1、第 1 页 共 17 页实验室常用染料性能介绍及常用药品试剂和培养基的配制一、生物标本常用染料性能简介（一）天然染料1、苏木精 苏木精是从南美的苏木（热带豆科植物）干枝中用乙醚浸制出来的一种色素，是最常用的染料之一。苏木精不能直接染色，必须暴露在通气的地方，使他变成氧化苏木精（又叫苏木素）后才能使用，这叫做“成熟” 。苏木精的“成熟”过程需时较长，配置后时间愈久，染色力愈强。被染材料必须经金属盐作媒剂作用后才有着色力。所以在配制苏木精染剂时都要用媒染剂。常用的媒染剂有硫酸铝按、钾明矾和铁明矾等。苏木精是淡黄色到锈紫色的结晶体，易溶于酒精，微溶于水和甘油，是染细胞核的优良材料，他能把细胞中不同的
2、结构分化出各种不同的颜色。分化时组织所染的颜色因处理的情况而异，用酸性溶液（如盐酸酒精）分化后呈红色，水洗后仍恢复青蓝色，用碱性溶液（如氨水）分化后呈蓝色，水洗后呈蓝黑色。2、洋红 洋红又叫胭脂红或卡红。一种热带产的雌性胭脂虫干燥后，磨成粉末，提取出虫红，再用明矾处理，除去其中杂质，就制成洋红。单纯的洋红不能染色，要经酸性或碱性溶液溶解后才能染色。常用的酸性溶液有冰醋酸或苦味酸，碱性溶液有氨水、硼砂等。洋红使细胞核的优良染料，染色的标本不易褪色。用作切片或组织块染都适宜，尤其适宜于小型材料的整体染色。用洋红配成的溶液染色后能保持几年。洋红溶液出现浑浊时要过滤后再用。（二）人工染料人工染料，即苯
3、胺染料或煤焦油染料，种类很多，应用极广。它的缺点是经日光照射容易褪色，苯胺蓝、亮绿、甲基绿等更易褪色。在制片中注意掌握酸碱度，并避免日光直射，也能经几年不褪色。1、酸性品红 酸性品红是酸性染料，呈红色粉末状，能容于水，略溶于酒精（0.3% ） 。他是良好的细胞制染色剂，在动物制片上应用很广，在植物制片上用来染皮层、髓部等薄壁细胞和纤维素壁。他跟甲基绿同染，能显示线粒体。组织切片在染色前先浸在带酸性的水中，可增强它的染色力。酸性品红容易跟碱起作用，所以染色过度，易在自来水中褪色。2、刚果红 刚果红是酸性染料，呈枣红色粉末状，能溶于水喝酒精，遇酸呈蓝色。他能作染料，也用作指示剂。他在植物制片中常作
4、为苏木精或其他细胞染料的衬垫剂。他用来染细胞质时，能把胶制或纤维素染成红色。在动物组织制片中用来染神经轴、弹性纤维、胚胎材料等。刚果红可以跟苏木静作二重染色，也可用作类淀粉染色，由于他能溶于水和酒精，所以洗涤和脱水处理要迅速。3、甲基蓝 甲基蓝是弱酸性染料，能溶于水和酒精。甲基蓝在动植物的制片技术方面应用极广。他跟伊红合用能染神经细胞，也是细菌制片中不可缺少的染料。它的水溶液是原生动物的活体染色剂。甲基蓝极易氧化，因此用他染色后不能长久保存。4、固绿 固绿是酸性染料，能溶于水（溶解度为 4%）和酒精（溶解度为 9%） 。固绿是一种染含有浆质的纤维素细胞组织的染色剂，在染细胞和植物组织上应用极广
5、。他和苏木精、番红并列为植物组织学上三中最常用的染料。5、苏丹 苏丹是弱酸性染料，呈红色粉末状，易溶于脂肪和酒精（溶解度为 0.15%） 。苏丹是脂肪染色剂。 6、伊红 这类染料种类很多。常用的伊红 Y，是酸性染料，呈红色带蓝的小结晶或棕色粉末状，溶于水（15 摄氏度是溶解度达44%）和酒精（溶于无水酒精的溶解度为 2%） 。伊红在动物制片中广泛应用，是很好的细胞质染料，常用作苏木精的衬染剂。 7、碱性品（复）红 碱性品红是碱性染料，呈暗红色粉末或结晶状，能溶于水（溶解度 1%）和酒精（溶解度 8%） 。碱性品红在生物学制片中用途很广，可用来染色胶原纤维、弹性纤维、嗜复红性颗粒和中枢神经组织的
6、核质。在生物学制片中用来染维管束植物的木质化壁，又作为原球藻、轮藻的整体染色。在细菌学制片中，长用来鉴别结核杆菌。在 尔根氏反应中用作组织化学试剂，已核查脱氧核糖核酸。 8、结晶紫 结晶紫是碱性染料，能溶于水（溶解度 9%）和酒精（溶解度 8.75%） 。结晶紫在细胞学、组织学和细菌学等方面应用极广，是一种优良的染色剂。他是细胞核染色常用的，用来显示染色体的中心体，并可染淀粉、纤维蛋白、神经胶质等。凡是用番红和苏木精或其他染料染细胞核不能成功时，用它能得到良好的结果。用番红和结晶紫作染色体的二重染色，染色体染成红色，纺锤丝染成紫色，所以也是一种显示细胞分裂的优良染色剂。用结晶紫染纤毛，效果也很
