1、郑州大学现代远程教育现代色谱分析课程考核要求说明：本课程考核形式为撰写课程论文，完成后请保存为 WORD 2003 格式的文档，登陆学习平台提交，并检查和确认提交成功（能够下载，并且内容无误即为提交成功） 。一 论文撰写要求1.论文摘要部分应包括：目的、方法、结果和结论四个发明，大约 200 字左右，正文部分约 3000 字。2. 3-6 个关键词3.参考文献不少于 20 篇。二 参考题目1.手性固定相研究进展2.气相色谱法在有机农药残留物分析中的应用研究3.液相色谱在中药分析中的应用4.超临界流体色谱在中药有效成分提取中的应用研究5.薄层色谱在杂质检查中的应用6.反相液相色谱在药物质量控制中
2、的应用研究7.正相高效液相色谱的应用研究8.环糊精类固定相拆分手性药物的研究进展9.毛细管电泳法在生物大分子中的研究进展10.手性药物的毛细管电泳法拆分方法研究高效液相色谱在中药分析中的应用摘要: 目的:综述近几年高效液相色谱(HPLC)在中药分析研究中的应用。方法：查阅、分析、归纳相关文献。结果：液相色谱分析是色谱法中最古老的一种，其流动相为液体的色谱技术, 在经典的液相柱色谱基础上引入了气相色谱的踏板理论，形成了一种高分离度、高灵敏度、高分析速度和操作自动化的高效液相色谱法。结论：高效液相色谱为中药的分析研究提供了新手段和新思路，具有广阔的前景，引起了药物分析者的高度重视。关键词：液相色谱
3、；中药分析；应用液相色谱分析是指流动相为液体的色谱技术,是色谱法中最古老的一种,但通过改进填料的粒度及柱压,在经典的液相柱色谱的基础上引入了气相色谱的塔板理论,在技术上采用了高压输液泵,高效固定相和高灵敏度的检测器,实现了分析速度快、分离效率高和操作自动化,这种色谱技术被称为高效液相色谱法(HPLC)。它是七十年代发展起来的一项新技术,特别适合高沸点、大分子和热稳定性差的化合物的分离分析测试。中药的成分非常复杂,以往常用的薄层色谱等方法因其精密度、准确度、灵敏度、重现性差而不能满足现代中药的需要。高效液相色谱正是以其稳定、可靠、高效的特点成为中药研究的最重要的分析方法。经常被用作常规中药质量的
4、控制,天然药物的成分分析,以及监测新药合成过程等,为中药开发和评价提供了很好的条件和可靠的依据。目前高效液相色谱已经广泛应用于生物碱、皂苷、黄酮、蒽醌、香豆素等各种中药有效成分的测定。近年来对高效液相色谱监测中药的研究非常多,由于高效液相色谱集经典液相色谱和气相色谱的优势于一身,无论柱效、选择性还是分析程度都达到或超过了它们,近年来对高效液相色谱的不足之处进行了改进,使这项技术日臻完善。一、高效液相色谱发展近况高效液相色谱在药物分析中的应用,主要考虑试样的预处理和分析柱、检测器的选择。在试样的预处理上,日前兴起的固相(微)萃取使得许多含量低的成分得到精制提纯,从而适于高效液相色谱 1-3的测定
5、,而孙新国 4采用逆流萃取测定川芎嗪含量取得了很好的效果。中药中有些紫外吸收弱,或无特征紫外吸收的成分,直接用高效液相色谱测定,其灵敏度和分离度都不尽人意,利用柱前或柱后衍生化法 5-6可使这些成分较精确地测定出来。对于极性大、脂溶性差物质,在 YWGCl8 柱上不易保留,用十二烷基磺酸钠作为离子对试剂,降低其极性,延长柱上的保留时间,取得较好的分离较果 7。将液相色谱和质谱这两个强有力的分析技术在线连接在一起,经过三十年的发展已成为一项较为成熟的分析手段,但是它从形成伊始就存在着问题:从液相色谱流进质谱时,流动相的变化、溶剂的组成、高温高压离子化的问题制约着这种联用技术发展,大气压离子化接口
6、具有去除溶剂和离子化的双重功效,它的引入,使得该技术在各个领域得到了广泛的应用 8。电喷雾离子源是一种软电离技术,一般只生成(M+H)+和(M -H)-两种分子离子峰,选择性监测(m /z)190的负分子离子峰,具有较高的灵敏度、准确度、专一性,满足了低浓度药物研究的需求 9。由张莉等人研究的三维高效液相色谱法可以同步测定葛根素和阿魏酸两种指标 10。通过实验 11证明:如果选择合适的柱温等色谱条件,乙醇作为反相高效液相色谱流动相,分析中药及中成药中有效成分,既安全又准确。结构相似的物质,普通的检测器难以检测出来,高效液相色谱-电化学法可以有效地测定黄连粉中仅差一个基团的黄芩苷和黄芩素的含量
