53种缓冲液配制.doc

1、53 种缓冲液配制缓冲液配制 作者: ivy3dball 发布日期: 2006-1-05 出自: http:/ 缓冲液 乙醇醋酸铵缓冲液(pH3.7) 取 5mol/L 醋酸溶液 15.0ml，加乙醇 60ml 和水 20ml,用 10mol/L 氢氧化铵溶液调节 pH 值至 3.7，用水稀释至 1000ml，即得。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.0) 取三羟甲基氨基甲烷 12.14g,加水 800ml,搅拌溶解，并稀释至 1000ml,用 6mol/L 盐酸溶液调节 pH 值至 8.0,即得。 三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.1) 取氯化钙 0.294g,加 0.2mol/L 三羟甲基氨基

2、甲烷溶液 40ml 使溶解，用 1mol/L 盐酸溶液调节 pH 值至 8.1，加水稀释至 100ml，即得。三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH9.0) 取三羟甲基氨基甲烷 6.06g,加盐酸赖氨酸 3.65g、氯化钠 5.8g、乙二胺四醋酸二钠 0.37g，再加水溶解使成1000ml，调节 pH 值至 9.0，即得。乌洛托品缓冲液 取乌洛托品 75g，加水溶解后，加浓氨溶液 4.2ml，再用水稀释至 250ml,即得。 巴比妥缓冲液(pH7.4) 取巴比妥钠 4.42g,加水使溶解并稀释至 400ml，用2mol/L 盐酸溶液调节 pH 值至 7.4，滤过，即得。巴比妥缓冲液(pH8.6) 取巴比

3、妥 5.52g 与巴比妥钠 30.9g,加水使溶解成2000ml，即得。巴比妥氯化钠缓冲液(pH7.8) 取巴比妥钠 5.05g,加氯化钠 3.7g 及水适量使溶解,另取明胶 0.5g 加水适量，加热溶解后并入上述溶液中。然后用0.2mol/L 盐酸溶液调节 pH 值至 7.8，再用水稀释至 500ml，即得。 甲酸钠缓冲液(pH3.3) 取 2mol/L 甲酸溶液 25ml，加酚酞指示液 1 滴，用2mol/L 氢氧化钠溶液中和，再加入 2mol/L 甲酸溶液 75ml,用水稀释至200ml,调节 pH 值至 3.253.30,即得。 邻苯二甲酸盐缓冲液(pH5.6) 取邻苯二甲酸氢钾 10

4、g，加水 900ml,搅拌使溶解，用氢氧化钠试液(必要时用稀盐酸)调节 pH 值至 5.6,加水稀释至1000ml，混匀，即得。枸橼酸盐缓冲液 取枸橼酸 4.2g,加 1mol/L 的 20乙醇制氢氧化钠溶液40ml 使溶解,再用 20乙醇稀释至 100ml，即得。 枸橼酸盐缓冲液(pH6.2) 取 2.1枸橼酸水溶液，用 50氢氧化钠溶液调节pH 值至 6.2，即得。 枸橼酸磷酸氢二钠缓冲液(pH4.0) 甲液：取枸橼酸 21g 或无水枸橼酸19.2g,加水使溶解成 1000ml，置冰箱内保存。乙液：取磷酸氢二钠71.63g，加水使溶解成 1000ml。 取上述甲液 61.45ml 与乙液

5、38.55ml 混合，摇匀，即得。 氨氯化铵缓冲液(pH8.0) 取氯化铵 1.07g，加水使溶解成 100ml，再加稀氨溶液(130)调节 pH 值至 8.0，即得。 氨氯化铵缓冲液(pH10.0) 取氯化铵 5.4g，加水 20ml 溶解后，加浓氯溶液 35ml，再加水稀释至 100ml，即得。 硼砂氯化钙缓冲液(pH8.0) 取硼砂 0.572g 与氯化钙 2.94g，加水约800ml 溶解后,用 1mol/L 盐酸溶液约 2.5ml 调节 pH 值至 8.0，加水稀释至1000ml，即得。硼砂碳酸钠缓冲液(pH10.8 11.2) 取无水碳酸钠 5.30g,加水使溶解成1000ml；另

