1、Agilent 1260-LC 液相色谱仪使用、维护操作规程目 录一、 目的 .1二、 适用范围 .1三、 内容 .1四、 附件 .17五、 变更历史 .17一、 目的明确 Agilent 1260 LC 型液相色谱仪硬件使用、维护保养操作方法，使质量部检验人员有章可循。二、 适用范围本规程适用于公司 Agilent 1260-LC 型液相色谱仪使用、维护保养操作。三、 内容1. 制定依据Agilent 1260 LC system Operating Manual Agilent OpenLAB Control Operating Manual2. 工作原理：2.1. 高 效 液 相 色 谱
2、 法 是 用 高 压 输 液 泵 ， 将 具 有 不 同 特 性 的 单 一 溶 液 或不 同 比 例 的 混 合 溶 剂 、 缓 冲 液 等 流 动 相 ， 用 泵 压 入 装 有 固 定 相 的 色 谱 柱 ， 经进 样 阀 注 入 供 试 品 ， 由 流 动 相 带 入 色 谱 柱 内 ， 在 色 谱 柱 内 各 成 分 被 分 离 后 ，依 次 进 入 检 测 器 ， 色 谱 信 号 由 色 谱 工 作 站 进 行 记 录 处 理 。 利 用 色 谱 图 色 谱 峰面 积 或 峰 高 大 小 可 对 待 测 样 品 进 行 定 性 定 量 分 析 。Agilent 1260 LC型 液
3、 相 色 谱 仪 主 要 由 G1329B四 元 泵 、 G1329B自 动 控 温自 动 进 样 器 、 G1316柱 温 箱 、 G4212B二 极 管 阵 列 检 测 器 和 Open LAB色 谱 工作 站 等 部 件 组 成 。3. 基 本 操 作 步 骤3.1. 开 机 准 备 3.1.1. 启 动 计 算 机 ： 打 开 计 算 机 电 源 ， 登 陆 windows 操 作 系 统 。3.1.2. 启 动 工 作 站 ： 打 开 Agilent 1260LC 各 模 块 电 源 。 待 Agilent 1260LC 各 模 块 自 检 完 成 后 (各 模 块 右 上角 指 示
4、 灯 为 黄 色 或 者 无 色 )， 点 击 屏 幕左 下 角 “开 始 ”， 选 择 “所 有 程 序 ”， 选择 ”Agilent Technologies”选 择 “Open LAB”， 选 择 OpenLAB Control,或 单 击桌 面 图 标 则 会 进 入 到 上 图 的 界 面 。 上 面 步 骤 如 果 已 经 配 置 过 ， 则 不 需 要操 作 。3.2. 仪 器 配 置 ：3.2.1. 通 过 点 击 菜 单 左 上 方 的 ， 可 以 分 别 创 建 位 置 和 仪 器 ， 得 到如 下 的 界 面 ：3.2.2. 输 入 相 关 信 息 ， 注 意 仪 器 类
5、 型 一 栏 要 选 择 Agilent LC System， 输 入完 后 点 击 确 定 。 出 现 如 下 界 面 ：3.2.3. 选 定 刚 刚 创 建 的 仪 器 名 称 ， 点 击 “配 置 仪 器 ”，3.2.4. 选 择 “配 置 模 块 ”， 注 意 不 要 选 择 “使 用 经 典 驱动 程 序 ”。 如 果 仪 器 中 包 括 DAD、 FLD， 则 需 要 选 择“3D 光 谱 评 估 ”。 点 击 确 定 。3.2.5. 选 择 “是 ”， 来 配 置 仪 器 ；3.2.6. 选 择 IP 地 址 ， 输 入 仪 器 IP， 默 认 地 址 为 192.168.254
