1、一、药物的纯度与杂质二、杂质的限量检查与计算三、一般杂质检查法四、特殊杂质检查法,第一节 药物的纯度与杂质 1.药物的纯度：是指药物的纯净程度。 药物中的杂质是影响药物纯度的主要因素。 2.杂质：无治疗作用、对人体有害，或影响药物的疗效和稳定性。3.杂质的检查收载在药品质量标准的检查项下 。,4.药物的纯度与化学试剂的纯度,药物的纯度考虑杂质的生理作用，药物必须进行临床试验。药品只有两个等级：合格或不合格。化学试剂有很多等级，如基准试剂、色谱纯、优级纯（GR）、分析纯（AR）、化学纯（CP）。,5.杂质的来源,一是由生产过程中引入： 药物在生产合成过程中 生产中所用溶剂与试剂的残留以及与生产器
2、皿接触等而带入杂质 药物在制成制剂的过程中二是在贮存过程中产生：外界条件变化：温度、湿度、空气、光线等可使药物发生水解、氧化、分解、异构化、晶型转变、聚合、潮解和发霉等而产生有关的杂质。,6. 杂质的分类,1、按杂质的来源分类 一般杂质特殊杂质2、按杂质的性质分类 信号杂质有毒有害杂质,第2节 杂质的限量检查与计算,一、杂质的限量定义 ：药物中所含杂质的最大允许量表示：通常用百分之几（%）或百万分之几（ppm）来表示。,杂质量 杂质限量杂质量,药品合格,药品不合格,二、杂质的限量检查法与计算,杂质的限量检查 ：不要求测定其含量，而只检查杂质的量是否超过限量 1.对照法：不需测定杂质的准确含量2
3、.灵敏度法3.比较法,供试品,供试溶液,标准溶液,对照溶液,对照法,原理:,杂质限量的计算,注意事项,须遵循平行操作原则，注意所用仪器、器皿的对称性，供试溶液和对照溶液应在完全相同的条件下反应，如加入的试剂、反应的温度、放置的时间等均应相同。只有这样，反应的结果才有可比性。,灵敏度法,是在指供试品溶液中加入试剂，在一定反应条件下，观察有无正反应出现，以不出现正反应为符合规定，即以该检测条件下反应的灵敏度来控制杂质限量。特点：以该检测条件下的灵敏度来控制杂质限量，不需对照物质。,比较法,是指取一定量的供试品依法检查，测得待检杂质的吸收度、旋光度、pH值等与规定的限量比较，不得更大。特点：准确测得
4、杂质的响应值（吸收度、旋光度、pH值等）并与规定限量比较，不需对照物质 。,第三节 一般杂质检查法,一般杂质：在自然界中分布广泛，在多种药物的生产和贮藏过程中容易引入的杂质，包括氯化物、硫酸盐、硫化物、氰化物、铁盐、重金属、砷盐、铵盐、干燥失重、水分、炽灼残渣、易炭化物、酸、碱、溶液颜色、溶液澄清度以及残留溶剂等。,操作 注意：,应遵行平行操作原则，包括仪器的配对性、对照管与供试管同步操作；正确的比色、比浊方法；检查结果不符合规定或在限度边缘时应对供试管和对照管各复查二份。,一、氯化物检查法,（一）原理,（二）操作方法,1.供试溶液制备 取各品种项下规定量的供试品，加水溶解使成25ml(溶液如
5、显碱性，可滴加硝酸显中性)，再加稀硝酸10ml；溶液如不澄清，应滤过；置50ml纳氏比色管中，加水使成40m1，摇匀，即得供试溶液。,2.对照溶液制备,取该品种项下规定量的标准氯化钠溶液，置另一50ml纳氏比色管中，加稀硝酸10ml，加水使成40m1，摇匀，即得对照溶液。标准氯化钠溶液的制备：（每1ml相当于10ug的CI）,3.比浊与结果判断,于供试溶液与对照溶液中，分别加入硝酸银试液1.0m1，用水稀释使成50ml，摇匀，在暗处放置5分钟，同置黑色背景上，从比色管上方向下观察，比较所产生的浑浊。供试管所产生的浑浊不得比对照管深。,（三）注意事项,1. 50ml溶液中含5080g的Cl所显浑