6、取硼砂 1.91g，加水使溶解成 100ml。临用前取碳酸钠溶液973ml 与硼砂溶液 27ml，混匀，即得。 硼酸氯化钾缓冲液(pH9.0) 取硼酸 3.09g,加 0.1mol/L 氯化钾溶液 500ml使溶解，再加 0.1mol/L 氢氧化钠溶液 210ml，即得。 醋酸盐缓冲液(pH3.5) 取醋酸铵 25g，加水 25ml 溶解后，加 7mol/L 盐酸溶液 38ml，用 2mol/L 盐酸溶液或 5mol/L 氨溶液准确调节 pH 值至 3.5(电位法指示),用水稀释至 100ml,即得。 醋酸锂盐缓冲液(pH3.0) 取冰醋酸 50ml，加水 800ml 混合后，用氢氧化锂调节

7、pH 值至 3.0，再加水稀释至 1000ml，即得。 醋酸醋酸钠缓冲液(pH3.6) 取醋酸钠 5.1g,加冰醋酸 20ml，再加水稀释至250ml,即得。 醋酸醋酸钠缓冲液(pH3.7) 取无水醋酸钠 20g,加水 300ml 溶解后，加溴酚蓝指示液 1ml 及冰醋酸 6080ml，至溶液从蓝色转变为纯绿色，再加水稀释至 1000ml，即得。 醋酸醋酸钠缓冲液(pH3.8) 取 2mol/L 醋酸钠溶液 13ml 与 2mol/L 醋酸溶液 87ml,加每 1ml 含铜 1mg 的硫酸铜溶液 0.5ml,再加水稀释至 1000ml，即得。醋酸醋酸钠缓冲液(pH4.5) 取醋酸钠 18g,加

8、冰醋酸 9.8ml,再加水稀释至1000ml,即得。 醋酸醋酸钠缓冲液(pH4.6) 取醋酸钠 5.4g,加水 50ml 使溶解，用冰醋酸调节 pH 值至 4.6，再加水稀释至 100ml，即得。 醋酸醋酸钠缓冲液(pH6.0) 取醋酸钠 54.6g，加 1mol/L 醋酸溶液 20ml 溶解后，加水稀释至 500ml，即得。醋酸醋酸钾缓冲液(pH4.3) 取醋酸钾 14g，加冰醋酸 20.5ml，再加水稀释至 1000ml，即得。 醋酸醋酸铵缓冲液(pH4.5) 取醋酸铵 7.7g，加水 50ml 溶解后，加冰醋酸6ml 与适量的水使成 100ml，即得。 醋酸醋酸铵缓冲液(pH6.0) 取

9、醋酸铵 100g，加水 300ml 使溶解，加冰醋酸 7ml,摇匀，即得。 磷酸三乙胺缓冲液 取磷酸约 4ml 与三乙胺约 7ml，加 50甲醇稀释至1000ml，用磷酸调节 pH 值至 3.2，即得。 磷酸盐缓冲液 取磷酸二氢钠 38.0g，与磷酸氢二钠 5.04g,加水使成 1000ml,即得。磷酸盐缓冲液(pH2.0) 甲液:取磷酸 16.6ml，加水至 1000ml，摇匀。乙液：取磷酸氢二钠 71.63g，加水使溶解成 1000ml。取上述甲液 72.5ml 与乙液27.5ml 混合，摇匀，即得。 磷酸盐缓冲液(pH2.5) 取磷酸二氢钾 100g，加水 800ml，用盐酸调节 pH至

10、 2.5,用水稀释至 1000ml。磷酸盐缓冲液(pH5.0) 取 0.2mol/L 磷酸二氢钠溶液一定量, 用氢氧化钠试液调节 pH 值至 5.0，即得。磷酸盐缓冲液(pH5.8) 取磷酸二氢钾 8.34g 与磷酸氢二钾 0.87g,加水使溶解成 1000ml，即得。 磷酸盐缓冲液(pH6.5) 取磷酸二氢钾 0.68g,加 0.1mol/L 氢氧化钠溶液15.2ml，用水稀释至 100ml，即得。 磷酸盐缓冲液(pH6.6) 取磷酸二氢钠 1.74g、磷酸氢二钠 2.7g 与氯化钠1.7g，加水使溶解成 400ml，即得。 磷酸盐缓冲液(含胰酶)(pH6.8) 取磷酸二氢钾 6.8g,加水