7、好。用结晶紫染色的切片，缺点是不易长久保存。 9、龙胆紫 龙胆紫是混合的碱性染料，主要是结晶紫和甲基紫的混合物。在必要是，龙胆紫能跟结晶紫互相替用。医药上用的紫药水，主要成分是甲基紫，需要时能代替龙胆紫和结晶紫。 10、中性红 中性红是弱碱性染料，呈红色粉末状，能溶于水（溶解度 4%）和酒精（溶解度 1.8%） 。它的碱性溶液中呈现黄色，在强碱性溶液中呈蓝色，而在弱酸性溶液中呈红色，所以能用作指示剂。中性红无毒，常做活体染色的染料，用来染原生动物第 2 页 共 17 页和显示动植物组织中活细胞的内含物等。陈久的中性红水溶液，用作显示尼尔体的常用染料。 11、番红 番红是碱性染料，能溶于水和酒精
8、。番红是细胞学和动植物组织学生常用的染料，能染细胞核、染色体和植物蛋白质，示维管束植物木质化、木栓化和角质化的组织，还能染孢子囊。 12、亚甲蓝或美蓝 亚甲蓝或美蓝是碱性染料，呈蓝色粉末状，能溶于水（溶解度 9.5%）和酒精（溶解度 6%） 。亚甲蓝是动物学和细胞学染色上十分重要的细胞核染料，其优点是染色不会过深。 13、甲基绿 甲基绿是碱性染料。它是绿色粉末状，能溶于水（溶解度 8%）和酒精（溶解度 3%） 。甲基绿是最有价值的细胞和染色剂，细胞学上常用来染染色质，跟酸性品红一起可作植物木质部的染色。 二、常用药品试剂和培养基的配制(一) 反应剂1、检查葡萄糖试剂配方一 本尼迪克(Bened
9、ict) 溶液(1) 在 400 毫升蒸馏水中溶解 85 克柠檬酸钠和 50 克无水碳酸钠。(2) 在 50 毫升加热的蒸馏水中溶解 8.5 克硫酸铜。把硫酸铜溶液缓缓倒入柠檬酸钠-碳酸钠溶液中，边加边搅拌，如果产生沉淀，要过滤。本尼迪克溶液配制后能长期使用（存放时间较久而产生沉淀是，取上层清液使用，不必重新配制） 。 本尼迪克溶液用来测试食物、血液和尿中的葡萄糖，可测出 0.15 0.20% 的葡萄糖。这种溶液跟未知物同加热时，如果未知物中有葡萄糖，会形成红色的氧化亚铜沉淀物。 配方二 裴林（Fehling）溶液 （1）把 34.5 克硫酸铜溶于 500 毫升蒸馏水中。 （2）把 125 克
10、氢氧化钾（钠）和 173 克酒石酸钾钠溶解在 500 毫升蒸馏水中。 上述两种溶液应分别保存。在检测葡萄糖时，使他们等量的混合，加入待测物的试管内，加热到沸腾。如果有葡萄糖，会形成红色的氧化亚铜沉淀物。 2、检查淀粉的试剂 鲁哥氏（Lugols）溶液（碘液） 取 6 克碘化钾溶于 20 毫升蒸馏水中，搅拌到溶解后，加入 4 克碘，等碘充分溶解，在加入 80 毫升蒸馏水，贮存在棕色试剂瓶内。 碘液用来测试食物样品或叶片中的淀粉，也用作染色剂，例如可染色鞭毛、纤毛和细胞核等。 3、检查蛋白质的试剂 配方一 米伦（Millon）试剂 在 60 毫升浓硝酸（比重 1.42）中溶解 40 克汞（水浴加温
11、可助溶） ，溶解后加入两倍体积的蒸馏水稀释，静置澄清后，取它上层的清液备用。这种试剂可长期保存。 在待测物中加入少量米伦试剂，加热，如果有蛋白质，会出现红色。这种试剂不能用来测定尿中的蛋白质。 配方二 双缩尿试剂 分别配制 10%氢氧化钠溶液和 1%硫酸铜溶液。 在 3 毫升待测物中加入 1 毫升 10%氢氧化钠溶液和 1 滴 1%硫酸铜溶液。如果有蛋白质，会出现紫色反应。 4、检查脂肪的试剂 苏丹（）酒精饱和溶液 取 0.2 克苏丹（或苏丹） ，放入纯酒精中，加热，使它充分溶解，成为饱和酒精溶液，过滤后密闭在试剂瓶内保存备用。 5、酸碱指示剂 配方一 酚酞试剂和试纸 酚酞试剂 取 1 克酚酞
12、，溶解在 100 毫升 60%的酒精溶液里，装在试剂瓶内密闭保存。 酚态试纸 取 1 克酚酞，溶解在 100 毫升 95%酒精溶液里，加入 00 毫升蒸馏水。把绿纸条放入酚酞溶液中浸湿后，取出，放在无氨气影响处晾干。 酚泰试剂（试纸） pH 值变色范围 8.210，在酸性和中性溶液中都无色，再碱性溶液中呈深红色。 配方二 红蓝石蕊试纸 取市售石蕊 1 克，放在 80 毫升 10%酒精溶液中搅拌，使它溶解，然后过滤。把滤液分成两份。1 份滴入稀磷酸或稀硫酸，到出第 3 页 共 17 页现红色为止。另 1 份滴入稀氢氧化钠溶液，到出现蓝色为止。在上述制备的溶液中分别浸湿滤纸条，随后取出滤纸条，放在
