1、 兔白细胞介素 6(IL-6)酶联免疫分析 试剂盒使用说明书 本试剂盒仅供研究使用。 检测范围： 96T 5ng/L - 160ng/L 使用目的： 本试剂盒用于测定兔血清、血浆及相关液体样本中白细胞介素 6(IL-6)含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中兔白细胞介素 6(IL-6)水平。用纯化的兔白细胞 介素 6(IL-6)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入白细胞介素 6(IL-6)，再与 HRP 标记的白细胞介素 6(IL-6)抗体结合，形成抗体 -抗原 -酶标抗体 复合物， 经过彻底洗涤后加底物 TMB显色。 TMB在 HRP酶的催化下转化成蓝色，并
2、在酸的作用下 转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的白细胞介素 6(IL-6)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（ OD值），通过标准曲线计算样品中兔白细胞介素 6(IL-6)浓度。 试剂盒组成 1 30倍浓缩洗涤液 20ml 1瓶 6ml 1瓶 12孔 8条 6ml 1瓶 6ml 1瓶 6ml 1/瓶 7 8 9 终止液 6ml 1瓶 0.5ml 1瓶 1.5ml 1瓶 1份 2 酶标试剂 标准品 （ 320ng/L） 标准品稀释液 3 酶标包被板 4 样品稀释液 5 显色剂 A液 6 显色剂 B液 10 说明书 11 封板膜 12 密封袋 2张 1个 标本要求 1标本采集后
3、尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能 马上进行试验，可将标本放于 -20 保存，但应避免反复冻融 2不能检测含 NaN3的样品，因 NaN3抑制辣根过氧化物酶的（ HRP）活性。 操作步骤 1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀 释 。 160ng/L 80ng/L 40ng/L 20ng/L 10ng/L 5号标准品 4号标准品 3号标准品 2号标准品 1号标准品 150l的原倍标准品加入 150l标准品稀释液 150l的 5号标准品加入 150l标准品稀释液 150l的 4号标准品加入 150l标准品稀释液 150l的
4、3号标准品加入 150l标准品稀释液 150l的 2号标准品加入 150l标准品稀释液 2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、 待 测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50l，待测样品孔中先加样品稀释液 40l， 然后再加待测样品 10l（样品最终稀释度为 5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽 量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3. 4. 5. 温育：用封板膜封板后置 37 温育 30分钟。 配液：将 30倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30倍稀释后备用 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30秒后弃去，如此 重复 5次，拍干。 6
5、. 7. 8. 9. 加酶：每孔加入酶标试剂 50l，空白孔除外。 温 育：操作同 3。 洗涤：操作同 5。 显色：每孔先加入显色剂 A50l，再加入显色剂 B50l，轻轻震荡混匀， 37 避光显色 15分钟 . 10.终止：每孔加终止液 50l，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 11.测定：以空白空调零， 450nm波长依序测量各孔的吸光度（ OD 值）。测定应在加终止 液后 15分钟以内进行。 操作程序总结： 计算 以标准物的浓度为横坐标， OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的 OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD值计算 出标 准曲线的直线回
6、归方程式，将样品的 OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数， 即为样品的实际浓度。 注意事项 1试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未 用完，板条应装入密封袋中保存。 2浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。 3各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好 控制在 5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 4请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标 本中待测物质含量过高（样本 OD值 大于标准品孔第一孔的 OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（ n倍）后再测定，计 算时请最后乘以总稀释倍数（ n5 ）。 5封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 6底物请避光保存。 7严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准 . 8所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 9本试剂不同批号组分不得混用。 10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。 保存条件及有效期 1试剂盒保存：； 2-8 。 2有效期： 6个月
