1、肿瘤疾病近期疗效的判断方法,临床因子作为预后与预测因子,预后：T, N, M staging, PS score预测：吸烟状况：指导靶向治疗性别：指导靶向治疗种族：指导靶向治疗组织学：指导化疗和靶向治疗,影像学方法,非侵入地、直观地对患者的肿瘤大小变化情况进行评估。 缺点：存在一定的健康危害或健康隐患肿瘤大小常与肿瘤的恶性程度或浸润能力不完全一致费用昂贵 滞后性灵敏性低,病理学方法,手术或活检获得病灶组织/周围淋巴结组织，进行病理学染色和分析，是目前唯一明确肿瘤有否转移的金标准缺点：精确度不够高 是侵入性检查手段易造成扩散 人工误差大难以标准化,血清肿瘤标记物测定,血清肿瘤标志物的浓度往往可以
2、在一定程度上提示肿瘤的发展程度缺点：特异性不高 易受非特异蛋白的干扰 其他的病理生理状态影响导致假阳/阴性结果,1869年 Aust Med J，Ashworth最早在转移性癌症患者血液中观察到。2005年 N Engl J Med，Cristofanilli证实治疗前CTC数目是转移性乳腺癌患者无进展生存期和总生存期的独立预测因子。,循环肿瘤细胞指从实体瘤中脱离出来并进入外周血液循环的肿瘤细胞。,循环肿瘤细胞,CTC检测,预测PFS及OS 指示预后效果 复发转移预测与分期有助于肿瘤个体化治疗的药物筛选和治疗方案的确定是传统的影像学及其他生物标志物的补充检测手段有助于寻找新的肿瘤标识物以及开发
3、新的抗肿瘤药物,肿瘤细胞作为生物标志物,外周血和肺静脉血中的循环肿瘤细胞（CTCs）临床意义:转移的辅助标志物？可以预测治疗？预后因子？最小损伤的突变检测?,获取CTC需要解决的技术问题,从红细胞和白细胞中富集恶性肿瘤细胞将恶性肿瘤细胞与红细胞、白细胞、正常上皮细胞、造血干细胞等区分开来,每10mL血液中可能仅含有几个到几十个循环肿瘤细胞，而10mL血液中含有的白细胞约有1亿个，红细胞有500亿个。,三种技术,过滤法,ISET: Isolation by Size of Epithelial Tumor cells8m孔径过滤膜，漏检体积较小的肿瘤细胞敏感性低,梯度密度法,肿瘤细胞和单核细胞密
4、度小于1.077g/mlCTC纯度低，混入较多白细胞肿瘤细胞会迁移至血浆层，而聚集后容易下沉聚蔗糖-泛影葡胺(Ficoll-Hypaque)对细胞有毒性,免疫磁珠法,肿瘤细胞表面抗原CTC纯度低，混入较多白细胞不能有效排除细胞碎片假阳性和假阴性高,Cell Search-免疫磁珠+流式细胞分析+化学发光,CellSearch 是全球第一也是唯一经FDA批准可用于临床的循环肿瘤细胞（CTC）产品,1983 磁流体,J Clin Oncol. 2011 Apr 20;29(12):1556-63. Epub 2011 Mar 21.Evaluation and prognostic signifi
5、cance of circulating tumor cells in patients with non-small-cell lung cancer.,背景,实验流程,患者入组标准,未做过化疗，且4周内未做过放疗病理学确诊为非小细胞肺癌IIIA, IIIB, IV期准备进行标准的细胞毒疗法5年内未患过恶性肿瘤,实验方法,CellSave 专用收集管采集血液采集血后于室温储存并于96小时内进行检测Cellsearch 系统进行检测,患者化疗前CTC数量（基线CTC）与临床特征的关系,IV期患者CTC数量明显多于IIIB期患者， IIIB期患者的CTC数量又明显多于IIIA期患者。,肝转移及骨
6、转移患者中CTC数量明显多于其它转移患者。,患者化疗前CTC数量与肿瘤转移地点的关系,所有非小细胞肺癌病人,所有期非小细胞肺癌病人,基线CTC数量与无进展生存期和总生存期的关系,基线CTC数量少于5的患者无进展生存期和总生存期明显高于基线CTC数量大于等于5的患者。,化疗前后CTC数量与患者无进展生存期和总生存期的关系,化疗后CTC数量少于5的患者无进展生存期和总生存期明显高于CTC数量大于5的患者。化疗前后CTC数量都少于5 的患者无进展生存期和总生存期明显高于只有一次测出CTC数量少于5的患者。,化疗前后CTC的数量变化反映临床疗效,化疗前,化疗后,化疗后CTC数量减少患者的临床疗效好于C
7、TC数量增加的患者,结 论,CTC能在IV期非小细胞肺癌患者中检出,CTC数量的变化反映了临床疗效,CTC数量与OS 和PFS相关，是非小细胞肺癌的一个新的预后判断因子,CTC在判断是否存在转移中有重要参考价值,对于原发性肺癌患者，CTC计数在有远处转移的肺癌患者中有显著升高，相关性优于CEA。,CTC升高对于判断远处转移的敏感性达71%，特异性达83%,CTC计数和血清CEA水平在不同切点的诊断价值,治疗前和治疗后CTC的数量变化反映疗效,大多数患者的CTC数量在第一个化疗疗程后（22天）下降，提示疗效好。,The Annals of Thoracic Surgery Volume 87,I
8、ssue 6,June 2009, Pages 1669-1675 Circulating Tumor Cells in Pulmonary Venous Blood of Primary Lung Cancer Patients,鳞癌中periCTC和pvCTC的数量明显高于腺癌,N Engl J Med 2008;359:366-77.Detection of Mutations in EGFR in Circulating Lung-Cancer Cells,背景,CTC中EGFR突变与肿瘤组织中EGFR突变的一致性（SARMS方法）,CTC中EGFR基因型有17个与肿瘤组织中的一样，准
9、确率为94%，,CTC数量与病情进展的关系,吉非替尼治疗后CTC数量下降，伴随着疾病进展CTC数量也随之上升。肿瘤大的患者CTC数量比肿瘤小的患者多。,CTC数量,影像学肿瘤变化,检测CTC中EGFR的基因型与组织中检测结果高度符合,可以通过CTC来检测非小细胞肺癌患者肿瘤的基因型,CTC数量与疾病进展密切相关,结 论,小细胞肺癌患者活检组织及相对应的CTC中的CD56,活检组织中的CD56和CTC中的CD56表达具有一致性,肺癌组织,肺癌肝转移组织,Baseline blood CAC,肿瘤细胞,a, monosomy 6p11-q12;b, amplification EGFR, c-MY
10、C; EGFR (red) 5.p15.3 (green),6p11-q12 (aqua), c-MYC (yellow).c, trisomy CEP3 and monosomy CEP17; d, polysomy CEP3, CEP7,CEP17 and 9p21.3. CEP3 (red),CEP7 (green), CEP17 (aqua),9p21.3 (yellow).,外周循环肿瘤细胞的异常情况与手术切除的肿瘤细胞具有高度一致性。,Baseline blood CTC,肿瘤细胞,CTC中的染色体异常分子标记物与疾病的复发和生存密切相关,CTC的应用：从细胞计数到分子特性,FISH分析CTC生物学特性,白细胞有两份CEP7（绿色），EGFR（红色）和MET (蓝色) CTC中， EGFR （红色）和MET (蓝色)基因扩增,微列阵,实时定量RT-PCR,对CTC进行基因表达分析,BIOTECAN宝藤J&J强生,国内首个CELLSEARCH商业实验室CH商业实验室,
