1、方剂学实验范例,长春中医学院,方剂学实验范例 长春中医学院,序言,方剂实验课，可提高学生的现代化意识、创新意识，并可培养其科研能力与动手能力，是适应时代发展而培养现代型中医人才的需要。为了配合方剂实验课，使学生初步了解实验过程，我们拍摄了部分方剂实验观察的视听教材，以供使用。,方剂学实验范例 长春中医学院,麻黄汤与桂枝汤发汗作用的比较,实验目的 麻黄汤、桂枝汤均为发汗解表剂，麻黄汤主要用于外感风寒引起的太阳表实证，桂枝汤主要用于外感风寒引起的太阳表虚证。两者皆能发汗，但有强弱之分，通过麻黄汤、桂枝汤在发汗作用方面的比较，认识麻黄汤为发汗之峻剂，从而在临床上能更好地选择应用二方。,方剂学实验范例
2、 长春中医学院,麻黄汤与桂枝汤发汗作用的比较,实验器材 药物：麻黄汤：麻黄50g、桂枝30g、杏仁30g、炙甘草30g；桂枝汤：桂枝50g、芍药50g、生姜45g、炙甘草30g、大枣70g；制剂制备：洗净药材，煎煮三次，合并煎液，然后滤纸过滤。制剂浓缩为50的煎液，pH值为67；生理盐水适量；动物：小白鼠；实验用品：注射器(1ml)、针头(5号)、台式天平、鼠笼。,方剂学实验范例 长春中医学院,麻黄汤与桂枝汤发汗作用的比较,实验方法 取小白鼠30只，随机分为麻黄汤组、桂枝汤组、生理盐水组，每组10只。分别给小白鼠腹腔注射025ml10g的药液或生理盐水。 给药后20分钟，观察三组小白鼠出汗情况
3、。,方剂学实验范例 长春中医学院,麻黄汤与桂枝汤发汗作用的比较,实验结果,方剂学实验范例 长春中医学院,小青龙汤平喘作用的观察,实验目的 小青龙汤为辛温解表之剂，又为平喘之良方，本实验主要观察该方的平喘作用。用组织胺喷雾致敏，引起豚鼠哮喘，观察小青龙汤的平喘作用。,方剂学实验范例 长春中医学院,小青龙汤平喘作用的观察,实验器材 200g左右的豚鼠若干只、喷雾玻璃钟罩(直径约20-25cm，高20cm)、喷雾器(也可用空气压缩机代用、但要加测压器以检测进气的压力)、秒表，04磷酸组织胺溶液(即40mg磷酸组织胺加水10ml)、注射器(10ml、5ml)、生理盐水、玻璃喷雾头一只；小青龙汤制剂：每
4、ml含1g生药：麻黄10g、芍药10g、五味子10g、半夏10g、干姜10g、炙甘草10g、细辛10g、桂枝10g；先加水600ml煎至120ml左右，去渣，加70酒精100ml，沉淀24小时，次日把沉淀后药汁经抽滤瓶抽滤后放在60恒温水浴锅中蒸发浓缩至80ml。,方剂学实验范例 长春中医学院,小青龙汤平喘作用的观察,实验方法 实验前l天，先作初步筛选，将豚鼠逐一放在玻璃钟罩内，在恒温下喷入04磷酸组织胺液，持续喷60秒，然后密切观察豚鼠反应，若在25分钟内抽搐跌倒，表明该豚鼠对磷酸组织胺敏感，可以选用；反之。若超过25分钟不跌倒则为不敏感，不予选用；每次实验都用豚鼠2只，分别涂上不同颜色作标
5、记，然后分别腹腔注射小青龙汤15ml和生理盐水15ml，半小时后放入钟罩内并喷入组织胺1分钟，观察二组豚鼠引喘反应。,方剂学实验范例 长春中医学院,小青龙汤平喘作用的观察,实验结果,方剂学实验范例 长春中医学院,大承气汤对小白鼠胃肠蠕动作用的观察,实验目的 大承气汤是峻下热结的主方，适用于以“痞、满、燥、实”等症状为主的阳明腑实证。本实验通过测定10炭末的大承气汤在胃肠道内的移动速度，观察此方对胃肠道蠕动功能的影响。,方剂学实验范例 长春中医学院,大承气汤对小白鼠胃肠蠕动作用的观察,实验器材 药物：大承气汤：大黄30g、芒硝l0g、枳实20g、厚朴20g；制剂制备：将大承气汤水煎液配制成10炭
