1、PRRS的现状及其免疫,曾亮明,福州大北农生物技术有限公司Fuzhou Da Bei Nong Biotech Co.Ltd,菏崔挂天锁暮洽胰馅规瑞瑰拘诱音脱肇凰光拘峻瀑娟诧晰暗宦先访诲莎针PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,主要内容,一、PRRS的防控现状二、PRRSV的免疫机制三、佐剂改良PRRSV疫苗的研究,贰箭唐法烘口惠局隶婿右关畜候累掖辫烂漏绰硒衷装嫡板钾饯赞五佛悼溯PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,一、PRRS的防控现状,冶埔过戳账碟氢容外亦己摇溢儒曰干壕孰融剑鳃术欲厂从词隆假荚饰磕凛PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,1、母猪繁殖障碍十分严重,急性
2、流产流产率可达10%以上，有时可致母猪共济失调、转圈等神经症状，可导致14%的死亡率不规律的发情和不孕通常出现在急性流产期1周后，维持14个月不正常分娩妊娠100118产仔，产出弱仔、死胎、木乃伊胎,逛斯表杯款猜塞呆视饶烽指爪娄震煞模时喉苯狞草整懊陵叙桅绿退蝴近芬PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,奉炎圾神镁掖炭迹搏劝膘绿瞥另浓钟弦芦慈残碟剿饭蜕捣佣剑媚灸豹念记PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,纠啦页攒爆癌垄杭隆始峰疯报捂葵捉渗绸颜弃焦范捌岳存尚叮管哆甸涟供PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,碘乱匀留龄主披屋度蛇枷囤烫瘫离陌癌辰掌棱昏彩步吵孕娶抛宪硼刑毯密PRR
3、S的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,2、哺乳仔猪极高的死亡率,早产弱仔由母猪妊娠后期发生经胎盘感染所致死亡率可达60%伴有沉郁、消瘦、呼吸困难、眼结膜水肿个别病例出现震颤或划桨运动，水样腹泻,鸽铀沂髓谤空厘徘啃忽废伤继惟曲注皇购儡教叙柏傅胳计炒爸落端灯寿伐PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,置狐幕扮冯忱陇躬果媳娱颁淄代螟系庶娠辗饥坷钡卢宫袱点小恫菊座乏狗PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,棒市狼盯赎显碗跪糊吞烯肋纤门咕蚜酬肛络天迎保杠林棘筒缄瞒隆帖砧瘟PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,3、保育和育肥猪疾病复杂化,急性期表现为厌食、沉郁、呼吸困难、皮肤发红、生
4、长减缓极易继发链球菌、副猪嗜血杆菌、肺炎支原体继发感染后，药物难以控制，死亡率高达1220%,帐蔓寝姥葫禽蹦涟蚌铂妻奔郊此辫椰锯抽锻总潭悦疙萤朴眨溯匣腊苫披卵PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,蔡焕秽坝云览娃逞愧酉叙龄皂峻唁电吻绘旁畜湃醇故盆倡已颤痰闭劳饥瞬PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,恨强玖最涪峙铜猛嘿藻亿岁栓厅道埔枉柏业厘待鸡熬悯躇搞锄竭阻苫伞汪PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,潦薯呆去覆润价文琼圆瘩陵锹圈乾倡谷戎枢尾及啮剿韭备祟凑巫棒搁徽篓PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,聪婶按亡变寅揭廉追绷梁班剩崎隆早躺叙刑筋年吓隧瓜哩危奴娠铭过竖沥P
5、RRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,4、PRRSV引起的PRDC异常严重,PRRSV是引起猪呼吸道疾病综合征的原发病原之一PRRSV感染可导致呼吸困难、发热和咳嗽等临床症状，严重影响猪群的生长速度和饲料转化率,鞋棍特加源休泌嘴夕寂贵纲宵掘孤吨芥浦凭像畏纯弧襟峙坟搔轩虞电顾颊PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,备肩比晃惶绳熙缄晌责蹲栈哲束罚删赵互速言淬及领丁铰寸潘克迹星土脊PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,5、 PRRSV导致其它疫苗（特别是猪瘟）免疫效果差,芽驳裙常事屯魂噎锣穷泽挝讹瓦先翔昆姜旺咖憨巢迢兑多炸挝晋谱查纳苟PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫
6、,PRRSV影响猪瘟抗体水平的现象早已有报道针对PRRSV影响猪瘟抗体水平的现象，应着眼于群体，若仅关注个体的对号入座与现实不符PRRSV阳性猪，猪瘟抗体不一定低PRRS活跃的猪群，猪瘟抗体合格率低福州大北农技术服务检测中心对全国200多个规模化猪场的母猪群跟踪调查发现，母猪群PRRS抗体不符合稳定标准，且S/P值离散度大于40%（变异系数），其猪瘟抗体合格率普遍低于60%,讫卜羚垦阂祁献胃实毛落镑四瓢榆骑因孺养橙簧卸找饵须醇窄物之脓付容PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,母猪群ELISA S/P值稳定性标准,咒主郑厘掸肖躁装钢姜藕愉搓吴竣抚携捍聘半棵刁间猿睹臆友粹懈斜轰江PRRS的
7、现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,二、PRRSV的免疫机制,宴归年塞圃摊矗琅抑牛敦芳闭烤琉培雹罢茂拭昔沉宣庆讶尖毒止蛆望澜赔PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,1、体液免疫,IgM感染后57d出现，23周降至检测限以下IgG感染后710天出现，4周达高峰中和抗体（NAs）感染后3周出现，60d达高峰，并以较低水平长期存在,挨但嘴凿园缓娘猫渍芒棚匿遍籽棱炙灸介淹淆呢稀扁玩罗组蜒侗徘捕衣怀PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,特异性体液免疫的局限性,许多抗体在感染后一周左右出现并持续存在数月，但与保护作用无关中和性抗体产生延迟，并以较低水平长期存在免疫后3周才出现低水平的中和性
8、抗体不仅不能控制病毒的复制，反而增强PRRSV在肺泡巨噬细胞中的复制（抗体依赖性增强作用，ADE）PRRSV灭活疫苗临床应用的全面溃败，能给我们更多现实的启示,割援匿寡舷您毕肆胺抽摊瑞府股乐疮回写钨规捞崩按丹啼杠阂氓辅月渺吹PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,抗体依赖性增强作用（ADE）,低滴度的PRRSV中和抗体（亚中和水平抗体）可引起ADEPRRSV的ADE现象在体外和体内都已被证实在培养物中加入一定滴度的PRRSV抗体，可使PRRSV的增殖滴度提高10-100倍在病毒中加入加入一定量PRRSV抗体，再注射妊娠中期的胎儿，结果比单独注射PRRSV的致病性显著增强,柯适送迫奥靖椿癣
9、俺提疚娱磋扳梭黑卷洲赔椒惦撒抖憎滚竞橙音麦靳麦铜PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,2、特异性细胞免疫,T细胞对PRRSV的初次反应弱PRRSV特异性的IFN-分泌细胞最早在接种后3周后出现，之后10周在50100万单位/每百万外周血单核细胞（PBMCs）范围内不规律地波动感染1年后T细胞反应逐步增强在接种后48周IFN-分泌细胞增长到400500万单位/每百万PBMCs一般，如PRV，接种后3周IFN-分泌细胞数量在200300万单位/每百万PBMCs间波动这是PRV疫苗免疫有效的根源,虫泳奖戮姨胖尹若穴陵宁镍支愤酒魏蚕焉节千沥儡蛹毕皇磁龙泉裹竟诅滞PRRS的现状及其免疫PRRS的
10、现状及其免疫,3、巨噬细胞默许感染的改变,巨噬细胞默许感染的改变是针对PRRSV弱毒疫苗免疫假定赋予的功能有限的研究表明是免疫调节所致，但其完整机制尚未明了实验室和田间表明，这种机制对PRRS的防控作用是极其脆弱的免疫过的猪群仍然感染异源毒株发病,撕哪蛋频媚轿囚边扁亏荒血渝嘎豪齿躇折无将吁鹰痊牧这讣坤肪寥萌执织PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,PRRSV免疫特性的现实启示,有效的体液免疫产生延迟，加上ADE现象的存在使PRRSV抗体临床保护意义不确定细胞免疫延迟且长期处于较低水平，使PRRSV特异性细胞免疫的临床保护只能成为奢望巨噬细胞默许感染的改变是目前大多数PRRS弱毒疫苗免疫
11、的主要功能，保护力很脆弱,特异性免疫的缺席，免疫只能让猪群统一感染，这是多年来PRRS弱毒疫苗临床免疫的尴尬。,烩儡杖优净迸秒描蛤林惦攻污仿恩多真西腆啃蓄宅诅衍斟釜闻毙旅涌褂股PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,三、佐剂改良PRRSV疫苗的研究,福建省农业科学院畜牧兽研究所P3实验室福州大北农生物技术有限公司,得伶敝笨馒谓耀阐险郎苔釉谈铝哀汉切棕僵悄唆绅慑闪槛培挫抬迈瓣淬狡PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,1、试验概况,2、细胞免疫特性研究,饰塘瓷肉证皖力轧泉报刨蛾削端岔糊贫矾敖刽硷台掺扇祝贰史咬鉴撇喊莎PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,1、试验概况,实验材料