7、12。样品经色谱柱分离后收集,再经荧光分光光度计测荧光强度,影响因素多,测定复杂,改进后的高效液相色谱-荧光法则可以不经衍生化和收集分离物,只经化学处理除杂,浓缩后直接进样即可 13。用该法测定贯叶连翘中金丝桃素的含量也取得了较好的结果 13。高效液相色谱-示差折光测黄芪精口服液中黄芪甲苷的含量 14也都取得了较为满意的结果。对于只有紫外末端吸收,用紫外检测时灵敏度低,基线易漂移,示差折光检测其易受外界条件干扰,蒸发散射检测器能克服以上不足,响应值只与样品质量有关 15,其信号相应与质量成正比,不同化合物,质量相同则信号相应基本一致。蒸发光散射检测法是基于不挥发样品分子对光的散射程度与其质量成
8、正比,与其所含基团性质无关。只要选择适当的检测器参数,便可使流动相和溶剂完全气化,不产生信号,而样品中的各个组分以不挥发粒子存在,对光有散射,以被检测出来。因此,蒸发光散射检测器可用于含不同基团的多组分同时分离、分析。和紫外、荧光等方法相比,蒸发光散射检测法对不同物质有近似相同的响应因子,因而不出现低浓度、高响应或高浓度、低响应的现象,有利于不同比例混合物的准确测定。高效液相色谱-蒸发光散射检验法测定银杏叶中萜类内酯含量 16、红参及育精胶囊中人参皂苷 Rg1 和 Re 的含量 17和藤黄中藤黄酸含量 18都得到了很好的结果。二、高效液相色谱的研究动向1缩短分析时间,提高分离效率。应用先进的检
9、测仪器和方法,对流动相、固定相进行调节或改变,采用梯度洗脱、柱切换技术有望解决这个问题。梯度洗脱的高效液相色谱法,能分析较宽极性范围的样品,较等度洗脱具有很大的优势,但对于成分更复杂、极性范围更宽的中药样品则有些力不从心。多柱高效液相色谱法又称多维高效液相色谱法。除具有梯度洗脱一样的改变流动相浓度的优点外,还可以改变固定相种类、键合度、粒径、柱长、柱径等及流动相种类、浓度等。2进一步向自动化、智能化及联用技术上发展。液相色谱与质谱联用在国外已成为测定低浓度生物药品中药物及代谢物的首选方法, LC-MS-MS 法测定血浆中 HIV-1 蛋白酶,准确高效,血浆中残留的内源性组份和其他药物不干扰测定
10、,既节省材料又节约时间。已经应用于体液、血浆、血清中的药物分析 19-21。中药复方注射液“清开灵”中的胆酸类物的分析采用液相色谱/质谱/质谱联用,效果理想 22。高效液相色谱-核磁共振联用 23在药物分析方面的作用很不错。新近提出的智能多柱高效液相色谱系统利用切换技术的模块式分离性能,把样品分块的切换进不同性质的色谱柱,再用合适的流动相洗脱。全过程采用智能化控制。三、高效液相色谱在中药分析中的应用前景中药研究的大趋势是全成分分析,通过对从单味药到复方的不同配伍、煎煮时间等的研究,才能发现中药中化学成分的变化规律,找到中药机理之间的有机联系。中药成分繁多,且各种成分的性质遍布所有极性段、酸碱范
11、围。实现多成分分析的最简单途径即在一根足够长的色谱柱上,采用温和的流动相,在足够久的时间内洗脱。但这与现代分析要求的简便快速相违。通过大量的应用研究 24表明,高效毛细管电泳在分析中药成分,尤其在分析高极性化学成分方面有较大优势,在分析大量的复方制剂方面显示了较高的能力。由于毛细管几乎不会出现高效液相色谱分析中常出现的柱床污染现象,而且用过的毛细管柱只需很短的时间进行冲洗后,即可以进行第二个样品的分析,快速高效且分辨率很高。新兴的毛细管电色谱是集高效液相色谱和毛细管电泳优势于一身的一种新型电分离微柱液相色谱技术,它是将高效液相色谱的多种填料微粒移到毛细管中,以样品与固定相间的相互作用作为分离机
