1、化学与制药工程学院 药物分析实验报告实验题目： HPLC 法测定去痛片中咖啡因含量 班 级： 应化 0704 学 号： 07220418 姓 名： 宋森 实验日期： 2010.12.13 实验题目：HPLC 法测定去痛片中咖啡因含量一、实验目的1.掌握固体样品的处理方法。2.掌握高效液相色谱仪的工作原理及操作。3.利用外标法计算待测组分含量。二、实验原理咖啡因 (Caffeine) 又称咖啡碱 ，是一种白色生物碱， 学名 “1， 2， 3- 三甲基黄嘌呤” ，其结构为 C18H10N4O2 H2O，通常得自咖啡和茶，在药品中主要作为温和兴奋剂及治疗特定的头痛病。分离原理：试样溶于流动相后，进入
2、色谱柱固定相中，有机溶剂分子会被吸附在非极性固定相表面的烷基集团上，而溶质分子在流动相中被溶剂化，并与吸附在固定相表面上弱极性溶剂分子进行置换，从而构成溶质在固定相和流动相中的分配平衡。当达到平衡时，服从下式：K = Cs/ Cm式中 K 是分配系数，Cs 和 Cm 溶质在固定相和流动相中的浓度。由于试样组分在固定相和流动相之间的作用存在差异，被测组分在两相中的分配系数 K 的不同而得到分离。在反相色谱中极性大的组分先流出，极性小的组分后流出。实验采用外标法，分别测定标准品溶液及供试品溶液，根据公式：AX/CX=AS/CS 其中 AX 为供试品的峰面积，C X 为供试品的浓度，A S 为标准品
3、的峰面积，C S 为标准品的浓度，带入相关数据，即可求得待测组分含量。三、仪器条件仪器型号：LC-2130 , 色谱柱：C 18 柱 ，检测波长：275nm , 流动相： 甲醇：水 = 60 : 40 ，流速： 1.0mL/min , 进样量：20L 。四、操作过程1.取去痛片 20 片，精密称定为 9.9430g ，研细，取上述细粉 0.8889g 置于50mL 容量瓶中，加甲醇 20mL，超声 5min，使咖啡因溶解，继续加甲醇至刻度，过滤，精密量取续滤液 2mL 置于 50mL 容量瓶中，定容至刻度。2.打开高效液相色谱仪，设置相关仪器参数，待基线平稳后，开始进样，记录峰面积。3.关闭仪
4、器，根据公式计算待测组分含量。五、实验数据记录及处理AX = 2305863 ， AS = 2283809 ，C S = 51.20g/mL 代入公式： 得：C X = 51.69g/mL ，计算标示量：六、实验讨论1.本实验所采用的色谱柱为 C18 色谱柱，属于反相色谱，在反相键合相色谱中，键合固定相的极性小于流动相的极性，适于分离非极性、极性、或离子性化合物，其应用范围比正相更广泛。2.实验过程中，在供试品与标准品之间取样时一定要用甲醇清洗微量进样器，以确保样品不被污染。3.本实验采用高效液相色谱法，具有分离速度快，灵敏度高，操作简便等优点。七、结论经测定，供试品含咖啡因为标示量的 103.26% ，符合 chp2000 相关规定。八、评语和成绩成绩： 指导教师： SX %26.103035.497218.0695%1%6=标 示 量平 均 片 重标 示 量 WDx