6、末的大承气汤药液，10炭末生理盐水混悬液适量；动物：小白鼠；实验用品：灌胃器、尺子、解剖器械、天平。,方剂学实验范例 长春中医学院,大承气汤对小白鼠胃肠蠕动作用的观察,实验方法 取空腹24小时的小白鼠10只(1822g)分为二组，称重、编号；灌胃：大承气汤药液和生理盐水混悬液用量均为02ml10g，每灌1只，记录下时间；20分钟后，处死小白鼠，打开腹腔，取出肠管，分离肠系膜，将肠管拉成直线，以幽门为起点，量出炭末移动距离和小肠的总长度；计算每只小白鼠炭末在肠内移动的距离占小肠全长的百分率为： 碳末移动的距离 100% 小肠的总长度,方剂学实验范例 长春中医学院,大承气汤对小白鼠胃肠蠕动作用的观
7、察,实验结果,方剂学实验范例 长春中医学院,大承气汤对小白鼠胃肠蠕动作用的观察,实验结果,方剂学实验范例 长春中医学院,十枣汤对家兔肠管蠕动的影响,实验目的 十枣汤具有攻逐水饮的作用，通过观察十枣汤对肠管蠕动的影响，以探讨其泻下攻逐的作用。,方剂学实验范例 长春中医学院,十枣汤对家兔肠管蠕动的影响,实验器材 动物：家兔1只；药物：芫花、甘遂、大戟、大枣制成100浓度十枣汤煎液；实验用品：麦氏浴槽、恒温水浴箱、二导生理记录仪、万能杠杆、温度计、滴管、烧杯、台氏液。,方剂学实验范例 长春中医学院,十枣汤对家兔肠管蠕动的影响,实验方法 先装好一套麦氏浴槽，浴槽内盛38台氏液，将充满空气的球胎经由橡皮
8、管连至麦氏浴槽乙型通气管上，调节橡皮管上的螺丝皮管夹，使气泡一个一个地不断地通至浴槽，以供氧气；用木锤猛击兔头部，使其昏迷后，剖开腹腔，在靠十二指肠附近，取出一段3-4cm长的小肠，迅速将该段小肠一端的一结扎线结于乙型通气管弯头上，小肠另一端的结扎线系于杠杆上；,方剂学实验范例 长春中医学院,十枣汤对家兔肠管蠕动的影响,实验方法 将浴槽放在盛水的恒温水浴箱内，使台氏液温度保持在38-40之间；记录肠段在38-40台氏液中的运动曲线；待台氏液稳定，描记一段肠段正常运动曲线后滴加100十枣煎液l0ml于浴槽中，观察肠活动的改变并做好标记。,方剂学实验范例 长春中医学院,十枣汤对家兔肠管蠕动的影响,
9、实验结果 实验完毕后，将结果剪贴在实验报告纸上并分析之。,方剂学实验范例 长春中医学院,银翘散、白虎汤、大承气汤的退热作用观察,实验目的 发热是外感热病过程中十分重要的症状和体征，通过运用银翘散、白虎汤、大承气汤对发热动物模型的解热实验，分析比较各种方剂的不同解热作用，增强对银翘散、白虎汤、大承气汤的感性认识和实验操作能力，从而加深对“汗”、“清”、“下”三法的理解，了解其对临床和科研的指导意义。,方剂学实验范例 长春中医学院,银翘散、白虎汤、大承气汤的退热作用观察,实验器材 药物：银翘散：银花，连翘，桔梗，薄荷，竹叶，生甘草，荆芥，淡豆豉，牛蒡子，芦根。白虎汤：石膏，知母，甘草，粳米。大承气