13、蔽光处、无酸碱性气体影响的地方晾干，即的红、蓝两种石蕊试纸。 红石蕊试纸在碱性溶液中变蓝，蓝石蕊试纸在酸性溶液中变红。 6、检查二氧化碳的试剂 检查二氧化碳的试剂，可用溴代麝香草酚蓝溶液和石灰水。 配方一 溴代麝香草酚蓝溶液 取 0.1 克溴代麝香草酚蓝，溶解在 100 毫升蒸馏水里，滴入少量 0.1%氢氧化钾溶液，使它成为弱碱性溶液而呈蓝色。 溴代麝香草酚蓝溶液 pH 值变色范围是 6.0（黄）7.6（蓝） 。待测物中如果有二氧化碳，会形成碳酸而使溶液变成黄色。 配方二 石灰水 在蒸馏水中加入生石灰（氧化钙） ，变加边搅拌，直到加入的生石灰不再溶解，呈饱和状态时为止。在石灰水澄清后，倾出上层
14、清液，用滤纸过滤，放在密闭瓶内保存。 如果测定的物质中有二氧化碳，会生成碳酸钙，使石灰水变浑浊。 7、检查细胞生活力的试剂 检查细胞有无生活力，可用中性红甲基蓝试剂。配制的方法是先分别配制 1%中性红溶液和 1%甲基蓝溶液，这两种溶液各取 1份混合，用来鉴定细胞的死活。该试剂使活细胞的液泡染上红色，而使死细胞全部染成蓝色。（二）分离液 1、肌细胞分离液 配方一 马克凯郎（Maccallum ）液 取 1 份浓硝酸、2 份甘油、3 份水，混合后就得到马克凯郎液。 把新鲜的肌肉组织小块（横纹肌、心肌和平滑肌）投入这种溶液里浸渍，分离时间需 13 日。这种溶液尤其适于分离横纹肌核心肌细胞。 配方二
15、氢氧化钾溶液 取 35 克氢氧化钾，放在 100 毫升蒸馏水中，加热，使它完全溶解后，在室温下冷却。 把新鲜的肌肉组织块投入氢氧化钾溶液中，浸泡 1530 分钟后，肌细胞便可分离。 2、上皮细胞分离液 配方一 福尔马林氯化钾溶液 称取 58.44 克氯化钠，用蒸馏水溶解，再稀释到 1000 毫升，加入 2 毫升福尔马林。 这种溶液是很好的上皮细胞分离液，分离很迅速，而且能保护纤细的上皮细胞纤毛。小肠和气管的上皮组织小块，放在此溶液里 2 小时即可分离，口腔和皮肤上皮组织小块的细胞分离一般需 3 日左右。 配方二 水和氯醛溶液 称取 5 克水和氯醛，用蒸馏水溶解，再稀释到 100 毫升，就得到
16、5%水合氯醛溶液。 从洗净的动物胃、肠和口腔内壁上取下上皮组织一小块，投入以上溶液中，浸泡 2448 小时。 3、神经细胞分离液 配方一 可以用上皮细胞分离液配方一福尔马林氯化钠溶液来分离神经细胞（见 2） 。 配方二 硼酸生理盐水溶液 在生理盐水溶液内加入一些硼酸，搅拌到不再溶解时为止，使成为饱和溶液。 把脊椎灰质和脑皮质部位的神经组织一小块投入这种溶液中分离。 4、植物茎细胞分离液 杰弗里氏（Jeffreys）液 取等量的 10%铬酸溶液和 10%硝酸溶液混合，成铬酸硝酸溶液。 这种溶液用来分离木本植物茎部的导管、管胞、筛管、伴胞和韧皮纤维等。把材料切成小块放在水里，加热煮沸，冷却后再加热
17、煮沸。这样重复几次，到材料全部沉于水底后，投入分离液内，分离时间是 2448 小时。 5、植物根尖细胞分离液 配方一 盐酸酒精溶液 在 1 份 95%酒精中慢慢的加入 1 份浓盐酸，即成盐酸 酒精溶液，装瓶密闭保存。 把植物根尖部位截下一小段，投入以上溶液中分离。 第 4 页 共 17 页配方二 4%盐酸溶液 配制 4%盐酸溶液。 截下植物根尖部位，投入盛有 4%盐酸溶液的小烧杯内，在 60 摄氏度温水中隔水温热 12 分钟，使根尖软而不酥，这时分离效果最好。 6、植物纤维分离液 取 10 克氢氧化钠（或氢氧化钾） ，溶解在 90 毫升水里，制成 10%氢氧化钠（或氢氧化钾）溶液，放在瓶里密闭
18、保存。 把植物茎纵切成细条，剪成小段后，投入分离液内。 7、植物细胞质壁分离液 配方一 30%蔗糖溶液 取 30 克蔗糖，溶解在 70 毫升蒸馏水里，装瓶备用。 配方二 5%氯化钠溶液 取 5 克食盐，溶解在 95 毫升蒸馏水里，装瓶备用。 配方三 5%硝酸钾溶液 取 5 克硝酸钾，溶解在 95 毫升蒸馏水里，装瓶备用。 （三）生理盐水 配方一 各种动物需用的生理盐水 哺乳类 需用生理盐水浓度是 0.9%。称取 0.9 克氯化钠，溶解在少量蒸馏水中，稀释到 100 毫升。 鸟类 需用的生理盐水浓度是 0.75%。称取 0.75 克氯化钠，溶解后用蒸馏水稀释到 100 毫升。 两栖类 需用的生理