11、 500ml 使溶解, 用0.1mol/L 氢氧化钠溶液调节 pH 值至 6.8；另取胰酶 10g，加水适量使溶解，将两液混合后,加水稀释至 1000ml，即得。磷酸盐缓冲液(pH6.8) 取 0.2mol/L 磷酸二氢钾溶液 250ml，加 0.2mol/L 氢氧化钠溶液 118ml，用水稀释至 1000ml，摇匀，即得。磷酸盐缓冲液(pH7.0) 取磷酸二氢钾 0.68g，加 0.1mol/L 氢氧化钠溶液29.1ml，用水稀释至 100ml，即得。 磷酸盐缓冲液(pH7.2) 取 0.2mol/L 磷酸二氢钾溶液 50ml 与 0.2mol/L 氢氧化钠溶液 35ml，加新沸过的冷水稀释

12、至 200ml，摇匀，即得。 磷酸盐缓冲液(pH7.3) 取磷酸氢二钠 1.9734g 与磷酸二氢钾 0.2245g,加水使溶解成 1000ml，调节 pH 值至 7.3，即得。 磷酸盐缓冲液(pH7.4) 取磷酸二氢钾 1.36g， 加 0.1mol/L 氢氧化钠溶液79ml，用水稀释至 200ml，即得。 磷酸盐缓冲液(pH7.6) 取磷酸二氢钾 27.22g，加水使溶解成 1000ml，取50ml，加 0.2mol/L 氢氧化钠溶液 42.4ml，再加水稀释至 200ml，即得。磷酸盐缓冲液(pH7.8) 甲液：取磷酸氢二钠 35.9g，加水溶解，并稀释至500ml。乙液：取磷酸二氢钠

13、2.76g，加水溶解，并稀释至 100ml。取上述甲液91.5ml 与乙液 8.5ml 混合，摇匀，即得。 磷酸盐缓冲液(pH7.8 8.0) 取磷酸氢二钾 5.59g 与磷酸二氢钾 0.41g，加水使溶解成 1000ml，即得。 磷酸盐缓冲液的配制磷酸盐是生物化学研究中使用最广泛的一种缓冲剂，由于它们是二级解离，有二个 pKa 值，所以用它们配制的缓冲液，pH 范围最宽：NaH2PO4： pKa12.12，pKa27.21； Na2HPO4：pKa17.21，pKa212.32配酸性缓冲液：用 NaH2PO4，pH14，配中性缓冲液：用混合的两种磷酸盐，pH68，配碱性缓冲液：用 Na2HP

14、O4，pH1012。用钾盐比钠盐好，因为低温时钠盐难溶， 钾盐易溶，但若配制 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的缓冲液时，只能用磷酸钠而不能用磷酸钾，因为 SDS(十二烷基硫酸钠)会与钾盐生成难溶的十二烷基硫酸钾。磷酸盐缓冲液的优点为：容易配制成各种浓度的缓冲液；适用的 pH 范围宽；pH 受温度的影响小；缓冲液稀释后 pH 变化小，如稀释 10 倍后 pH 的变化小于 0.1。其缺点为：易与常见的钙 Ca2+离子、镁 Mg2+离子以及重金属离子缔合生成沉淀；会抑制某些生物化学过程，如对某些酶的催化作用会产生某种程度的抑制作用. Na2HPO42H2O 分子量 = 178.05，0.2 mol/L

15、溶液为 85.61克/升。Na2HPO42H2O 分子量 = 358.22，0.2 mol/L 溶液为 71.64克/升。Na2HPO42H2O 分子量 = 156.03，0.2 mol/L 溶液为 31.21克/升.试剂： NaH2PO42H2O pH 0.2mol/L NaH2PO4(ml) 0.2mol/L Na2HPO4(ml)5.7 93.5 6.55.8 92.0 8.05.9 90.0 10.06.0 87.7 12.36.1 85.0 15.06.2 81.5 18.56.3 77.5 22.56.4 73.5 26.56.5 68.5 31.56.6 62.5 37.56.7