10、汤：大黄，芒硝，枳实，厚朴。伤寒或副伤寒菌苗及生理盐水。动物：家兔(每只要求15kg以上)。实验用品：肛表，婴儿秤，兔固定架，注射器(1ml、20ml)，酒精棉球，胃管，灌胃开口器，量杯，石蜡油。,方剂学实验范例 长春中医学院,银翘散、白虎汤、大承气汤的退热作用观察,实验方法 给家兔逐一测体温。每次取家兔1只，待安静后将兔臀部抬高，右手拿肛表，将水银柱甩到35C以下，末端涂石蜡油少许，插入兔肛门，深度5cm，3分钟后取出读取体温度数；,方剂学实验范例 长春中医学院,银翘散、白虎汤、大承气汤的退热作用观察,实验方法 用上法选取肛温在383-396的家兔4只，编号，称体重，观察其正常表现，分别给家
11、兔静脉注射伤寒副伤寒菌苗lmlkg，使之发热，待肛温升高超过1后(约需经05-1小时)再分别灌胃给药，甲兔用100银翘散煎液20mlkg，乙兔用100白虎汤煎液20mlkg，丙兔用100大承气汤20mlkg，丁兔用等量生理盐水。给药后30、60、120分钟各测肛温一次，比较各兔给药前后肛温的变化。,方剂学实验范例 长春中医学院,银翘散、白虎汤、大承气汤的退热作用观察,注意事项测温时操作尽量柔和，勿使家兔挣扎，以免引起体温波动同一兔用同一肛表，测肛温时将肛温表水银柱甩在35以下测量条件要一致家兔择健康、体重在15kg以上，体温在383396为宜3小时后，凡肛温上升08以上的家兔应予剔除，然后按编
12、号分组,方剂学实验范例 长春中医学院,银翘散、白虎汤、大承气汤的退热作用观察,实验结果,方剂学实验范例 长春中医学院,四逆加人参汤对离体蛙心收缩的影响,实验目的 四逆加人参汤具有回阳救逆作用，适用于阳气暴脱之厥证，本实验通过对离体蛙心缩的影响观察，了解其强心作用。,方剂学实验范例 长春中医学院,四逆加人参汤对离体蛙心收缩的影响,实验器材 动物：蟾蜍；药品：四逆加人参汤：制附子10g、人参10g、干姜10g、炙甘草6g，任氏液适量；实验用品：二导生理记录仪、蛙心夹杠杆、蛙心插管、试管夹、线、双凹夹、铁支架、蛙手术器械、滴管。,方剂学实验范例 长春中医学院,四逆加人参汤对离体蛙心收缩的影响,实验方
13、法 离体蟾蜍蛙心脏的制备： 取蟾蜍1只，破坏脑和脊髓，暴露心脏，在左侧主动脉下穿两根丝线，结扎右侧和左侧主动脉上端的丝线，将左侧下端丝线打一松结。在左侧主动脉结扎线下端，用小剪刀轻轻将主动脉剪一小斜口，将盛有少量任氏液的蛙心插管由此斜口插入动脉，然后将插管稍向后退再转向心室中央的方向，插入心室腔内，插管是否插入心室，可看插管中的任氏溶液面是否随心搏而上、下移动。如已进入心室，则将松结的丝线扎紧，固定于蛙心插管的小突起上。,方剂学实验范例 长春中医学院,四逆加人参汤对离体蛙心收缩的影响,实验方法最后将蛙心与插管一同提起，剪断周围软组织后，在静脉窦部位穿一丝线，并结扎，在结扎线以下剪断软组织，摘出
14、心脏。吸出蛙心及插管内血液，并用任氏液灌洗数次，以防血液凝固，堵塞插管。在蛙心尖部用蛙心夹夹住蛙心尖，夹蛙时注意在舒张期夹。将蛙心夹的线连于二导的换能器，作好描记曲线的准备。 观察：启开二导记录装置，描记正常蛙心收缩曲线，观察心跳频率和强度。将准备好的四逆加人参汤溶液用滴管吸出后加两滴于插管的任氏液中，观察蛙心心跳变化，并做好记录。,方剂学实验范例 长春中医学院,四逆加人参汤对离体蛙心收缩的影响,实验结果 将描记的曲线贴上。,方剂学实验范例 长春中医学院,独参汤对小白鼠耐缺氧作用的观察,实验目的 独参汤大补元气，本实验通过对小白鼠注射人参药液和注射生理盐水作一对照，以观察在缺氧环境下抗御能力的