19、盐水浓度是 0.65%。称取 0.65 克氯化钠，溶解后用蒸馏水稀释到 100 毫升。 配方二 任氏（Ringers）生理盐水 氯化钠 6.5 克 碳酸氢钠 0.2 克 氯化钾 0.14 克 磷酸二氢钠 0.01 克 氯化钙 0.12 克 先把氯化钠、氯化钾、碳酸氢钠、磷酸二氢钠分别溶解在少量蒸馏水中，混合后用蒸馏水稀释到 980 毫升。然后取氯化钙溶解在 20 毫升蒸馏水中，把氯化钙溶液逐滴加入到上述溶液内，边滴、边搅拌，以免产生不溶解的磷酸钙沉淀。 此溶液用于变温动物，尤其常用于两栖类。 配方三 乐氏（Lockes）生理盐水 氯化钠 9.0 克 碳酸氢钠 0.10.3 克 氯化钾 0.42
20、 克 氯化钙 0.24 克 把氯化钠、氯化钾、碳酸氢钠分别用少量蒸馏水溶解，混合后加蒸馏水到 980 毫升。把氯化钙溶解在 20 毫升蒸馏水里，逐滴加入上述溶液中。 以上溶液用于恒温动物，尤其常用于哺乳类。 （四）培养液 1、人造海水 配方一 氯化钠 24.72 克 氯化钾 0.67 克 氯化钙 1.36 克 氯化镁 4.66 克 硫酸镁 6.29 克 碳酸氢钠 0.18 克 蒸馏水 加到 1 升 把上述各种盐溶解在少量蒸馏水中，再加入碳酸氢钠，最后用蒸馏水稀释到 1000 毫升。 配方二 氯化钠 45.0 克 硫酸镁 0.1 克 氯化镁 5.0 克 氯化铁（1%溶液） 1 滴 先把硫酸镁、磷
21、酸一氢钾、氯化铁用少量蒸馏水溶解，加蒸馏水到 980 毫升。随后取硝酸钙溶解在 20 毫升蒸馏水里，把此溶液逐滴加到上述溶液内，装瓶保存。 配方二 克诺普氏（Knops）溶液 硝酸钾 1 克 硫酸镁 1 克 磷酸二氢钾 1 克 硝酸钙 3 克 先把硝酸钾、硫酸镁、磷酸二氢钾用少量蒸馏水溶解，加蒸馏水到 980 毫升。随后取硝酸钙，用 20 毫升蒸馏水溶解，加入到第 5 页 共 17 页上述溶液内。溶液灰形成白色沉淀，在使用是必须摇动。 在以上溶液中加入蔗糖溶液（14%） ，能刺激某些藻类形成游动孢子。该液用于培养绿藻。 3、植物无土培养液 配方 霍格伦德（Hoagland）和斯纳德（Snyde
22、r）液 硝酸钙 0.821 克 硝酸钾 0.506 克 磷酸二氢钾 0.136 克 硫酸镁 0.120 克 酒石酸铁 0.005 克 把上述盐类溶解在少量蒸馏水里，然后稀释到 1000 毫升。 （五）培养基 1、细菌培养基 配方一 牛肉膏琼脂培养基 牛肉膏 0.3 克 蛋白胨 1.0 克 氯化钠 0.5 克 琼脂 1.5 克 水 1000 毫升 在烧杯内加水 100 毫升，放入牛肉膏、蛋白胨和氯化钠，用蜡笔在烧杯外作上记号后，放在火上加热。待烧杯内各组分溶解后，加入琼脂，不断搅拌以免粘底。等琼脂完全溶解后补足失水，用 10%盐酸或 10%的氢氧化钠调整 pH 值到 7.27.6,分装在各个试管
23、里，加棉花塞，用高压蒸汽灭菌 30 分钟。 配方二 马铃薯培养基 取新鲜牛心（除去脂肪和血管）250 克，用刀细细剁成肉末后，加入 500 毫升蒸馏水和 5 克蛋白胨。在烧杯上做好记号，煮沸，转用文火炖 2 小时。过滤，滤出的肉末干燥处理，滤液 pH 值调到 7.5 左右。每支试管内加入 10 毫升肉汤和少量碎末状的干牛心，灭菌，备用。 配方四 根瘤菌培养基 葡萄糖 10 克 磷酸氢二钾 0.5 克 碳酸钙 3 克 硫酸镁（ ） 0.2 克 酵母粉 0.4 克 琼脂 20 克 水 1000 毫升 1%结晶紫溶液 1 毫升 先把琼脂加水煮沸溶解，然后分别加入其他组分，搅拌使溶解后，分装，灭菌，备
24、用。 2、放线菌培养基 配方一 淀粉琼脂培养基（高氏培养基） 可溶性淀粉 2 克 硝酸钾 0.1 克 磷酸氢二钾 0.05 克 氯化钠 0.05 克 硫酸镁 0.05 克 硫酸亚铁 0.001 克 琼脂 2 克 水 1000 毫升 先把淀粉放在烧杯里，用 5 毫升水调成糊状后，倒入 95 毫升水，搅匀后加入其他药品，使它溶解。在烧杯外做好记号，加热到煮沸时加入琼脂，不停搅拌，待琼脂完全溶解后，补足失水。调整 pH 值到 7.27.4，分装后灭菌，备用。 配方二 面粉琼脂培养基 面粉 60 克 琼脂 20 克 水 1000 毫升 把面粉用水调成糊状，加水到 500 毫升，放在文火上煮 30 分钟