6、.11。 点 击 确 定 。3.2.7. 系 统 会 根 据 指 定 的 IP 地 址 来 找 到 所 配 置 的 模 块 及 其 相 关 信 息 ， 点 击确 定 。3.2.8. 再 次 点 击 确 定 ， 使 配 置 生 效 。3.2.9. 点击“启动”或者“离线启动”来打开在线或离线工作站，也可点击“创建快捷方式”来生成 。3.3. 开启工作站：3.3.1. 双击桌面 图标，工作站打开，点击“方法和运行控制 ”或者在“视图”中选 择“方法和运行控制”。打开仪器控制视图：选择“视图系统视图”，即可显示仪器控制视图，选择“视图 样品视图”，即可显示样品信息视图。颜 色 说 明 ：颜 色位 置
7、 无 色 黄 色 绿 色 红 色 蓝 色 灰 色模 块 右 上角 状 态 灯未 开 电 源 或者 模 块 准 备就 绪 。模 块 未 准 备就 绪 。正 在 进 样 分析 。模 块 出 错 ；所 有 模 块 红色 ， 仪 器 有漏 液 。 工 作 站 图形 颜 色 模 块 未 准 备就 绪 。模 块 准 备 就绪 。出 错 或 者 不能 联 机 。正 在 进 样分 析 。此 模 块 没启 用 。3.3.2. 可 将 鼠 标 移 至 系 统 或 各 个 模 块 的 状 态 指 示 栏 ， 系统 会 自 动 显 示 未 就 绪 或 出 错 的 原 因 。3.3.3. 配 置 流 动 相 ： 将 流
8、 动 相 装 入 溶 剂 瓶 中 。 设 置 溶剂 瓶 参 数 ， 在 溶 剂 瓶 图 形 单 击 鼠 标 左 键 ， 出 现 图 形 如右 图 所 示 ： 点 击 “溶 剂 瓶 填 充 量 ”设 置 溶 剂 瓶 中 流 动相 实 际 体 积 ， 也 可 设 定 低 体 积 关 泵 。3.3.4. 冲 洗 流 动 相 管 路 ： 反 时 针 旋 开 泵 模 块 上 的 溶 液排 空 阀 （ 注 ： 旋 动 半 圈 即 可 ） 。 右 键 单 击 泵 视 图 的 空白 处 ， 选 择 “方 法 ”， 设 置 “流 速 ”为 3ml/min， 四 元 泵 应 分 别 将A,B,C,D 四 个 通
9、道 设 置 “溶 剂 ”为 100%(点 击 右 图 中 各 个 通 道 后 面的 方 框 ， 即 可 开 启 “%”设 置 框 ， 输 入 需 要 设 置 的 数 值 百 分 比 后 ， 单击 右 侧 的 空 白 框 ， A 相 即 可 自 动 配 置 为 100%-(%B+%C+%D)的 百 分 比 )， 冲洗 ， 冲 洗 时 间 为 2 5min 为 宜 。3.3.5. 开 启 模 块 ： 鼠 标 右 键 点 击 每 个 模 块 的 空 白 处 都 会 弹 出 提 示 框 ， 选 择“控 制 ” 即 可 在 新 的 窗 口 中 选 择 打 开 或 者 关 闭 各 个 模 块 。 也 可
10、在 仪 器 视 图 中选 择 “打 开 ”， 监 视 基 线 ： 点 击 “视 图 在 线 信 号 ”打开 “在 线 图 谱 ”点 击 “改 变 ”按 钮 ， 选 择 “可 选 信 号 ”中 需 要 监 视 的 信 号 ，“添 加 ”到 “选 定 信 号 中 ”。 调 整 “窗 口 ”中 “X 轴 范 围 ”， 如 需 要 画 “0”点 基 线 ， 请 选 择 “画 零 线 ”。 调 整 Y 轴 “Y 轴 范 围 ”与 “偏 移 量 ”或 者 选 择“Y 轴 自 动 调 整 ”来 选 择 合 适 的 监 视 图 形 平 衡 色 谱 柱 、 进 样 分 析 ： 关 闭 溶 液排 空 阀 （ 确
11、认 泵 流 量 ： 1ml/min） ， 监 视 压 力 和 信 号 基 线 等 待 平 稳 后 ， 可 以 进样 采 集 分 析 。3.4. 建立全新完整方法向导：3.4.1. 新 建 完 整 方 法 ： 选 择 “方 法 新 建 方 法 ”后 ， 点 击 “方 法 编 辑 完 整 方法 ”编 辑 新 方 法 。3.4.2. 选 择 “方 法 信 息 ”、 “仪 器 /采 集 ”、 “数 据 分 析 ”,“数 据 分 析 ”也 可 以在 “数 据 采 集 后 ”后 再 加 入 方 法 中 。3.4.3. 写 入 方 法 注 释 ， 而 后 按 照 数 据 采 集 方 法 编 辑 与 数 据