6、浊梯度明显，相当于标准NaCl溶液58ml。2.在硝酸的酸性条件下检查3.比浊前在暗处放置5分钟，是为了避免光线直接照射使单质银析出 。4.将比色管置黑色背景上，从上向下观察浊度,5.比色管：应配对、管内径、刻度一致，不得用毛刷刷洗。6.供试液与对照液同时操作，加入试剂顺序一致。7.如供试品带颜色：采用内消色法处理,二、硫酸盐检查法,1.原理,（二）测定条件,1. 标准K2SO4溶液0.1mg/ml，50ml溶液中0.10.5mg所显浑浊梯度明显，相当于标准K2SO4溶液15ml。2.反应需在盐酸酸性条件下进行，且以50ml供试溶液中含稀盐酸2ml为宜。,3. 试剂：氯化钡 4.25%氯化钡溶
7、液相对稳定，不必临用前新鲜配制，存放时间过久，如有沉淀析出，即不能使用，应予重配，加入25%氯化钡溶液后，应充分摇匀，以免影响浊度； 5. 比浊方法：同置于黑色背景上，自上向下观察。,三、铁盐检查法,1.原理,（一）硫氰酸盐法,2. 测定条件,（1）标准铁溶液10g Fe3+/ml，用 FeNH4(SO4)212H2O（硫酸铁铵）配制 50ml溶液中含1050g的Fe3+显色梯度明显，一般取标准铁溶液1.05.0ml,（2）反应需在盐酸酸性条件下进行，且以50ml供试溶液中含稀盐酸4ml为宜。,（3）试剂：硫氰酸铵。加过量硫氰酸铵，使反应向正反应方向进行,（4）检查Fe2+和Fe3+,（4）铁
8、盐检查时，加过硫酸铵可氧化Fe2+为Fe3+，同时可防止光线使硫氰酸铁还原或分解褪色。 （5）比色方法：同置于白色背景上，自上向下观察。,3. 干扰及排除,为了提高灵敏度或供试管与对照管色调不一致时，可用正丁醇提取后，分取正丁醇层比色。,四、重金属检查法 以铅为代表,中国药典（2005年版）共收载四法。第一法：硫代乙酰胺法第二法：炽灼残渣法第三法：硫化钠法第四法：微孔滤膜法,第一法 硫代乙酰胺法,1. 原理,适用于供试品不经有机破坏，能溶于水、稀酸和乙醇的药物,2. 测定条件,（1）标准铅溶液： 硝酸铅 、10gPb2+/ml，适宜比色范围为27ml溶液中含1020g的Pb2+。（2）本法用2
9、ml pH3.5的醋酸盐缓冲液控制溶液pH值为33.5。（3）显色剂：硫代乙酰胺,（1）供试品如有色，需经处理后方可检查。,A. 外消色法：在对照管中加稀焦糖溶液或其他无干扰的有色溶液。,B. 内消色法,C. 改用第四法，微孔滤膜过滤法,3. 干扰及排除,（2）若供试品中有微量Fe3+存在，会氧化硫化氢生成单质硫，干扰比色，加入抗坏血酸或盐酸羟胺（0.51.0g）还原Fe3+为Fe2+，可消除干扰,第二法 炽灼残渣法,适用于含芳环、杂环以及不溶于水、稀酸、乙醇及碱的有机药物。,500600炽灼后的残渣，经处理后，依第一法检查。,1. 原理,2. 操作方法,第三法 硫化钠法,适用于溶于碱而不溶于