12、制,以电渗流为流动相驱动力的色谱过程。最近,一些先进的检测仪器成功的用在了高效液相色谱分析法上,使得高效液相色谱的应用更广泛,并充分利用高效快速、选择性好、灵敏度高等优点,建立更加系统的成分分析方法。通过与质谱联用、梯度洗脱、柱切换技术、配合先进的检测技术,以及与分子生物学、现代分子药理学相结合,必将在中药分析中发挥很大作用。参考文献:1李瑾翡,朱柄辉,方继辉,等. SPE-高效液相色谱法测定阳光胶囊中淫羊藿苷的含量J.中国新药与临床药理, 2001, 12(4):287.2谭 力,袁倚盛,张 昕,等.固相萃取 HPLC 测定人血浆中伊那普利浓度J.药学学报, 1997, 32(11): 85
13、7.3康 建,蒲菲菲,刘亚革,等.固相萃取反相高效液相色谱法测定人血浆麦考酚酸浓度J.沈阳药科大学学报, 2001, 36(5)331.4孙新国,王 涛,朱景申.逆流萃取-反相高效液相色谱法测定川芎中川芎嗪地含量J.同济医科大学学报, 2001, 30(3):209.5邸多隆,刘晔玮,曾经泽,等.柱前衍生化 HPLC 测定前列泰中水苏碱的含量J.西北药学杂志, 2001, 16(3): 99.6黄新华,陈本美,梁绍先,等.高效液相色谱柱后衍生法测定豚鼠鼻粘膜中组胺J.湖南医科大学学报, 2000, 25(3): 294.7刘 韬,王建华.离子对高效液相色谱法测定人体血浆中阿昔洛韦的浓度J.中国
14、药房, 1997, 15(3): 118.8陈桂良,陈执中.液相色谱-大气压离子化色谱联用技术及其在天然药和民族药研究中的应用J.中国民族民间医药杂志,2000, (1): 4.9刘 蕾,李可欣,李 扬.HPLC-MS 连用测定人血浆中单硝酸异梨酯的浓度J.中国药学杂志, 2001, 36(6): 408.10张 莉,黄 熙,任 平,等.三维 HPLC 法同步测定犬血浆中的葛根素及阿魏酸J.沈阳药科大学学报, 2001, 18(3): 195.11付春梅,李章万,刘三康,等.乙醇-水反相高效液相色谱法在中药及中成药分析中的应用J.药物分析杂志, 2000, 20(1):37.12何 心,石春伟
15、,冷 毅,等.高效液相色谱-电化学法测定双黄连粉针中黄芩甙和黄芩素的含量J.中国中药杂志, 1997,22(10): 604.13李 俊,钱玉五,林 芳.HPLC-荧光测定贯叶连翘中金丝桃素的含量J.中国药学杂志, 2001, 36(2): 114.14池玉梅,姜海英.HPLC-示差折光检测测定黄芪精口服液中黄芪甲甙的含量J.中国药学杂志, 200l, 36(1): 49.15刘宏伟,姚永生.HPLC-ELSD 测定荜薯蓣皂苷元的含量J.沈阳药科大学学报, 2001, 18(3): 195.16颜王贞,谢培山.HPLC-ELSD 法测定银杏叶中的 4 种萜类内酯含量J.药物分析杂志, 2001
16、, 21(3): 173.17秦少容,余佳文,岳廷哲,等.高效液相色谱-蒸发光散射检测其测定红参及育精胶囊中人参皂苷 Rgl 和 Re 的含量J.中国中药杂志, 200l, 26(8): 544.18杨 虹,丛晓东,蒋王林,等.高效液相色谱-蒸发光散射检测法对藤黄中藤黄酸及其衍生物的含量测定J.中国药科大学学报, 1999, 30(3): 202.19李雪庆,钟大放,宋 明,等.高效液相色谱-质谱联用法检测体液中三唑仑及其代谢产物J.沈阳药科大学学报, 2001, 18(2): 120.20杨汉煜,陈笑艳,徐海燕,等.高效液相色谱-串联质谱法测定人血浆中伪麻碱浓度J.沈阳药科大学学报, 200l, 8(2):116.21李 广,王清刚,吴尔诺,等.高效液相色谱串联质谱法测定血清中内美通J.分析化学, 2001, 29(7): 745.22刘国文,刘密新,吴筑平,等.中药复方“清开灵”注射液中胆酸类物的液相色谱/质谱/质谱分析J.分析杂志, 2001, 29(6):621.23杨 春,伊 康,贺文义.高效液相色谱-核磁共振仪联用技术在萘哌地尔杂质检测中的应用J.分析化学, 2001, 29(7):796.24郭洪祝,周洪雷,刘 斌,等.高效毛细管电泳在中药研究中的应用J.国外医药植物药分册, 1997, 12(6): 253.
