1、抗菌测试试剂及仪器（1）菌种：大肠杆菌；金黄色葡萄球菌；白色念球菌。（依条件而定）（2）样品：含0%、3%、5%、7% 、9%纳米改性竹炭的聚丙烯母粒，3%纤维，含3%、5%纳米改性竹炭聚丙烯无纺布，改性、未改性的竹炭粉体，外加竹炭涤纶、炭黑涤纶母粒。（可酌情选择）（3）试剂：磷酸二氢钾（或磷酸二氢钠），琼脂，牛肉膏，蛋白胨，氯化钠，氢氧化钠，盐酸，去离子水。（4）仪器设备：分光光度计，湿热压力蒸汽灭菌锅，电热鼓风干燥箱，恒温恒湿培养箱，超净工作台，数显恒温磁力搅拌器，玻璃恒温水浴，菌落计数器，电子天平，三角烧瓶，培养皿，试管，定量刻度吸管，玻璃棒，等。实验内容在进行无菌操作时，所用的实验材料
2、、用具、实验台面、操作者的手均需消毒、灭菌、以保证无杂菌干扰，操作者的手可以用乙醇擦拭消毒。缓冲液及生理盐水稀释液配制制备34g/100ml磷酸二氢钾缓冲溶液，用NaOH溶液调节PH值为7.27.3，冷藏保存。实验前取1ml缓冲溶液用去离子水稀释至800ml，分别装入试管、烧杯、烧瓶，在0.1MPa、121下高温灭菌20min，冷藏待用。制备0.85氯化钠，在试管内各装9ml盐水，封口，在103kPa 的灭菌锅内灭菌20min 。培养基配制制备液体培养液（营养肉汤）：牛肉膏5.0g，蛋白胨10g，氯化钠5.0g，蒸馏水1000ml，加热溶解后，以0.1mol/L的NaOH调PH为7.27.3，
3、趁热分装，0.1Mpa高压蒸汽灭菌20min。制备固体培养基（营养琼脂）：牛肉膏5.0g，蛋白胨10g，琼脂粉25g，氯化钠5.0g，蒸馏水1000ml，将除琼脂以外的各成分加热溶解后，以NaOH 调PH为7.27.3，加入琼脂粉，加热煮沸，使琼脂溶化，分装入烧瓶，封口，0.1MPa蒸汽灭菌20min 。菌悬液的制备用取菌环将保存的菌种以划线法接种到营养琼脂平皿上，在培养箱中培养24h(大肠杆菌为30、金黄色葡萄球菌为37 、白色念珠菌为26)，取平皿上23个典型的菌落移到盛有肉汤培养基的三角烧瓶中，在适宜的温度下摇晃培养24h，使其进入稳定的对数生长期，用分光光度计在475nm波长处测定营养
4、肉汤中培养液的光密度为280，将该培养物用磷酸二氢钾缓冲液稀释至1000倍。振荡摇瓶试验法称取0.75g试样放入250ml的三角烧瓶中，加入70ml磷酸盐缓冲溶液，高压灭菌后加入5ml菌悬液，振摇2min，吸取1ml用0.85生理盐水稀释液作梯度稀释至l0 -2，作为振荡前样液。将0.75g试样放入上述含有70ml磷酸盐缓冲溶液和5ml菌悬液的三角烧瓶中，振摇2h，吸取1ml样液，用0.85生理盐水稀释液作梯度稀释至 l0-2，作为振荡后样液。琼脂倾注法接种平皿：分别吸取振荡前和振荡后样液各1ml ，置于灭菌平皿内，每个样液接种两个平皿。样液移入平皿后，及时将凉至46的营养琼脂培养基注入平皿约
5、15ml，并转动平皿使其混合均匀。实验时，可将营养琼脂培养基放置在 (461)水浴中，方便使用。待琼脂凝固后，翻转平皿，置于37恒温下培养48h取出，记录菌落数。数据选择依据（1）菌种液浓度的选择 振荡摇瓶试验法在操作过程中有一个关键内容就是菌种浓度的选择，因为最后细菌培养的结果需用菌落记数仪记数，如果菌种液中细菌数目过多将无法记数，而细菌数目过少，又影响实验的准确性。一般选择菌种液浓度使最后记数结果在20020000 之间，经参考有关资料，实验确定营养肉汤中培养悬浊液浓度用分光光度计在475nm 波长处测定光密度为 280，可以满足实验要求。（2）振荡时间的选择 振荡的目的是为了使抗菌试样与
6、实验菌充分接触。许多文献认为，对于抗菌整理过的织物，振荡时间达 30min 时其培养基中的细菌即消失，而未经处理的参照样的培养基上的菌落数却随着振荡时间的延长而增加。因此选择振荡时间为 30min。（3）培养时间的选择 细菌的培养是指将细菌溶液用琼脂在培养皿中制备倾点板，在恒温、恒湿状态下使细菌成长繁殖为肉眼可见的菌团，以便于记数。一般培养时间为 24h，为保证菌团完全长成，可延长培养时间到 48h。评价指标在相同条件下，通过对同一规格的抗菌试样和对照样的实验样品中菌落数的测定，根据公式：抑菌率（%）= %，分析其抗菌效果。按照有关抗菌标准，试验样与参比样XY抑菌率之差大于26%，即可认为试验样具有抗菌作用。式中：X 为振荡前的菌落数；Y 为振荡后的菌落数。