10、稀酸或在稀酸中生成沉淀的药物。如磺胺类、巴比妥类。,1. 原理,2. 测定条件,（1）NaOH碱性条件下,（2）显色剂：硫化钠,第四法 微孔滤膜法,适用于含25g重金属杂质及有色供试液的检查。 依一法检查，结果微孔滤膜过滤后比较色斑。,一般杂质检查法的区别,五、砷盐检查法,（一）古蔡氏法 （二）二乙基二硫代氨基甲酸银法（Ag-DDC法）,砷化氢遇HgBr2试纸生成黄色棕色的砷斑，与2ml标准砷溶液在相同条件下生成的砷斑比较,1. 原理,（一）古蔡氏法,2. 操作方法,（1）标准砷斑用2ml标准砷溶液制备,（2）供试品需经有机破坏，则标准砷溶液应平行操作,3. 测定条件,（1）标准砷溶液临用新配
11、，1gAs/ml。,（2）酸为反应物，酸量应足够，所以加浓盐酸5ml。,B. 碘化钾被氧化生成的I2又可被氯化亚锡还原为I-，I-与反应中生成的Zn2+能形成稳定的配位离子，有利于生成砷化氢的反应不断进行；,C. 氯化亚锡与锌作用，在锌表面形成锌锡齐，使氢气均匀而连续地发生；,（3）酸性氯化亚锡及碘化钾的作用是：还原As5+为As3+，加快反应速度；,D. 可抑制微量Sb的干扰，在实验条件下，100 gSb存在不干扰。,（4）醋酸铅棉花的作用是消除锌粒及供试品中少量硫化物的干扰，醋酸铅棉花60mg装管高度6080mm。,（5）锌粒应无砷,（6）砷斑不稳定，应立即观察,（二）Ag-DDC法 原理
12、,直接比色或于510nm波长处测定吸收度，进行比较。,六、溶液颜色检查法,控制药物中有色杂质限量,第一法 目视比色法 即与标准比色液比较的方法，全波长范围定性观察,观察方法,标准比色液的配制,第二法 分光光度法 单一波长定量,第三法 色差计法 全波长范围定量,本法是通过色差计直接测定溶液的透视三刺激值，对其颜色进行定量表述和分析的方法。,测色仪器一般为光电积分型色差计,七、澄清度检查法,检查药物中的微量不溶性杂质，用作注射剂的原料药一般应作此项检查。,1. 检查方法 对照法,2. 反应原理：乌洛托品在偏酸性条件下水解产生甲醛，甲醛与肼缩合生成甲醛腙，不溶于水，形成白色浑浊。,1.00硫酸肼溶液
13、与10乌洛托品溶液等量混合配制浊度标准贮备液 浊度标准原液 浊度标准液（5个级号）,3. 判断 药典中规定的“澄清”，系指供试品溶液的澄清度相同于所用溶剂，或未超过0.5号浊度标准液。,4. 溶剂：水、酸、碱、有机溶剂 有机酸的碱金属盐类药物强调用“新沸过的冷水”,定义：炽灼残渣是指将药品（多为有机化合物）经加热灼烧炭化后，再加硫酸并炽灼(700800)至恒重后遗留的金属氧化物或其硫酸盐。,八、炽灼残渣检查法,1. 原理 样品炭化后+ H2SO4湿润700800炽灼至恒重炽灼残渣（硫酸灰分）,2. 操作方法,3. 注意事项,（1）供试品的取样量应根据炽灼残渣限量和称量误差决定。 （2）含氟的药
14、物对瓷坩埚有腐蚀，应采用铂坩埚。,（3）若残渣需留作重金属检查，则500600炽灼至恒重。（4）加硫酸处理是使杂质转化为稳定的硫酸盐，并帮助有机物炭化,九、易炭化物检查法,检查药物中遇H2SO4易炭化或易被氧化呈色的微量有机杂质。,方法：H2SO4炭化后与对照液比较。对照液：（1）“溶液颜色检查”项下的标准比色液；（2）由比色用氯化钴液，比色用重铬酸钾液，比色用硫酸铜液按规定方法配成的对照液；比色：同置白色背景前，平视观察比较。,十、干燥失重测定法,定义： 干燥失重是指药物在规定条件下经干燥后所减失的重量，主要是水分，也包括其它挥发性物质。,测定方法（一）常压恒温干燥法,适用于受热较稳定的药物
