1、动物实验基本操作技术,河北大学基础医学实验教学中心,主要内容,实验动物的选择、抓取与固定实验动物的麻醉实验动物的手术实施实验动物的处死,一、实验动物的选择、抓取与固定,（一）实验动物的选择、抓取与固定1、实验动物的选择:实验动物的选择直接关系到实验的成败和其可 行性、科学性等。（1）常用的实验动物：犬、家兔、猫、大鼠、豚鼠、小鼠、鸡、 蛙、蟾蜍等。（2）动物的选择依据 种属选择：豚鼠易致敏，家兔体温变化灵敏。 品系选择：近交系、突变系、杂交一代、封闭群、非纯系； 无菌动物、指定菌动物 、SPF动物、带菌动物 个体选择： 根据年龄、性别、及健康状况,（1）小鼠,捉拿时先用右手将鼠尾抓住提起，放在
2、较粗糙的台面或鼠笼上，在其向前爬行时，右手向后拉尾，用左手拇指和食指抓住小鼠的两耳和头颈部皮肤，拉直四肢并用左手无名指压紧尾和后肢，右手即可作注射或其他实验操作。取尾血及尾静脉注射时，可将小鼠固定在金属或木制的固定器上。,2、实验动物的抓取与固定,（2）大 鼠,大鼠凶猛，实验者应戴帆布手套，用右手将大鼠尾抓住提起，放在较粗糙的台面或鼠笼上，抓住鼠尾向后轻拉，左手抓紧两耳和头颈部皮肤，余下三指紧捏鼠背部皮肤，如果大鼠后肢挣扎厉害，可将鼠尾放在小指和无名指之间夹住，将整个鼠固定在左手中，右手进行操作。也可借助专用布袋或鼠盒进行操作。,（3）豚鼠,豚鼠具有胆小易惊的特性，因此抓取时要求快、稳、准。一
3、般方法是：先用右手掌迅速、轻轻地扣住豚鼠背部，抓住其肩脚上方，以拇指和示指环握颈部，对于体型较大或怀孕的豚鼠，可用另一只手托住其臀部。,（4） 蛙 和 蟾蜍,用左手将动物贴紧在手掌中，并以左手中指、无名指、小指压住其左腹侧和后肢，拇指和食指分别压住左、右前肢，右手进行操作。根据实验需要，可用图钉，采取俯卧位或仰卧位固定在蛙板上。抓取蟾蜍时，禁忌挤压两侧耳部毒腺，以免毒液射入眼中。,（5）家兔,一手抓住兔颈部的被毛与皮肤，另一手托其臀部或腹部，使其躯干的重量大部分集中在手上，然后称重。家兔麻醉后固定方式分仰卧位和俯卧位，仰卧位固定时，四肢用粗棉线固定，头用家兔头固定夹固定或用棉线钩住家兔门齿后再
4、固定在家兔台头端铁柱上；进行头颅部手术时，多采用仰卧位固定配合马蹄形固定器进行固定。,二、实验动物的麻醉,1、不同的动物，选择不同的麻醉药物、实施不同的麻醉方法。2、麻醉药物应用原则： 依据动物体重计算麻醉药物的剂量； 依据动物生命体征的变化控制给药的速度； 掌握宁少勿多、分阶段给药的方式。,（一）麻醉剂种类,应用范围：适用于各种实验动物的全身麻醉作用机制：抑制中枢神经系统，使肌肉松弛作用特点：麻醉安全系数较大、麻醉深度易于掌握等优点。性 状：无色透明、极易挥发、具刺激 气味的特性缺 点：对上呼吸道粘膜有较强的刺激作用，使分泌物增加，易发生呼吸 道阻塞。其他药物：三氟乙烷、氯仿等，在教学实验中
5、应用较少。,1、非吸入性麻醉剂 戊巴比妥钠 氯胺酮 氨基甲酸乙酯（乌拉坦） 水合氯醛等。2、吸入性麻醉剂-乙醚（常用）,（二）麻醉剂用量,1、全身麻醉 （1）静脉注射麻醉： 戊巴比妥钠：3，1 ml/kg 乌拉坦： 25%, 4 ml/kg （2）腹腔注射： 戊巴比妥钠： 0.5% ，0.1ml/10g （3）吸入麻醉：乙醚 2、局部麻醉: 1普鲁卡因 颈部23ml，股部12ml,（三）麻醉给药途径,1、选择给药途径的原则- 可腹腔注射的药物不必通过静脉给药， 可肌肉注射的药物也应避免腹腔注射。 给药途径应按肌肉、腹腔、静脉的顺序。2、给药途径（1）肌肉注射-主要用于注射不溶于水的药物。 注射