16、 56.5 43.56.8 51.0 49.06.9 45.0 55.07.0 39.0 61.07.1 33.0 67.07.2 28.0 72.07.3 23.0 67.07.4 19.0 81.07.5 16.0 84.07.6 13.0 87.07.7 10.5 89.57.8 8.5 91.57.9 7.0 93.08.0 5.3 94.7Na2HPO412H2O配制方法：配制时，常先配制 0.2mol/L 的 NaH2PO4 和 0.2mol/L 的Na2HPO4，两者按一定比例混合即成 0.2mol/L 的磷酸盐缓冲液（ PB） ，根据需要可配制不同浓度的 PB 和 PBS。（1

17、）0.2mol/L 的 Na2HPO4；称取 Na2HPO4.12H2O 31.2g(或 NaH2PO4H2O 27.6g)加重蒸水至 1000ml 溶解。（2）0.2mol/L 的 Na2HPO4：称取 NaHPO4.12H2O 71.632g（或 Na2HPO47H2O 53.6g 或 Na2HPO42H2O 35.6g）加重蒸水至 1000ml 溶解。（3）0.2mol/L pH7.4 的 PB 的配制：取 19ml 0.2mol/L 的 NaH2PO4 和 81ml 0.2mol/L 的 Na2HPO412H2O,充分混合即为 0.2mol/L 的 PB（pH 约为 7.47.5） 。

18、若 pH 偏高或偏低，可通过改变二者的比例来加以调整，室温保存即可。0.2mol/L 磷酸盐缓冲液（pH5.78.0）pH 0.2mol/L NaH2PO4(ml) 0.2mol/L Na2HPO4(ml)5.7 93.5 6.55.8 92.0 8.05.9 90.0 10.06.0 87.7 12.36.1 85.0 15.0 6.2 81.5 18.56.3 77.5 22.56.4 73.5 26.56.5 68.5 31.56.6 62.5 37.56.7 56.5 43.56.8 51.0 49.06.9 45.0 55.07.0 39.0 61.07.1 33.0 67.07.2

19、 28.0 72.07.3 23.0 67.07.4 19.0 81.07.5 16.0 84.07.6 13.0 87.07.7 10.5 89.5 7.8 8.5 91.57.9 7.0 93.08.0 5.3 94.7六次甲基四胺缓冲溶液（PH5.5）：称取 200g 六次甲基四胺于 500ml 烧 杯中，加 200ml 水溶解，加 70ml 盐酸（1+1） ，用水稀释至 1000ml01mol/LpH5。6 的柠檬酸缓冲溶液，A 液（0.1vmol/l 柠檬酸）称取分析纯柠檬酸 21。01g 用蒸馏水溶解并定容至 1 升，B 液， （0。1mol/l）柠檬酸钠，称取柠檬酸钠 29。41

20、g 用蒸馏水溶解并定容至 1l，取 A 液 55ml 与 B 液 145ml混匀，即为 0。1mol/lpH5。6 的柠檬酸缓冲溶液。01MolL PH56 的柠檬酸缓冲液： A 液(01Mol L 柠檬酸)：称取分析纯柠檬酸 2101g，用蒸馏水溶解并定容至 1L；B 液（01Mol L 柠檬酸钠）：称取柠檬酸钠 2941g 用蒸馏水溶解并定容至 1L；取 A 液 55Ml 与 B 液 145Ml混匀，即为 01MolL PH56 的柠檬酸缓冲液标准缓冲溶液(均用 pH 标准缓冲物质配制)1.1 苯二甲酸氢钾标准缓冲溶液：c(KHC8H4O4)=0.05 mol/L(25时，pHs=4.00

