1、实验八,海洋沉积物中磷分级提取生物可利用磷估算,一、目的要求,掌握海洋沉积物中磷分级提取方法掌握海洋沉积物中生物可利用磷估算,二、方法概述,TP = IP+OP,潜在的生物可利用颗粒磷，在一定条件能进入水体被生物利用,二、方法概述,分离、定量海洋沉积物中各种形态磷化学试剂提取法。基于给定提取剂对某一结合形式磷选择性的操作性定义方法要求：磷含量0.005%，精密度4%。,二、方法概述,用MgCl2、NaOH和HCl三步提取，估算沉积物中磷生物可利用性。第一步MgCl2提取：悬浮物中浮游植物细胞内磷；吸附于悬浮颗粒物中水合氧化物表面的磷。（NAIP）第二步NaOH提取：颗粒物中被Fe、Al水合氧化
2、物吸附磷；铁铝磷酸盐（Fe-P、Al-P）。（NAIP）第三步HCl提取：磷灰石磷（生物难利用）,三、实验内容,（平行3份，空白1份）称约40mg沉积物50mL具塞比色管40mL H2O5mL5% K2S2O8+0.83mL 6mol/L H2SO4盖塞保鲜袋包扎瓶口高压消化0.5h（105）冷却室温定容50mL加混合试剂5mL5cm比色皿880nm波长测定吸光值注意：比色前静置5分钟，比色时以防沉淀物上浮影响吸光值，可用吸管移取溶液,高压锅在406：注意熟悉使用高压锅,1.总磷测定,注意熟悉使用振荡器和离心机,振荡器：506离心机：507,三、实验内容,2、分级提取,平行3份空白1份,MgC
3、l2提取相：振荡2h离心（4500r/m）后上清液15mL定容50mL与工作曲线步骤同。 所有提取步骤的残渣处理：20ml蒸馏水分次洗涤三角瓶后离心管搅动离心弃上清夜下一步提取液分次转移原三角瓶,三、实验内容,2、分级提取, NaoH提取相：振荡8h离心后上清液15mL酚酞1d1mol/LHCl 几d pH7定容至50mL与工作曲线步骤同。HCl提取相：振荡1h离心后5mL10mol/LNaOH 约0.8mL调pH7定容50mL与工作曲线步骤同。,2、分级提取,三、实验内容,3. 钼蓝法测定磷, 磷标准使用溶液： 移取浓度为8.000mol/mL的贮备液1.00毫升，稀释成100毫升，使含磷为
4、0.0800mol/mL。有效期为一周。,三、实验内容, 混合试剂配制： 按序量取100mL 6 mol/l硫酸、40mL 3钼酸铵溶液、40mL 5.4抗坏血酸溶液和20mL0.136酒石酸氧锑钾溶液于烧杯中，每加一种溶液均要混匀，盛于试剂瓶中。 有效时间为6小时，临使用前适量配制。,三、实验内容,3. 钼蓝法测定磷, 磷标准工作曲线制作移取磷标准使用液0、0.50、1.00、1.50、2.00、2.50mL于50mL比色管中。用蒸馏水稀释到刻度，加入混合试剂5mL，混匀。10min后以蒸馏水为参比 ，测吸光值。（如溶液温度小于15时需放置20min）,3. 钼蓝法测定磷,三、实验内容, 2人一组 每组做一个站位（北部湾沉积物样品） 每个站位 总磷平行测定3份（空白1份） 磷分级提取平行测定3份（空白1份）,四、数据处理,1、实验要求,2、数据处理,四、数据处理, 计算样品总磷含量（mg/Kg） 计算样品各提取相磷的含量（mg/Kg） 估算样品中生物可利用磷的含量（mg/Kg） 要求写出计算过程和填写表1。,表1. 沉积物中不同形式磷的分析记录表,四、数据处理,