6、部位：肌肉发达、血管丰富的部位，如大鼠、小鼠和豚鼠的大腿外侧缘；家兔、猫、犬、猴的臀部或股部。 注射时固定动物，剪去注射部被毛，与肌肉层组织接触面呈60度角刺入注射器针头，回抽无回血后注入药液（小动物可免回抽针栓）。注射完毕后用手轻轻按摩注射部位，促进药液吸收。,（2）腹腔注射-啮齿类动物 注射部位：是左下腹部。进入腹腔有落空感，回抽无血液或尿液时即表示未伤及肝脏和膀胱。 （3）静脉注射- 注射部位：根据动物的种类选择注射部位。犬多选用后肢小隐静脉，豚鼠和兔多选用耳缘静脉。大鼠和小鼠可从尾静脉注射。,兔耳缘静脉注射- 将动物同定于实验台上，剪去耳缘部位的被毛，用乙醇轻轻擦拭，耳缘静脉即清晰可见
7、。用左手食指和中指夹住静脉近心端，拇指和小指夹住耳缘部分，以左手无名指和小指放在耳下作垫，待静脉充盈后，有手持注射器使针头尽量由静脉远心端刺入，顺血管方向平行、向心端刺入。注射完毕抽出针头，用棉球压迫注射部位数分钟，以免出血。,尾静脉注射：,鼠尾静脉有3根，两侧及背侧各1根，左、右两侧尾静脉较易固定，应优先选择。注射时，先将鼠固定在鼠筒内或扣在烧杯中，露出尾部组织，用4550温水浸泡鼠尾l2 min或用75乙醇溶液反复擦拭，以达到消毒、扩张血管和软化表皮角质的目的。注意药液推入静脉时是否通畅，若阻力较大，注射部位皮下发白，表示针头未刺入静脉内，应换部位重新注射；若推入药液顺利无阻，则表明已刺入
8、静脉内，应把针头和鼠尾固定好，不要晃动，缓缓将药液推入，注射完毕，用棉球在注射部位轻轻揉压，使血液及药液不致回流而漏出。,（四）动物麻醉技巧与效果的判断,1、动物麻醉技巧 （1）静脉注射麻醉药物时，开始给药的速度可略为快些，即先给予总量的13，以求动物能顺利、快速地渡过兴奋期。给后23剂量的速度宜慢；边注射、边注意观察动物的生命体征变化（心跳、呼吸、肌肉松弛情况等）。当确定已达到麻醉效果时，即可停止给药，不必急于将剩余的麻醉药物全部推入。 （2）若麻醉剂量已给足，动物仍有挣扎、兴奋等表现时，应观察一段时间，确认动物是否已渡过兴奋期，切不可盲目追加麻醉药物。避免因麻醉过深，抑制心跳呼吸中枢而导致
9、动物死亡。,2、动物麻醉效果的判断（动物达到麻醉时的基本状态）：（1）肢体肌肉松弛；（2）呼吸平稳；（3）角膜反射迟钝。,（五）麻醉注意事项,1、乙醚是挥发性很强的液体，易燃易爆，使用时应远离火源。平时应装在棕色玻璃瓶中，储存于阴凉于燥处，不宜放在冰箱内，以免遇到电火花时引起爆炸。 2、动物麻醉后可使体温下降，要注意保温。在寒冷季节，注射前应将麻醉剂加热至与动物体温相一致的水平。 3、犬、猫或灵长类动物，手术前812 h应禁食，避免麻醉或手术过程中发生呕吐。家兔或啮齿类动物无呕吐反射，术前无需禁食。 4、静脉麻醉时，应注意给药速度，密切观察动物生命体征的变化，出现呼吸节律不整和心动过缓时，应立
10、即停止给药。,（六） 固定动物,当麻醉效应趋于平稳时，即可固定动物。固定动物的体位主要有仰卧位、俯卧位、侧卧位等。也可用特制的盒及相应的工具进行特殊的固定。但要注意的问题是，随着麻醉药物的失效，动物可能因挣扎、躁动等而发生失去控制的情况。,三、实验动物的手术实施,1、确立手术方案，明手术中需特别注 意的问题。2、按技术要求进行操作 3、手术过程中注意的问题： 熟悉解剖学结构，按组织层次的特征进行实验操作； 手术动作要轻巧、准确，尽量减少刺激和多余动作。,四、实验动物的处死,脊椎脱臼法：小鼠断 头 法：空气栓塞法: 兔2040 ml急性放血法：开放气胸法：药物致死法：KCl过量麻醉法：,谢谢！,