25、。另取 500 毫升水，放入琼脂，加热煮沸到溶解后，把两液调匀，补充水分，调整 pH 值到 7.4，分装，灭菌，备用。 3、真菌培养基 配方一 萨市（Sabouraud s）培养基 蛋白胨 10 克 琼脂 20 克 麦芽糖 40 克 水 1000 毫升 先把蛋白胨、琼脂加水后，加热，不断搅拌，待琼脂溶解后，加入 40 克麦芽糖（或葡萄糖） ，搅拌，使它溶解，然后分装，灭菌，备用。 第 6 页 共 17 页本培养菌是培养许多种类真菌所常用的。 配方二 马铃薯糖琼脂培养基 把马铃薯洗净去皮，取 200 克切成小块，加水 1000 毫升，煮沸半小时后，补足水分。在滤液中加入 10 克琼脂，煮沸溶解后
26、加糖 20 克（用于培养霉菌的加入蔗糖，用于培养酵母菌的加入葡萄糖） ，补足水分，分装，灭菌，备用。 把这培养基的 pH 值调到 7.27.4，配方中的糖，如用葡萄糖还可用来培养放线菌和芽孢杆菌。 配方三 黄豆芽汁培养基 黄豆芽 100 克 琼脂 15 克 葡萄糖 20 克 水 1000 毫升 洗净黄豆芽，加水煮沸 30 分钟。用纱布过滤，滤液中加入琼脂，加热溶解后放入糖，搅拌使它溶解，补足水分到 1000 毫升，分装，灭菌，备用。 把这培养基的 pH 值调到 7.27.4，可用来培养细菌和放线菌。 配方四 豌豆琼脂培养基 豌豆 80 粒 琼脂 5 克 水 200 毫升 取 80 粒干豌豆加水
27、，煮沸 1 小时，用纱布过滤后，在滤液中加入琼脂，煮沸到溶解，分装，灭菌，备用。 4、食用菌菌种培养基 配方一 马铃薯蔗糖-琼脂培养基 20%马铃薯煮汁 1000 毫升 蔗糖 20 克 琼脂 18 克 把马铃薯洗净去皮后，切成小块。称取马铃薯小块 200 克，加水 1000 毫升，煮沸 20 分钟后，过滤。在滤汁中补足水分到 1000毫升，即成 20%马铃薯煮汁。在马铃薯煮汁中加入琼脂和蔗糖，煮沸，使它溶解后，补足水分，分装，灭菌，备用。使用该培养基对 pH 值要求不严格，可以不测定。 配方二 综合马铃薯培养基 20%马铃薯煮汁 1000 毫升 磷酸二氢钾 3 克 硫酸镁 1.5 克 葡萄糖
28、20 克 维生素 10 毫克 琼脂 18 克 先配制 20%马铃薯煮汁，方法同上。在煮汁中加入上述各种组分，加热溶解后补足水分，调整 pH 值到 6。分装，灭菌，备用。该培养基用于培养和保存灵芝、平菇、香菇等食用菌菌种。 （六）染色剂 1、细菌染色剂 配方一 齐氏（Ziehl）石炭酸品红染液 甲液 取石炭酸 5 克，溶解在 95 毫升蒸馏水中。 乙液 取 0.3 克碱性品红，放入研钵中研磨，逐渐加入 10 毫升 95%酒精，继续淹没，使它溶解。 将甲液和乙液混合后，摇匀，过滤，装瓶，备用。 配方二 罗氏（Loeffler s）美蓝染液 甲液 取 5 克美蓝，溶于 100 毫升 95%酒精中，制
29、成美蓝酒精饱和液。 乙液 取氢氧化钾 0.01 克（或 1%氢氧化钾溶液 1 毫升） ，溶液也可用于放线菌染色，0.1% 浓度可用于酵母菌染色。 配方三 革兰氏（Gram s）染液 用此液染色因先用甲液染色，再加乙液固定，用丙液处理，最后用丁液复染。四种液体的配方如下： 甲液（结晶紫液） （1）结晶紫 2 克 95%酒精 20 毫升 （2）草酸铵 0.8 克 蒸馏水 80 毫升 使用钱江（1） 、 （2）液相混，静置 48 小时后使用。 第 7 页 共 17 页乙液(碘液) 碘 1 克 碘化钾 2 克 蒸馏水 300 毫升 将碘化钾溶于少量蒸馏水中，然后加入碘，待碘全部溶解后，加水稀释至 30
30、0 毫升。 丙液 95%酒精溶液 丁液（番红花红液） 2.5%番红花红酒精溶液 10 毫升 蒸馏水 100 毫升 2、细菌特殊染色剂 配方一 芽孢染液 用此配方染色是用甲液染色后，用乙液复染。 甲液 取 5 克孔雀绿，加入少量蒸馏水，使它溶解后，用蒸馏水稀释到 100 毫升，即成孔雀绿染液。 乙液 取番红花红 0.5 克，加入少量蒸馏水，使它溶解后，用蒸馏水稀释到 100 毫升，集成番红花红复染液。 配方二 荚膜染液 此配方先用甲液染色，后用乙液复染。 甲液 取结晶紫 0.1 克，溶于少量蒸馏水后，加水稀释到 100 毫升，再加入 0.25 毫升冰醋酸一结晶紫染液。 乙液 取硫酸铜（ ）31.