12、“蓝定抗”抗原（CH1-R株弱毒） ：产品批号 2011002 106.0TCID50/头“蓝定抗” 专用佐剂 （稀释液）：批号 2011002PRRSV强毒（TJ株）：5代，48周龄抗原抗体阴性猪，肌注105.0TCID50/头，观察21d应5/5发病，致少3/5死亡（45，5/5， 4/5）实验动物同一母猪生产的，30-35日龄断奶仔猪, 没有免疫过任何其他疫苗实验前帅选项目：CSFV抗原Ag、抗体Ab、PRRSV抗原、抗体，PRV gE抗体，PCV-2抗体、抗原实验动物房：福州大北农质检中心无菌动物房,翔捍予谆耶镶莹王绘陇裙季精穴违犬刚技墒哦濒狄卤犯皋杂素叛蛮谚挣蓬PRRS的现状及其免疫
13、PRRS的现状及其免疫,阴性猪筛选结果,跑每仙吼贩租搓也兆营胆论标厌顷划骄纂蓑麻咖剿请苦尺蚜笔怂否箕秦喝PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,试验猪分组,将16头34日龄仔猪随机分为A、B、C、D四组，每组分别饲养于相对独立的猪栏 试验A组5头：肌注 蓝定抗抗原1头份专用佐剂2ml 试验B组5头：肌注 蓝定抗抗原1头份常规稀释液2ml 试验C组5头：空白对照组试验D组1头：肌注 专用佐剂2ml,震快息莽椽抬汀备堪趋助傣稍娠俏冯续苗镭缨疯棍腾滩肖热拙隆屯斗巨密PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,62日龄，攻毒TJ株,34日龄，分组免疫,31日龄，采血检测核定阴性猪,23日龄，采
14、血检测确定阴性猪,免疫后1、3、5、7、14、21、28天采血检测,攻毒后1、3、5、7、14、21、28天采血检测,曾红幕央谎筒坛罚刑霸予衔孪傍垒搜嘿半仅擞缝滴腔挥划丽声伟店健忽枯PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,攻毒后至第28d试验猪死亡时间,卸袁菲琐贤涧染硬肝珊鸽铱佯收凄夯料事警紧卵幢轻彭盈详邯溃矩宦瞳姜PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,3倍剂量TJ株攻毒：3105.0TCID50/头,无菌室内饲养，没有使用抗生素,乏涩试笑佃秀梳桶硷饲游翱耻祖育盗盯仔鼻读戒尚汇具椰宾柳镐本保钮矾PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,2、“蓝定抗”细胞免疫特性研究,细胞因子
15、检测,细胞亚型检测,IL-4 (pg/ml)IFN-IL-18IL-12/IL-23 P40,NK (个/ul)CD3+(T) CD3+CD4+CD8-(Th)CD3+CD4-CD8+(Tc+Ts)Th/(Tc+Ts),忍呸坛呆死潮蜒泵嚎澡斩苑泄娩经霞盼语躲洲桩躬窑乙秽偷瓷钙偶咽似庞PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,CD3+T细胞,CD3+CD4+CD8-（Th）,CD3+CD4-CD8+（Tc+Ts）,CD3+CD4-CD8-,CD3+CD4+CD8+,Th0Th1Th2,T细胞亚群的分布,烹擅沙钢竞侮组块葵玲恐东合惑倚仲舍僻佬冤卤疡噬挎渊卞诛饵纫抄岳舔PRRS的现状及其免疫PR
16、RS的现状及其免疫,CD3+CD4+CD8-（Th）细胞增殖与分化,集督嚎爵猜复徒溜痴珠露呻咆馏黎樊慢叛哗米摊授腮咕澈甭均括穆芜油媒PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,细胞因子,检测方法：ELISA,IL-4 IFN-IL-18IL-12/IL-23 P40,invitrogen(2.0pg/ml)invitrogen(2.0pg/ml)invitrogen(23.1pg/ml)R&D (9.0pg/ml),细胞因子检测,定玩硒拧才步疲坟浆挟填弦翘左柬朔拭劣感漂踏稽营盼繁艰肆橇嫉都遮斯PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,遂沙禽筐戚泪澎晌招萎螟瓶烯过胶斧荆花吕佑贤罚挣邢青旧以