15、差异。,方剂学实验范例 长春中医学院,独参汤对小白鼠耐缺氧作用的观察,实验器材 药物：1：1生晒人参水提液、生理盐水适量；动物：1820g小白鼠10只；实验用品：250ml广口瓶及橡皮塞各10只、注射器、针头(6号)、秒表、纱布、天平。,方剂学实验范例 长春中医学院,独参汤对小白鼠耐缺氧作用的观察,实验方法 将生晒参以1：1浓度水煎至所需量，冷却待用；取小白鼠10只，分成二组。一组为实验组，一组为对照组并称好体重，作好标记；将实验组小白鼠腹腔注射生晒人参药液，以025ml/l0g的剂量；对照组注射等量的生理盐水；待用药半小时后，将小白鼠放到广口瓶内，迅速用橡皮塞塞紧瓶口，同时按下秒表；仔细观察
16、小白鼠窒息致死的时间，并做好记录。,方剂学实验范例 长春中医学院,独参汤对小白鼠耐缺氧作用的观察,实验结果,方剂学实验范例 长春中医学院,四君子汤对小鼠肝组织丙二醛(MDA)的影响,实验目的 机体通过酶系统与非酶系统产生氧自由基，后者能攻击生物膜中的多种不饱和脂肪酸，引发脂质过氧化作用，并因此形成脂质过氧化物。脂质过氧化作用不仅把活性氧转化成活性化学剂，通过链式或者链式支链反应，放大活性氧的作用，因此初始的一个活性氧能导致很多脂类分解产物的形成，这些分解产物中一些是无害的，另一些则能引起细胞代谢功能障碍，甚至死亡。本实验通过观察四君子汤对小鼠肝组织匀浆MDA的作用以验证其功效。,方剂学实验范例
17、 长春中医学院,四君子汤对小鼠肝组织丙二醛(MDA)的影响,实验器材 1动物 小鼠，雌雄不限。 2药物 (1)四君子汤水煎液，1g生药ml。 (2)1号为10ml溶液，室温保存，天冷时会凝固每次测试前适当加温以加 速溶解，直到透明方可应用。 (3)2号试剂为10ml溶液，用时加290ml双蒸水稀释。 (4)3号为粉剂，用时加100ml双蒸水，适当加温溶解。 (5)4号为标准品，为10nmolml的四氧基丙烷10ml。 3实验用品 天平、试管、滤纸、可见光分光光度计、恒温水浴锅、离心机、匀浆器等。,方剂学实验范例 长春中医学院,四君子汤对小鼠肝组织丙二醛(MDA)的影响,实验方法 1小鼠10只，
18、分为对照组和四君子组，对照组1g生理盐水02ml10g，四君子组1g黄芪水煎液02ml10g，每日一次，共三天。 2小鼠断头处死，取出部分肝组织，用滤纸吸干表面血液，称重，在冰浴条件下用冰冷的生理盐水制成10肝匀浆； 3按照以下步骤在试管中依次加入试剂：,方剂学实验范例 长春中医学院,四君子汤对小鼠肝组织丙二醛(MDA)的影响,实验方法,甲液的配制方法：1号:2号:3号01:3:1乙液的配制方法：1号:2号:双蒸水01:3:1,方剂学实验范例 长春中医学院,四君子汤对小鼠肝组织丙二醛(MDA)的影响,实验方法4以上用旋涡混匀器混匀，沸水浴40分钟，4000转/分钟离心10分钟，吸取上清液，蒸馏