21、3)。苯二甲酸氢钾的 pH 标准缓冲物质，有小塑料袋和瓶装两种，配制方法如下：a)袋装配制法：在 250 mL(或 500 mL)量瓶中 (根据袋中标准缓冲物质量，选择量瓶大小)，按袋上的说明配制成所需的浓度。保存于聚乙烯瓶中。b)瓶装配制法：称取 5.10 g 苯二甲酸氢钾(KHC8H4O4 预先在 1155 ，烘 23 h，于干燥器中冷却)，溶于水并稀释至 500 mL，混匀。保存于聚乙烯瓶中。1.2 0.025 mol/L 磷酸二氢钾 (KH2PO4)和 0.025 mol/L 磷酸氢二钠(Na2HPO4)混合标准缓冲溶液(25时，pHs=6.864)：磷酸二氢钾和磷酸氢二钠的 pH 标

22、准缓冲物质，有小塑料袋装(混合磷酸盐)和瓶装(两种 pH 标准缓冲物质分别包装)两种。配制方法如下：a)袋装配制法：在量瓶(根据袋上说明确定量瓶大小)中按袋上说明配制成所需浓度后，保存于聚乙烯瓶中。b)瓶装配制法：迅速称取 3.40 g 磷酸二氢钾(KH2PO4)和 3.55 g 磷酸氢二钠(Na2HPO4)(均预先在 1155烘 23 h，于干燥器中冷却)溶于蒸馏水，转入 1 000 mL 量瓶中，加水至标线，混匀。1.3 0.008 695 mol/L 磷酸二氢钾(KH2PO4)和 0.030 43 mol/L 磷酸氢二钠(Na2HPO4)标准混合缓冲溶液 (25时，pH=7.413)：磷

23、酸二氢钾和磷酸氢二钠两种 pH 标准缓冲物质分别用瓶包装，配制方法如下：迅速称取 1.18 g 磷酸二氢钾和 4.31 g 磷酸氢二钠( 均预先在 1155 烘 23 h，于干燥器中冷却 )，溶于水，全量移入 1 000 mL 量瓶中，加水至标线，混匀。保存于聚乙烯瓶中。1.4 硼砂标准缓中溶液：c(Na2B4O710H2O)=0.010 mol/L(25 时，pHs=9.182)。硼砂的 pH 标准缓冲物质也有塑料袋装和瓶装两种，配制方法如下：a)袋装配制法：在 500 mL 量瓶中，按袋上说明配制成所需浓度后，分装于 5 个 100 mL 聚乙烯瓶中，瓶口用石蜡熔封。b)瓶装配制法：称取

24、1.91 g 硼砂(预先在盛有蔗糖饱和溶液的干燥器中平衡两昼夜)，溶于刚煮沸冷却的蒸馏水，全量转入 500 mL 量瓶中，加水至标线，混匀。分装于 5 个100 mL 聚乙烯瓶中，瓶口用石蜡熔封，有效期为三个月，经常使用的缓冲溶液，每周更换一次。各种标准缓冲溶液的 pH 值随温度的变化而变化。045的 pH 值列于表 21中。27.1.3.2 饱和氯化钾溶液：称取 40 g 氯化钾(KCl) ，加 100 mL 水，充分搅拌后盛于试剂瓶中 (此溶液应与氯化钾固体共存)。表 21 045 标准缓冲物质的 pH 值温度， 苯二甲酸氢钾(27.1.3.1.1) 混合磷酸盐(27.1.3.1.2) 磷

25、酸盐(27.1.3.1.3) 硼砂(27.1.3.1.4)0 4.006 6.981 7.534 9.4585 3.999 6.949 7.500 9.39110 3.996 6.921 7.472 9.33020 3.998 6.879 7.429 9.22625 4.003 6.864 7.413 9.18230 4.010 6.852 7.400 9.14235 4.019 6.844 7.389 9.10540 4.029 6.838 7.380 9.07245 4.042 6.834 7.373 9.0421、PBS:取 ZLI-9061 PBS 溶于 1000ml 的蒸馏水中，混匀