12、分 析 方 法 编 辑 中所 述 内 容 ， 根 据 具 体 的 仪 器 配 置 完 成 所 有 模 块 参 数 的 设 置 。3.4.4. 数 据 采 集 方 法 编 辑 ：a. 泵 设 置 ： 设 置 泵 右 键点 击 泵 模 块 视 图 空 白 处 ， 选择 “方 法 ”或 者 点 击 进 入 泵的 参 数 设 置 界 面 （ 如 右 图 ） 。在 “压 力 限 -上 限 ” 200 时 ， 流 速 设 置 范 围 为 ：0 5.00ml/min； 在 “压 力 限 -上 限 ” 200 时 ， 流 速 设 置范 围 为 ： 0 10.00ml/min 停 止 时 间 设 置 泵 停 止
13、 分 析 的 时 间 ， 时 间 范 围 为 ： 0.0 99999.00min或 “无 限 制 ” 后 运 行 时 间 泵 在 后 运 行 时 间 保 持 后 运 行 状 态 ， 从 而 延 迟 下 一 个 分 析的 开 始 。 在 溶 剂 成 分 改 变 后 (如 ， 在 梯 度 洗 脱 后 )， 可 以 使 用 “后 运 行 时 间 ”是 色 谱 柱 达 到 平 衡 ， 时 间 范 围 为 ： 0.0 99999.00min 或 “无 限 制 ”。 压 力 限 “上 /下 限 ”是 最 大 /小 压 力 限 制 ， 达 到 “上 限 ”或 者 “下 限 ”值 时 ， 泵 将 自 动 关
14、闭 ， 从 而 防 止 分 析 系 统 压 力 超 限 （ 压 力 上 限 低 于 实 际 值 时 ，设 备 会 出 现 错 误 信 息 。 ） 。 溶 剂 溶 剂 B、 C 和 D 的 百 分 比 可 以 设 置 为 0 到 100%之 间 的 任 何值 。 “溶 剂 A”通 常 输 送 剩 余 的 量 ： 100%-(%B+%C+%D)。 时 间 表 通 过 在 “时 间 ”字 段 中 输 入 时 间 并 在 时 间 表 的 以 下 字 段 中 输入 适 当 的 值 ， 可 以 使 用 时 间 表 对 分 析 过 程 中 参 数 进 行 设 置 。 泵 时 间 表 中 的 值随 时 间 从
15、 初 始 值 到 时 间 表 中 定 义 的 时 间 所 对 应 的 值 发 生 线 性 变 化 （ 如 ， 流 速和 压 力 最 大 限 值 ） 。b. 泵 的 运 行 控 制右 键 点 击 泵 模 块 视 图 空 白 处 ， 选择 “控 制 ”进 入 泵 的 控 制 界 面 。 （ 如 右图 ） 泵 控 制 泵 的 “启 动 ”， “关 闭 ”或 者 “待 机 ”状 态 。 泵 密 封 垫 清 洗 组 件 （ Seal-Wash） 控 制 泵 密 封 垫 清 洗 蠕 动 泵 的 开关 以 及 定 期 开 关 的 程 序 。 （ 运 行 周 期 一定 要 设 置 ， 不 能 长 期 运 行
16、， 防 止 部 件 损 坏 。 ）c. 设 置 自 动 进 样 器 右 键 点 击 进 样 器 模 块 视 图的 空 白 处 ， 选 择 “方 法 ”后进 入 进 样 器 的 参 数 设 置 界 面 。（ 如 右 图 ） 标 准 进 样 简 单 的 进样 ， 在 “进 样 量 ”字 段 中 制定 进 样 量 。 进 样 量 取 决 于 自 动 进 样 器 的 配 置 设 置 （ 进 样 量 为 1 100l） 。 洗 针 进 样 可 以 指 定 进 样 包 括 在 抽 取 样 品 后 ， 将 针 移 动 到 针 座 之 前 进行 针 清 洗 ， 在 “针 清 洗 ”字 段 中 指 定 装 有