19、水调零，1cm的杯子532nm处比色。5计算测定管吸光度测定空白管吸光度标准管吸光度标准空白管吸光度 10mol/L=测定样品中丙二醛含量,方剂学实验范例 长春中医学院,四君子汤对小鼠肝组织丙二醛(MDA)的影响,实验结果 将实验结果填入下表中：,方剂学实验范例 长春中医学院,四君子汤对老年小鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)的影响,实验目的 SOD对机体的氧化与抗氧化平衡起着至关重要的作用，此酶能清除超氧阴离子自由基，保护细胞免受损伤，因而SOD的活力与衰老、肿瘤、炎症、自身免疫、血液、心、脑血管病、肾病、消化系统疾病、辐射等有密切联系，对疾病的病因学探讨、诊断、治疗、术后观察有着重要的意义。可
20、测血清、血浆、脑脊液、胸腹水、尿液、红白细胞、各种培养液中的SOD，并可检测药物、食品、化妆品中的SOD的活力；借黄嘌呤以及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子自由基，后者氧化羟胺成亚硝酸盐，在显色剂的作用下呈紫红色，而SOD则抑制此反应，根据抑制率的高低算出SOD的含量。 四君子汤可补中益气，具有抗衰老的作用，本实验通过四君子汤对小鼠血清SOD的影响以验证其抗衰老作用。,方剂学实验范例 长春中医学院,四君子汤对老年小鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)的影响,实验器材 1动物 小鼠，雌雄不限。 2药物 (1)黄芪水煎液，1g生药ml。 (2)R1一瓶80ml用时对倍稀释，R2一瓶、R3一瓶、R4一支
21、、09ml，用R199ml稀释，4保存。 (3)测定试剂的配制：R1：R2：R3=1：01：01,视需要量配制。 (4)R5、R6各一支、为粉剂，用时加双蒸水100ml溶解后备用，配制后的试剂要避光冷藏保存。 (5)显色剂的配制：R5：R6：冰醋酸=3：3：2,4保存。 3实验用品：试管、滤纸、可见光分光光度计、离心机、眼科镊等。,方剂学实验范例 长春中医学院,四君子汤对老年小鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)的影响,实验方法 1小鼠10只，分为对照组和黄四君子组，对照组1g生理盐水02ml10g，四君子组1g四君子水煎液02ml10g，每日一次，共三天。 2.小鼠摘眼球取血，滴入小试管中，200
22、0rmin离心5分钟，得血清。 3.按照以下步骤在测定管和对照管中加入试剂：,方剂学实验范例 长春中医学院,四君子汤对老年小鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)的影响,实验方法,方剂学实验范例 长春中医学院,四君子汤对老年小鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)的影响,4、混匀10分钟后，550nm，1cm的比色杯蒸馏水调零比色。5、计算对照管光密度测定管光密度 3.93（总反应量）对照管光密度 50% 0.03（取样量）SOD Nu/ml,方剂学实验范例 长春中医学院,四君子汤对老年小鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)的影响,实验结果将实验结果填入下表中：,方剂学实验范例 长春中医学院,酸枣仁汤的镇静作用的观