31、3 克，溶于少量蒸馏水后，加水稀释到 100 毫升，即成 20%硫酸铜脱色剂。 配方三 鞭毛染液 甲液 饱和明矾溶液 2 毫升 5%石炭酸溶液 5 毫升 20%丹宁酸溶液 2 毫升 乙液 碱性品红 11 克 95%酒精 100 毫升 使用前取甲液 9 毫升和乙液 1 毫升相混，过滤即可。 3、植物细胞壁染色剂 配方一 纤维素细胞壁染液（） 取固绿 0.1 克，溶于 100 毫升 95%酒精中，即成 0.1%固绿酒精溶液。 该液能染色纤维素细胞壁，还用于动植物中作浆质染色剂。 配方二 纤维素细胞壁染液（） 氯化锌 20 克 碘化钾 6.5 克 碘 1.5 克 蒸馏水加至 100 毫升 先把氯化锌
32、溶于少量蒸馏水中，再加入 6.5 克碘化钾，在碘完全溶解后，用蒸馏水稀释到 100 毫升，即成碘氯化锌溶液。 该染液能把细胞壁染成紫色，胞质染成淡黄色，胞核染成棕色。 配方一 纤维素细胞壁染液（） 甲液 取 1 克碘和 1.5 克碘化钾，溶于 100 毫升蒸馏水中，即成 1%碘液。 乙液 取 7 份硫酸和 3 份蒸馏水相混，即成 66.5%硫酸溶液。 染色时，在材料上滴加甲液，再加一滴乙液，纤维素细胞壁就染成黄色。 配方四 木质化细胞壁染液（） 硫酸化苯胺（或盐酸话本安） 1 份 蒸馏水 70 份 95%酒精 30 份 硫酸 30 份 将上述各组分相混，将细胞材料放入混合液里染色，可是木质化细
33、胞壁呈鲜黄或姜黄色。 配方五 木质化细胞壁染液（） 取间苯三酚 45 克，溶于 100 毫升 95%酒精中，即成间苯三酚酒精液。 先在材料上滴上 1 滴浓盐酸，然后滴上间苯三酚酒精液 1 滴，木质化的细胞壁就染上樱红或紫红色。 配方六 木质化细胞壁染液（） 取 1 克番红，溶于 99 毫升蒸馏水中，即成 1%番红溶液。4、细胞质染色剂 配方一 伊红染液 伊红染液一般配用水溶液和酒精溶液两种。 第 8 页 共 17 页（1）取 1 克伊红，溶于 99 毫升蒸馏水中，即成 1%伊红水溶液（市售红墨水内含伊红成分，可以用红墨水稀释液来代替本溶液） 。 （2）取 1 克伊红，溶于 99 毫升 70%酒
34、精中，即成 1%伊红酒精溶液。 配方二 甲基蓝染液 取 1 克甲基蓝，溶于 29 毫升 70%酒精中，加入 70 毫升蒸馏水，即成 1%甲基蓝染液。 配方三 亮绿染液 取 0.5 克亮绿，溶解在 100 毫升蒸馏水中，即成 0.5%亮绿溶液。 5、细胞核染色剂 配方一 甲基绿染液 取 1 克甲基绿，溶于 99 毫升蒸馏水中，加入 1 毫升冰醋酸。本染液能染细胞核，还用来染木质化细胞壁。 配方二 龙胆紫染液 取 1 克龙胆紫，溶于少量 2%醋酸溶液中，加 2%醋酸溶液，直到溶液不呈深紫色止。 配方三 美蓝（亚甲基蓝）染液 取 0.5 克美蓝，溶于 30 毫升 95%酒精中，加 100 毫升 0.
35、01%氢氧化钾溶液，保存在棕色瓶内 。 此溶液能染细胞核，还用来染细菌、血和神经组织等。 配方四 硼砂洋红染液 取 4 克硼砂，溶于 96 毫升蒸馏水中。再加入 2 克洋红，加热溶解后煮沸 30 分钟，静置 3 日，用 100 毫升 70%酒精冲淡，放置24 小时后过滤。 此染液能染细胞核，还用来染糊粉粒和一般动物、植物的整体染色，如水螅、血吸虫等整体标本。 配方五 德氏（Delafield s）苏木精染液 甲液 取 1 苏木精，溶于 6 毫升无水酒精中，即成苏木精酒精溶液。 乙液 取 10 克铵矾溶于 90 毫升蒸馏水中，即成 10%铵矾水溶液。 取甲液逐滴加入到乙液中，用纸遮盖，放在阳光明
36、亮处，使它充分氧化。34 天后将溶液过滤，在滤液中加入 25 毫升甘油和25 毫升甲醇，保存在密闭玻璃瓶内。静置 12 个月，待该液颜色变深时过滤，可长久保存。 本染液是染色体的优良染色剂，除能染细胞核外，还用来染纤维素、细胞壁和动植物组织。 配方六 席夫（Schiffs）试剂 称取 0.5 克碱性品红，加到 100 毫升煮沸的蒸馏水中，再微微加热 5 分钟，不断搅拌，使它溶解。在溶液冷却到 50 摄氏度时过滤，滤液中加入 10 毫升 1N 盐酸。再冷却到 25 摄氏度时加入 0.5 克偏重亚硫酸钠（ ）或无水亚硫酸氢钠（ ） 。把溶液装入棕色试剂瓶内，摇荡后，塞紧瓶塞，放在黑暗中 24 小时