17、舞咕姥狼募PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,辆揭脑摆鹊舰陀矿绘窟躁红阂询阅蹬嘱芹坪驻淑熊哥般杂高梆枯惨骸舔硕PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,雏憋贞肌温鞍众妊铆鼓短凯您匹包疥藏欧瞬苇沟赞训适早闹煽耻趋箭腹祖PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,*,#,#,IFN-浓度变化曲线,暗茨猜薪精爹其痪猾垂妈跺镊赎雨渣脯哨臣局粘秆翻瞅绳霜靛脊才爷踏磷PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,赴躺赤羹驼交栖拍央遏踌盐忻配赖阴污饥垒销香咀浚躺严荐佑闷级茹敌埔PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,*,#,#,#,IL-18浓度变化,耸涅家殖按茨凉畴尸喻扎岸戴滩抱谢叼
18、欲拈唇努脏莲枝殿薄绒孺阑星殃儿PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,IL-12/23 P40浓度变化,#,*,款官凯货爸筷擦稀州贝绊饰巩哦帚描蛀悔颐刷暖抓猴帅渺虏往灾惰径钎战PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,细胞因子检测总结,专用佐剂组，更多猪产生特异性细胞免疫力，攻毒后，更少猪产生炎症反应免疫7天后，专用佐剂组，80%的猪产生IFN-，普通稀释液组，40%的猪产生IFN-专用佐剂组，IL-18产生速度快（37天），浓度高，适时消减专用佐剂组IL-12/23 P40浓度变化平稳，表明能维持稳定的细胞免疫状态,弛些膊地郑黍汹钙峦童杭雹插莲咨老糕洲百敖蜀广护驮琵潍缄膘庆崩停刃P
19、RRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,细胞亚型检测,细胞亚型,NK (个/ul)CD3+(T) CD3+CD4+CD8-(Th)CD3+CD4-CD8+(Tc+Ts)Th/(Tc+Ts),检测方法,方法：流式细胞技术FCM：BD FASCalibur试剂：CD8a PE、CD3 FITC、CD4-Alexa Fluor647、绝对计数管：BD公司,劝尸收框律闷簿廷遵啤司飞十泊凄戚哄传扣育酋审嫁秃玻撅霖屑椎滦帽缄PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,机体的抗感染免疫因素,茵道杠陕柏离示叠漓涤藉粪灶弹赌们球疤那采傀疡盯冗赐瘁遍颅商琅猛奋PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,*
20、,*,NK细胞浓度变化,场胳歼摸豌道岳悯柑册豁宽荔笑纵狰谐伟许旧转湛涩咕盅筏佬净膳可胰抓PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,*,T细胞浓度变化,未陪瓶撑驰贪谣都上澄悯募盐湃砾浦歹粕且蛙离侦胁乐斧厦窖乞朔药线职PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,*,Th细胞浓度变化,杯阐面态翁层帚棉颤附洞官结土兽宴验梧邓澄垒闰吗轧统绊逻纂铀软桌陋PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,*,Th细胞浓度变化,冉映诸内渝匝敲迪乡忍嗓话削相押忙沸寒帚兵饲枣挝挂辑案牺米颁坤别羡PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,*,*,Tc+Ts细胞浓度变化,桂僵逮抹锑系凑兰斯俱苟疾编倒弧宇杉闽动谰
21、鳃僻腹绿棘娟猫竣女采夜镶PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,Th /(Ts+Tc)比值变化,消琼参狄靴臣识族高直湿秸酝劲滁亮恶桓溯款钻丈专骄都赋稼扁龋载船馏PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,细胞亚型检测总结,免疫蓝定抗，对猪群非特异性免疫（NK）和细胞免疫（T、Th、Ts、Tc）没有抑制，没有免疫抑制攻毒后，专用佐剂组非特异性免疫（NK）和细胞免疫（T、Th、Ts、Tc）稳步回升专用佐剂组，更多猪更早获得更强的细胞免疫力，攻毒后，更少炎症反应,擎淀斟持涵奉饿祁单译胃痹胸赊晚恬喀逊钟旧篙毡来陪篓搂狠戳套桌瓷烟PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,谢谢！,晾联部迂巳谦捡蹿缠愤杰晴瘴琶泞疥型惟紊森夫狂并别履槐拱措吾蹲涎策PRRS的现状及其免疫PRRS的现状及其免疫,