17、清 洗 溶 剂 的 位 置 （ 瓶 ） ， 清 洗 瓶 应不 加 密 封 盖 。 使 用 进 样 器 程 序 可 以 使 用 当 前 的 进 样 器 程 序 ， 将 显 示 当 前 进 样 器 程 序 中 的 行 数 。 选 择 “编 辑 ”可 以 显 示 “进 样 器 程 序 ”， 以 进 行 编 辑 。 最 优 化 启 用 重 叠 进 样 ， 可 适 当 减 少 运 行 时 间 。d. 柱 温 箱 设 置 ：右 键 点 击 柱 温 箱 模 块 视 图空 白 处 ， 选 择 “方 法 ”进 入柱 温 箱 的 参 数 设 置 界 面 （ 如右 图 ） 温 度 控 制 柱 温 箱 温度 。 限
18、值 ： -5.0 到 80.0 度 。柱 温 箱 只 能 冷 却 到 比 环 境 温度 低 10 度 的 温 度 。 停 止 时 间 设 置 柱 温 箱 停 止 分 析 的 时 间 。 一 般 设 置 为 “与 泵 一 致 ”即 可 。 时 间 表 此 处 可 以 变 化 的 参 数 包 括 左 右 加 热 模 块 的 温 度 。e. 设 置 DAD 参 数 ：右 键 点 击 DAD 模 块 视 图 的 空 白 处 ， 选 择 “方 法 ”进 入 DAD 的 参 数 设 置界 面 （ 如 右 图 ） 信 号 样 品 ： 检测 到 的 样 品 吸 光 度 所 对 应的 波 长 。 参 比 波 长
19、 对 应 的吸 光 度 将 从 样 品 波 长 对 应的 吸 光 度 中 扣 除 ； 带 宽 ：样 品 波 长 的 带 宽 。 带 宽 决定 了 检 测 吸 光 度 的 波 长 范围 通 常 小 于 20nm， 如 ，样 品 波 长 为 254nm， 样 品带 宽 为 20nm， 则 从244 264nm 的 波 长 范 围 检 测 吸 光 度 ； 参 比 ： 参 比 吸 光 度 对 应 的 波 长 。 参 比波 长 可 以 补 偿 由 于 基 线 吸 光 度 中 的 变 化 (如 ， 由 于 梯 度 洗 脱 中 溶 剂 组 成 的 变 化 )而引 起 的 波 动 ； 带 宽 ： 参 比 波
20、长 的 带 宽 通 常 设 定 为 小 于 100nm。 二 极 管 阵 列 检测 器 可 以 存 储 8 个 信 号 停 止 时 间 设 置 DAD 停 止 分 析 时 间 。 一 般 设 置 为 “与 泵 一 致 ”即 可 。 光 谱 存 储 ： 定 义 了 在 信 号 A 上 提 取 并 保 存 光 谱 的 点 。 “无 ”， 未 提取 光 谱 ； “顶 点 +基 线 ”， 在 风 的 顶 点 和 基 线 处 提 取 光 谱 ； “顶 点 +斜 率 +基 线 ”， 在 峰 的 顶 点 、 基 线 、 上 升 斜 率 和 下 降 斜 率 提 取 光 谱 ； “峰 中 的 全 部 ”， 提取
21、 峰 内 的 所 有 光 谱 ； “每 个 一 条 光 谱 ”， 选 择 “全 部 ”， 将 连 续 提 取 光 谱 ， 但是 只 每 个 一 条 光 谱 存 储 一 条 光 谱 ， 其 他 光 谱 将 被 弃 用 ， 这 样 可 以 减 少 必 要 的数 据 存 储 量 ； “全 部 ”， 根 据 “峰 宽 ”设 置 连 续 提 取 光 谱 。 每 个 峰 宽 采 集 八 条光 谱 ， 一 条 光 谱 的 采 集 时 间 略 少 于 峰 宽 除 以 8， 即 大 于 或 者 等 于 0.01s 且 小于 或 等 于 2.55s 范 围 定 义 光 谱 存 储 的 波 长 范 围 。 从 19