37、。在溶液颜色退到淡黄色时，加入 0.5 克活性炭，用力摇荡 1 分钟，过滤后把滤液贮在棕色试剂瓶内，塞紧瓶塞，滤液应该是无色的。在使用时勿让溶液长时间暴露在空气中和见光（瓶外用黑纸或暗盒遮光） 。如溶液变成红色，即失去染色能力。 碱性品红是较强的核染色剂，在孚尔根氏（Feulgens）反应中作为组织化学试剂，以检查 DNA。 6、染色体染色剂 配方一 醋酸洋红染液 取 45 毫升冰醋酸，加蒸馏水 55 毫升，煮沸后徐徐加入洋红 1 克，搅拌均匀后加入 1 颗铁锈钉，煮沸 10 分钟，冷却后过滤，贮存在棕色瓶内。 配方二 醋酸地衣红染液 取 45 毫升醋酸，跟 55 毫升蒸馏水相混，加热，徐徐加
38、入地衣红粉末 12 克，搅拌溶解后，缓缓煮沸 2 小时。冷却后过滤，贮存在棕色瓶里。 配方三 龙胆紫染液 取 1 克龙胆紫，用少量蒸馏水溶解后，加蒸馏水，稀释到 100 毫升，保存在棕色瓶内。 配方四 甲苯胺蓝染液 取 0.5 克甲苯胺蓝，溶解在 100 毫升蒸馏水中，即成 0.5%甲苯胺蓝水溶液。 7、线粒体染色剂 配方一 詹钠斯绿 B(Janus green 酒精饱和溶液 取 125 毫升詹钠斯绿 B，加入到 62.5 毫升无水酒精中，搅拌，即成烟鲁绿 B 酒精饱和染液。 第 9 页 共 17 页（1）取詹钠斯绿酒精饱和染液按 1：30000 比例加蒸馏水稀释，用来染原生动物线粒体。 (2
39、)取詹钠斯绿酒精饱和液，按 1：10000 比例加蒸馏水稀释，用来染新鲜蛙血线粒体。 配方二 詹钠斯绿 B 中性红染液 先配制詹钠斯绿 B 和中性红酒精饱和液。詹钠斯绿酒精饱和液见配方一。中性红酒精饱和液配制方法：取 125 毫升中性红，加入到 50 毫升无水酒精中，搅拌。 在 10 毫升生理盐水（两栖类生理盐水浓度为 0.65%；哺乳类生理盐水浓度为 0.9%）中，加入詹钠斯绿 B 酒精饱和液 0.71 毫升，中性红酒精饱和液 2 毫升，混合。 詹钠斯绿 B 稀释液是活体染液。 8、脂肪染色剂 苏丹染液 取 0.1 克苏丹，溶于 20 毫升 95%酒精中，即成 0.5%苏丹染液。 这染液能染
40、脂肪，还能染木栓、角质层。 9、血液染色剂 配方一 瑞氏（Wrights ）染液 取瑞氏染料粉末 0.1 克和甲醇 60 毫升。把染料放在研钵内，加少量甲醇研磨，使染料溶解，然后把溶解的染料倒入干净的棕色玻璃瓶。并用完甲醇为止。配制好的染液在室温中保存，即可使用。新鲜配制的染液偏碱性，放置后呈酸性，染液贮存愈久染色愈好。这染液的适宜 pH 值是 6.46.8。因此，染色时加入缓冲液，可维持一定的酸碱度，使染色效果更好。 这种染液除能染血液，还能染疟原虫。 瑞氏染料可以自制。在 100 毫升 0.5%碳酸氢钠水溶液里加入 1 克美蓝，溶解后放在锅内，蒸上 1 小时，取出冷却后过滤。在滤液里加入
41、0.1%伊红水溶液 500 毫升，随加、随搅拌，使混合液呈紫色。静置一夜后，用滤纸过滤。滤纸上的沉淀物，在室内风干或放在干燥箱内，充分干燥后研磨成粉末，即成瑞氏染料。 配方二 甲基紫染液 取甲基紫 0.5 克，加到 100 毫升生理盐水中，溶解后加入冰醋酸 0.02 毫升。 10、吸虫染色剂 梅耶氏（Mayers ）明矾洋红染液 取铵明矾（硫酸铝铵）5 克，溶于 95 毫升蒸馏水中，再加入 0.5 克洋红酸，加热溶解，冷却后过滤。在滤液中加入少量防腐剂，如麝香草酚、樟脑粉、水杨酸钠、苯酚（石炭酸）等，以防生霉。 这种染液适合于染小型动物材料，如吸虫等寄生虫的整体，也能染高等植物的表皮和蕨类植物
42、的原叶体。 11、活体染色剂 配方一 中性红染液 先配成 1%中性红水溶液（1 克中性红溶于 100 毫升蒸馏水中） 。取这种溶液 1 毫升，用 0.6%生理盐水（或蒸馏水）稀释到 50毫升，即成 0.02%中性红水溶液，贮存在棕色瓶里，放在黑暗处。 本染液用来显示原生动物的食物泡以及动植物组织中活细胞的内含物等。 配方二 尼罗蓝（Nile Blue ）染液 取 0.1 克尼罗蓝，溶解于 10001500 毫升蒸馏水中，即成尼罗蓝染液。 这种染液能把原生动物大核染成绿色，食物泡染成蓝色。 配方三 亚甲蓝染液 取 0.1 克亚甲蓝，溶解于 1000 毫升蒸馏水中，即成亚甲蓝染液。 这种染液用于原