23、察,实验目的 酸枣仁汤具有养血安神、清热除烦作用，适用于失眠之症，本实验通过观察酸枣仁汤对安定引起小鼠睡眠时间的影响，以验证其方的催眠作用。,方剂学实验范例 长春中医学院,酸枣仁汤的镇静作用的观察,实验器材 动物：20g左右小白鼠6只，分为两组；药物：酸枣仁汤：酸枣仁20g、甘草30g、知母3g、茯苓20g、川芎10g，配制成100酸枣仁汤注射液。01安定注射液、生理盐水适量；实验器械：2ml注射器2具、针头、天平、鼠笼。,方剂学实验范例 长春中医学院,酸枣仁汤的镇静作用的观察,实验方法 将二组小鼠均按02mll0g体重的剂量腹腔注入安定注射液，逐一记录小鼠入睡时间(翻正作用消失)；注射安定1
24、0分钟后给第l组小鼠腹腔注入05mll0g生理盐水，给第2组小鼠腹腔注射同等剂量的酸枣仁汤注射液；记录各鼠苏醒开始爬行的时间，算出各小鼠睡眠的时间。,方剂学实验范例 长春中医学院,酸枣仁汤的镇静作用的观察,实验结果,方剂学实验范例 长春中医学院,金铃子散镇痛作用的观察,实验目的 金铃子散具有疏肝泄热，行气止痛的作用，适用于胸腹胁肋痛、痛经等症。本实验用热板法或扭体法了解金铃子散的镇痛作用。,方剂学实验范例 长春中医学院,金铃子散镇痛作用的观察,实验器材 动物：小白鼠(18-22g) 雌性1830只；药物：金铃子散：金铃子50g、玄胡索30g,制成100金铃子散煎液；01咖啡；06冰乙酸；生理盐
25、水适量。实验用品：注射器(1ml)、针头(5号)、热板镇痛装置、钟罩。,方剂学实验范例 长春中医学院,金铃子散镇痛作用的观察,实验方法 小鼠热板法：取18-22g雌性小白鼠，先将动物在温度保持于55的热板上进行筛选，测定各小白鼠的正常痛觉反应(踢后腿、跳跃后足)时间，共测二次，每次间隔5分钟，求平均值(以平均值不超过30秒为合格)，然后将各鼠分别腹腔注射生理盐水025ml只、01盐酸吗啡02ml10g、金铃子散水煎液02ml10g，给药后第10、20、30以及60分钟测定痛觉反应时间二次，求平均值。如小白鼠在60秒内无痛反应，立即取出。按60秒计算，将所得的痛觉反应时间，按下列公式计算，算出用
26、药后各不同时间的痛阈提高百分率。,方剂学实验范例 长春中医学院,金铃子散镇痛作用的观察,以痛阈提高百分率作纵坐标，绘出各药的镇痛作用时程曲线，加以比较。 痛阈提高百分率用药后平均反应时间用药前平均反应时间 用药前平均反应时间 100% 小鼠扭体法：选用18-22g小鼠，分二组，每组10只，分别注射同剂量的生理盐水04mll0g、金铃子散药液04mll0g，注射后半小时，分别腹腔注射06冰乙酸01mll0g，引起扭体反应，5分钟后开始记录20分钟小鼠的扭体次数。 实验组无扭体反应的百分数对照组无扭体反应的百分数 镇痛百分率 对照组扭体反应的动物百分数 100%,方剂学实验范例 长春中医学院,金铃子散镇痛作用的观察,实验结果(1)热板法镇痛试验,方剂学实验范例 长春中医学院,金铃子散镇痛作用的观察,实验结果 (2)扭体法小鼠镇痛试验,方剂学实验范例 长春中医学院,木香槟榔丸对离体肠蠕动的影响,实验目的 观察木香槟榔丸对肠管平滑肌蠕动的影响，以探讨本方药物泻下、理气的机理；学习离体组织实验操作方法。,方剂学实验范例 长春中医学院,木香槟榔丸对离体肠蠕动的影响,实验器材 100的木香槟榔丸煎液，麦氏浴槽、恒温水浴箱、万能杠杆、球胎、温度计、滴管、台氏液、烧杯。 实验动物 家兔1只。,
