的实验对象,细胞培养的缺点,现人工模拟体内环境的技术已经很高, 但, 人工所模拟的条件与体内实际情况 仍不完全相同. 当细胞被置于体外培养后, 生活在缺乏动态平衡的环境中, 久了，必然发生变化.,1.与体内主要不同 相对孤立、相对单一 缺乏体内的系统作用、失去神经体液的调节 和细胞相互间的影响,2.主要表现 失去原有组织结构和细胞形态 分化减弱或不显 细胞趋向单一化； 3.提示 要正确认识体外培养细胞 是一种特定条件下生长的细胞群体。,生长类型,体外细胞培养物的生长类型,按生长方式:2型 粘附型细胞:附着在某一固相支持物表面才
3、能生长的细胞。 悬浮型细胞:不必附着于固相支持物表面，而 在悬浮状态下即可生长的细胞。 绝大多数有机体细胞属粘附型细胞， 只有少数细胞类型如某些肿瘤细胞和白细胞 可在悬浮状态下生长,贴附(粘附)型细胞,粘附:是大多数有机体细胞在体内 生存和生长发育的基本存在方式含义 两方面结果 基于粘附特性，使细胞与细胞之间相互结合形成组织， 有机体的绝大多数细胞必须 粘附于一固相表面 才能生存和生长。,培养时：这些细胞被放到体外环境中以后,同样需要粘附于某一固相表面才能生存和生长，因而属于粘附型细胞。粘附(锚定或锚着)依赖型(性)细胞：唯有粘附于固相表面才能生存的细胞,类型 细胞在体内、外的粘附方式：存在差
4、异 体内：粘附是全方位 外形具有复杂的立体特征 体外：多数情况，细胞只有一个附着平面 外形一般与体内时明显不同 按照培养细胞的主要形态，可分为几大类型,分类 根据形态大致的不同，主要2类： 上皮样 成纤维细胞样 其它，不定型,上皮样细胞型,名称：仅形态上似体内，实际上不完全等于-来源：来源于外胚层，内胚层细胞 如：皮肤及其衍生物 消化道，乳腺，肺泡 上皮性肿瘤形态：类似体内的上皮细胞 扁平，不规则多角形，中有圆形核,生长特点 易相连成片 相靠紧密相连成薄层铺石状 生长时呈膜状移动 很少脱离细胞群而单个活动,成纤维细胞样细胞,名称：凡在培养中形态与成纤维细胞类似的来源：由中胚层间充质组织起源的组
5、织 如：真正的成纤维细胞 心肌，平滑肌，成骨细胞，血管内皮形态：似体内成纤维细胞的形态 胞体梭形或不规则三角形 胞质向外伸出23个长短不等的突起 中有卵圆形核,生长特点 排列成放射状，漩涡状 并不紧靠连成片， 细胞细胞接触易断开而 单独行动 游离的单独的成纤维样细胞， 常有几个伸长的细胞突起,贴附生长型-类型,1. 与体内同名的细胞不完全相同 如：形态相似的成纤维细胞，可不同来源 自同一动物不同组织的成纤维样细胞相似但 发展趋向不同2. 培养细胞的形态不稳定 条件改变，细胞形态可有变化,培养细胞形态不稳定血清 Hela 高血清 低血清 成纤维细胞样 上皮样细胞 pH Hela 太酸或太碱 标准pH 成纤维细胞样 上皮样细胞 细胞密度 3T3 低密度 高密度 成纤维细胞样 上皮样细胞 生长状态改变 悬浮或贴附 悬浮 贴附 圆形 成纤维或上皮样 转化与否 未转化 转化后 成纤维样 可成上皮样,悬浮生长型,概念 培养时不贴附于底物而呈悬浮状态生长 或以机械方法使保持悬浮状态下生长来源 自血，脾或骨髓， 尤以血中白细胞 癌肿细胞也可能特点 在悬浮中生长良好 细胞圆形，单个或小细胞团,优点 生存空间大，提供数量大 传代方便(不需消化) 易于收获 可获得稳定状态缺点 观察不方便 很多细胞不能悬浮生长(尤以正常细胞),