43、生动物的活体染色。 12、透明骨骼标本染色剂 配方一 茜素红染液（） 取冰醋酸 5 毫升、甘油 5 毫升、1%水合氯醛 60 毫升混合。在这种混合液中方入少量茜素红，制成茜素红饱和溶液。 配方二 茜素红溶液（） 取 1 克茜素红，溶于 100 毫升 95%酒精中，搅拌，然后跟 900 毫升 1%氢氧化钾溶液相混，即成深紫色的茜素红染液。 （七）固定液和保存液 用固定液固定动植物整体或它的一部分组织和气管等，能保存组织内细胞的形态、结构及其组成，尽量使它近于生活状态。固第 10 页 共 17 页定液一般有防腐和保存的作用，分为单纯固定液和混合固定液。单纯固定液中最重要的有乙醇、福尔马林、醋酸、苦
44、味酸、铬酸、重铬酸钾、升汞等，前两种固定液是中学生物实验室常用的。单纯固定液的优点是简便，缺点是有一定的局限性，不易达到理想的固定要求。混合固定液有几种不同的药液按一定的比例混合而成，使各自的优缺点相互补充，成为较完美的固定液。这种固定液的制备虽比较麻烦，但是效果比较好。常用的混合固定液是醋酸酒精混合液、福尔马林醋酸酒精液、包因氏固定液等。 常用的保存液大致跟固定液相同，主要是福尔马林、酒精、甘油以及由这些药物按比例配制成的各种混合液。有时按特殊保存的需要，再保存液中增加某些药品（如原生标本的保存液） 。 1、福尔马林 福尔马林在固定组织标本时杀菌能力强，所以防腐性强，渗透力大，固定得快。永福
45、尔马林固定精细的解剖标本时，要跟甘油、酒精、石炭酸等混合使用。固定液常用的浓度是 510%（根据材料的大小、性质和数量而定） 。 保存液常用的浓度是 510%。用福尔马林作保存液，效果好且价格低廉。 在配制福尔马林溶液（固定液或保存液）时，应将 3740%的甲醛作为整个溶质来配。例如配制 5%福尔马林是取市售 3740%甲醛溶液 5 毫升跟 95 毫升蒸馏水混合。实际上甲醛含量只有 1.92%，这样的配法已成为一般实验室常用的惯例。 注意事项： （1）福尔马林业在长期贮存中会产生蚁酸，可适量的加入碳酸钙（ ）或碳酸镁（ ）等碱性物质进行中和。（2）福尔马林业作为保存液会慢慢挥发而致使浓度降低，
46、并且福尔马林液再保存中往往形成多聚甲醛，使浸液变浊，影响观察。所以，根据一定保存期的情况，可适当增加福尔马林液的浓度或更换新液，以防标本变坏。其中如有白色沉淀物，加热后可使它溶解。 （3）市售的福尔马林液常带有酸性，能腐蚀石灰质，因此，最好不用福尔马林液浸制有石灰质外壳的动物。2、酒精（乙醇） 酒精也是常用的固定液，它有强烈的杀菌作用，对组织材料的渗透力较大，固定的快。但是，它的脱水作用较强，在高浓度的酒精中容易使材料显著硬化和收缩。一般用于固定浸制标本材料，分一级或二级固定，即 70%或 50%与 70%的酒精。有些小型材料或精细的解剖材料，最好用二级或三级固定，即用 50%、70%或 50
47、%、60%、70% 的酒精，最后再进行保存。从经济效果来考虑，一般酒精应跟福尔马林液等固定液混合使用。 市售的工业用酒精浓度是 95%左右，因此用时要重新配制。保存液的浓度通常是 70%。 注意事项： （1）在固定材料时要注意固定的效果，小型材料一般放在固定液中固定。大型材料必须先往体内注射一部分固定液，再放入固定液中，防止材料内部腐怀变质。用福尔马林液固定也是如此。 （2）高浓度的酒精有脱水、脱脂作用。含有多量脂肪或拟脂标本（如脑、脊髓）等都不宜用较高浓度的酒精作保存液。 （3）为了防止酒精使标本硬化，保存一些精细的材料或解剖标本时，因加入少量甘油，因为甘油具有润软组织的作用。 （4）忌跟铬
48、酸、锇酸和中铬酸钾等氧化剂配合。 3、醋酸 醋酸即乙酸，纯醋酸在低于 16.7 摄氏度时会凝成冰状固体，所以叫冰醋酸。醋酸能很快穿透组织，因为它不能沉淀细胞质中的蛋白质，组织不会硬化。一般常跟酒精、福尔马林、铬酸等容易引起组织变硬和收缩的液体混合，以起到相互抵消的作用。 醋酸固定液的常用浓度是 0.3% 5%。 4、苦味酸 苦味酸是一种黄色结晶，能溶于水（溶解度是 0.91.2%） 、酒精（溶解度是 4.9%）和苯（溶解度是 10%） 。苦味酸也能沉淀一切蛋白质，穿透较慢，固定后，组织收缩明显，但不使组织硬化。 苦味酸固定液可以在 100 毫升蒸馏水中加入苦味酸约 1.5 克，制成饱和水溶液。固体苦味酸易爆，长制成饱和水溶液保存。 5、升汞 升汞又叫氯化汞，是白色粉末，以针状结晶为最纯。通常固定时用饱和水溶液，有时也用 70%酒精作溶剂，不单独用作固定剂。升汞的穿透力较弱，通常用于小型材料，对蛋白质有强烈的沉淀作用，硬化程度中等。 固定液用饱和溶液，浓度约为 7%。 6、卡尔氏（Carls）液 配方