22、0nm 到 950nm 步 长 定 于 光 谱 存 储 的 波 长 分 离 度 。 从 0.10nm 到 100.00nm 阈 值 预 期 的 最 小 峰 高 度 。 峰 检 测 器 忽 略 低 于 阈 值 的 所 有 峰 且 不 保 存光 谱 。 限 值 ： 0.001 到 1000.00mAU， 步 长 为 0.001mAU 狭 缝 设 置 检 测 器 的 光 学 带 宽 ； 狭 缝 越 窄 ， 仪 器 的 光 学 带 宽 就 越 小 ，但 其 灵 敏 度 也 越 低 。 光 学 带 宽 越 小 ， 光 谱 的 分 离 度 就 越 高 。 温 度 控 制 二 极 管 阵 列 检 测 器 的
23、 光 学 设 备 的 温 度 控 制 。 保 持 光 学 设 备在 一 个 恒 定 的 温 度 可 以 提 高 不 稳 定 高 温 环 境 下 的 基 线 稳 定 性 。 时 间 表 DAD 中 可 改 变 的 参 数 包 括 自 动 平 衡 、 更 改 信 号 、 更 改 阈 值 、更 改 峰 宽 、 更 改 光 谱 采 集 模 式 。3.5. 方 法 的 保 存 与 调 用3.5.1. 保 存 方 法 ： 选 择 “方 法 保 存 方 法 /方 法 另 存 为 ”3.5.2. 保 存 即 时 改 变 的 方 法 ： 通 过 在 线 改 变 数 据 采 集 或 者 在 线 /离 线 改 变
24、数据 分 析 参 数 而 变 更 方 法 ， 可 以 通 过 选 择 “方 法 保 存 方 法 /方 法 另 存 为 ”或 者保 存 新 的 参 数 到 现 在 的 方 法 中 或 者 另 存 为 新 方 法3.5.3. 调 用 方 法 ： 通 过 选 择 “方 法 -调 用 方 法 ”或 者 调 用 已 有 的 方 法 。方 法 调 用 后 便 立 即 生 效 。3.6. 进 样 设 置 ：3.6.1. 单 针 进 样 ： 选 择 “运 行 控 制 样 品 信 息 ”。 查 看 单 针 ， 点 击 。 路 径 选 择 数 据 文 件 存 储 路 径 ； 选 择 手 动 或 者 前 缀 /计
25、数 器 命 名 数 据 文 件 名 ； 样 品 位 置 设 置 样 品 位 置 ， 直 接 填 写 数 字 即 可 ， 不 需 要 写 “样 品 瓶 ”； 运 行 方 法 保 存 样 品 信 息 并 运 行 方 法 ； 确 定 保 存 样 品 信 息 ， 后 “运 行 控 制 -运 行 方 法 ”；3.6.2. 序 列 进 样 ： 利 用 自 动 进 样 器 自 动 批 量 进 样 。 查 看 序 列 ， 点 击 选 择 “序 列 序 列 参 数 ”设 置 数 据 路 径 如 右 图 ： 在 调 用 新 方 法 后 等 待 序 列进 样 时 更 改 某 个 样 品 方 法 后 平 衡 色 谱柱
26、 时 间 。 后 序 列 命 令 /宏 在 运 行 序 列后 运 行 命 令 ：LAMPALL OFF关 闭 检 测 器 灯 ； PUMPALL OFF关 闭 泵 ;STANDBY系 统 待 机 ; SHUTDOWN.MAC关 闭 系 统 选 择 “序 列 序 列 表 ” 样 品 瓶 填 写 样 品 瓶 位 置 ； 样 品 名 称 填 写 样 品 名 称 ； 方 法 名 称 点 击 ， 出 现 下 拉 框 ， 选 择 方 法 进 样 次 数 /瓶 填 写 每 个 样 品 瓶 进 样 次 数 ； 样 品 类 型 选 择 样 品 类 型 ： 样 品 ， 标 准 样 品 、 控 制 样 品 (一 般 选 样 品 ) 校 正 级 别 在 选 择 标 准 样 品 后 ， 填 写 此 瓶 标 准 样 品 的 校 正 级 别 ； 进 样 量 如 空 缺 则 为 自 动 进 样 器 设 置 进 样 量 ；
