1、一、叶绿素提取方法（直接浸提法） （植物生理学实验技术，高俊凤主编，北京：高等教育出版社，2006）（1）取烤烟中部幼嫩叶片，去除叶脉后剪成 0.2cm 左右的细丝或小块混合均匀后，称取 0.100.20g，放入 50mL 离心管中；（2）在离心管中加入 0.5mL 纯丙酮和 1015mL80%的丙酮，并仔细将粘附在瓶壁边缘的叶片碎末洗到丙酮溶液中去，盖上瓶塞，室温下置暗处浸提过夜，其间摇动 34 次；（3）次日取出离心管，观察叶组织已全部变白时，表示叶绿素已浸提干净，然后用 80%丙酮定容至 25mL 刻度，过滤或离心（ 25，35min,12000rmin-1)后，进行比色测定。（4）比色
2、测定：将叶绿体色素提取液倒入光径 1cm 的比色杯 内，用分光光度计分别在波长 645nm、663nm 和 652nm 下测定吸光度，以 80%丙酮为空白对照。（5）按下列公式分别计算叶绿素 a、b 和叶绿素的总浓度（ mgL-1)Ca=12.72A663-2.59A645（叶绿素 a 的浓度）Cb=22.88A663-4.67A645（叶绿素 b 的浓度）CT=Ca+Cb=20.29A645+8.05A663由于叶绿素 a、b 在 652nm 处的吸收峰相交，二者具有相同的比吸收系数（均为 34.5） ，也可以在此波长下测定一次吸光度（A 652）而求出叶绿素含量： 5.341062ACT（
3、6）求得色素浓度后再按下式计算组织中各色素含量（用 mgg-1鲜重或干重表示) n10FWVC) gmT1- 叶 绿 体 色 素 含 量 （式中，C：叶绿体色素的浓度（mg L-1)；FW:鲜重（g） ；V T：提取液总体积（mL) ；n ：稀释倍数（在此处为 1） 。二 、丙酮乙醇混合液法（植物生理学实验技术，郝建军主编，辽宁科学技术出版社，2001 年再版）1、将丙酮、无水乙醇按 1:1 体积混合成浸提液2、称取 0.1g，剪成细丝置于盛混合液的试管中，加塞置于暗处，于室温（1030 ）条件下浸提，每个一定时间观察浸提情况，以材料完全变白为准。用混合浸提液作空白调零，测定 663nm、64
4、5nm 和652nm 处测光密度（一般隔夜测定） 。注意事项 (1) 为了避免叶绿素光解，操作时应在弱光下进行，研磨时间应尽量短些，以不超过两分钟为宜。 (2) 叶绿体色素提取液不能 浑浊。可在 710nm 或 750nm 下测量吸光度，其值应小于当波长为叶绿素 a 吸收峰时消光度值的 5%，否则应重新过滤。 (3)用分光光度计法测定叶绿素含量，对分光光度计的波长精确度要求较高。如果波长与原吸收峰波长相差 1nm,则叶绿素 a 的测定误差为 2%，叶绿素 b 为 19%，使用前必须对分光光度计的波长进行校正。校正方法除按仪器说明书外，还应以纯的叶绿素 a 和叶绿素来来校正。因为即使使用国产仪器中性能较好的 7200 型分光光度计，经校正后再 600700nm 波段中的读数误差还可能有2nm，这对测定叶绿素 a：b 值已有影响。 叶绿素含量测定记载表吸光度 色素浓度 mgL-1 色素含量 mgg-1处理 时间（h） 重复FW(g） VT（mL） A645 A652 A663 Ca Cb CT Ca Cb CT123CK 0平均值12324平均值12348平均值123CK+Cd96平均值123+P 0平均值12324平均值12348平均值123+P+Cd96平均值