26、，测 pH 值应在 7.27.4 之间，若偏离此范围，请用 0.1N 的 HCL 或 NaOH 调整。2、TBS：2.1 Tris 缓冲液配方：（0.5 M pH7.6）Tris（三羟甲基氨基甲烷） 60.57g1N HCL 约 420ml双蒸水 加至 1000mlTris 缓冲液配制方法：先以少量双蒸水（300500ml）溶解 Tris，加入 HCl 后，用 HCl（1N）或NaOH（1N）将 pH 调至 7.6， 最后双蒸水加至 1000ml。此液为储备液，4冰箱中保存。2.2 TBS 配方：Tris-HCI 缓冲液（0.5M pH7.6）100mlNaCI 8.59g (0.15mol/

27、L)双蒸水 加至 1000mlTBS 配制方法：先以少量双蒸水溶解 NaCl，再加入 Tris-HCl 缓冲液，最后加双蒸水至1000ml，充分摇匀。3、枸橼酸盐缓冲液（Citrate buffer）：3.1 储存液：A. 0.1M 枸橼酸溶液：称取 21.01g 枸橼酸（C 6H8O7H20）溶于 1000ml 蒸馏水中。B. 0.1M 枸橼酸钠溶液：称取 29.41g 枸橼酸钠（C 6H5Na3O72H20）溶于 1000ml蒸馏水中。3.2 工作液：取 9ml A 液和 41ml B 液加入 450ml 蒸馏水中，溶液 pH 值应为 6.00.14、胰酶（Trypsin）：4.1 ZLI

28、-9011 胰蛋白酶消化液：常用浓度为 0.125%，即使用前将一滴试剂 1 胰酶溶液和三滴试剂 2 胰酶稀释液均匀混合（1:3 稀释），则可直接滴加使用。胰酶的最终浓度可以根据使用者的要求进行调整，浓度范围可以从 0.05%（1:10 稀释）至 0.25%（1:1 稀释）。4.2 ZLI-9010 胰蛋白酶：取 0.05g 或 0.1g 胰蛋白酶加入到 100ml 0.05%或 0.1% pH7.8 的无水氯化钙水溶液中，溶解即可。5、胃酶（Pepsin）：4%胃蛋白酶，用 0.1mol/L HCL 配制。6、DAB：6.1 ZLI-9032/9033 DAB Kit：使用前只需将试剂盒提供

29、的 A、B、C 三种试剂各一滴加至 1ml 双蒸水中，即可获得 1ml DAB 工作液，简单易用。6.1 ZLI-9030 DAB：6mgDAB 溶于 10mlTBS（0.05M pH7.6），再加入 0.1ml 浓度为 3的 H2O2，过滤掉沉淀物，即可。7、AEC：4mg AEC 溶于 1ml 二甲基甲酰胺中，加入 14ml 浓度为 0.1M 的醋酸缓冲液（pH5.2），然后加入 0.15ml 3%H2O2，过滤掉沉淀物。8、RIPA：1PBS，1%NP 40，0.5 sodium deoxycholate，0.1% SDS（此液体可长期保存）。以下抑制剂以储存液方式保存，临用前加入 RI

30、PA 中。l/ml）8.1 10mg/ml PMSF 异丙醇溶液（用量为 10l/ml）8.2 Aprotinin（Sigma 产品，用量为 308.3 1000mM sodium orthovanadate 冷冻液l/ml）（用量为 109、Blotto A：常规使用 1PBS，5% milk，0.05% Tween 20。10、Blotto B：与 Phosphotyrosine 抗体共用，1PBS，1% milk，0.05% Tween 20。部分实验中 milk 可完全去除，但可能引起背景增高。Tris盐酸缓冲液（0.05M，25）50 毫升 0.1M 三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶液与 X 毫升 0.1N 盐酸混匀后，加水稀释至 100 毫升。pH X(毫升) pH X(毫升)7.107.207.307.407.507.607.707.807.908.0045.744.743.442.040.338.536.634.532.029.28.108.208.308.408.508.608.708.808.9026.222.919.917.214.712.410.38.57.0三羟甲基氨基甲烷（Tris）HOCH2 CH2OHCHOCH2 NH2分子量=121.14;0. 1M 溶液为 12.114 克/升。Tris 溶液可从空气中吸收二氧化碳，使用时注意将瓶盖严。