15、。干燥温度一般为105。,第二次及以后各次称重均应在规定条件下继续干燥1h后进行。,（二）恒温减压干燥法,适用于熔点低，受热不稳定或水分不易除的药物。,除另有规定外，压力应在2.67kPa（20mmHg）以下。,（三）干燥器干燥法,适用于受热易分解或挥发的供试品。,常用干燥剂：无水氯化钙、硅胶、P2O5,十一、水分测定法,费休氏法甲苯法（适用于挥发性药物的测定）主要采用费休氏法测定药品中的水分。,费休氏法原理：,利用碘在吡啶和甲醇溶液中将二氧化硫氧化成三氧化硫时，需要定量的水参加反应的原理来测定样品中的水分含量，为非水溶液中的氧化还原滴定反应，采用的标准滴定液称费休氏试液，是由碘、二氧化硫、吡
16、啶和甲醇按一定比例组成。,1.指示滴定终点方法：自身作指示剂法，即利用碘的颜色指示终点，终点前溶液呈浅黄色，终点时溶液为红棕色（微过量的费休氏试剂中碘的颜色）永停滴定法：按永停滴定法操作，当滴定至电流计指针突然偏转，并持续数分钟不退回时，即为商定终点。,2、操作方法,费休氏试液的标定 采用水分侧定仪直接标定。或取干燥的具塞玻瓶，精密称入重蒸馏水约30mg，除另有规定外加无水甲醇25ml，在避免空气中水分侵入的条件下，用费休氏试液滴定至溶液由浅黄色变为红棕色，或用永停滴定法指示终点；另作空白试验。,供试品的测定：精密称取供试品适量(约消耗费休氏试液15ml)，除另有规定外，溶剂为无水甲醇，用水分
17、测定仪直接测定，或将供试品置干燥的具塞玻瓶中，加溶剂25ml，在不断振摇(或搅拌)下用费休氏试液滴定至溶液由浅黄色变为红棕色，或用永停滴定法指示终点；另作空白试验。,所用仪器应干燥，并能避免空气中水分的侵入；测定操作宜在干燥处进行。试剂的含水量应控制在0.1%以下,十二、残留溶剂测定法,残留溶剂：指在原料药或辅料的生产中，以及在制剂制备过程中使用的，但在工艺过程中未能完全去除的有机溶剂。,第一类溶剂：毒性较大，可致癌并对环境有害，应尽量避免使用(如苯、四氯化碳等) 第二类溶剂：对人有一定毒性，应限量使用(如乙腈、三氯甲烷等) 第三类溶剂：对人的健康危害较小，可推荐使用(如醋酸),检查方法 中国
18、药典采用气相色谱法检查残留有机溶剂,第一法 毛细管柱顶空进样等温法 当需要检查有机溶剂的数量不多，且极性差异较小时，可采用此法。第二法 毛细管柱顶空进样系统程序升温法 当需要检查有机溶剂的数量较多，且极性差异较大时，可采用此法。第三法 溶液直接进样法 主要适用于企业对生产工艺中特定的残留溶剂的控制，可采用填充柱，亦可采用适宜极性的毛细管柱。,第四节 特殊杂质检查法,特殊杂质： 是指在该药物的生产和贮藏过程中可能引入的中间体、副产物以及分解产物等特有杂质。,一、利用药物和杂质在物理性质上存在的差异进行杂质检查,1.臭味2.挥发性3.颜色4.溶解行为5.旋光性和吸光性等,二、利用药物和杂质在化学性质上的差异进行杂质检查,1.呈色反应2.沉淀反应3.生成气体4.氧化还原性的差异5.酸碱性的差异,三、利用药物和杂质在色谱行为上的差异进行杂质检查,1.薄层色谱法2.高效液相色谱法3.气相色谱法等,
