1、第三章 细胞生物学研究方法,第一节 细胞形态结构的观察方法,一、光学显微镜技术,显微镜和显微镜的分辨能力,肉眼：0.2 mm; 光镜：0.2 um; 电镜：0.2 nm,: 光源波长; : 物镜镜口角; N: 介质折射率,显微镜成像原理,普通复式光学显微镜（light microscope）相差显微镜（phase-contrast microscope）（光程差或相位差转变为振幅差，相差板）荧光显微镜（fluorescence microscope）微分干涉显微镜（differential-interference microscope）（厚度差转变为明暗差；增加样品反差，立体感强）激光共聚焦
2、显微镜（laser scanning confocal microscope）,双目显微镜,正置显微镜,倒置显微镜,荧光显微镜及其照片,共聚焦显微镜及其显微图像,激光共聚焦原理,暗视野成像原理,二、电子显微镜 1，电镜基本知识和结构（波长小于0.1nm） 2，样品制备 （超薄切片，负染色，冰冻蚀刻，三维重构，扫描） 3，电镜种类 扫描电子显微镜 透射电子显微镜 扫描隧道显微镜,透射电镜及其图像,扫描电镜及其图像,第二节 细胞组分的分析方法,一、高速、超速和梯度密度离心分离各种细胞器、生物大分子及其复合物,差速离心,密度梯度离心,二、细胞内核酸、蛋白质、酶、糖类、脂类的显色,DNA：福尔根（Fe
3、ulgen）反应紫红色多糖类：PAS反应黄色脂肪：苏丹III红色蛋白质：米伦（Millon）红色,三、特异抗体技术,免疫荧光免疫电镜免疫沉淀Western blotting,四、特异核酸标记技术,In situ hybridization,Northern blot (RNA); Southern blot (DNA),原位杂交技术,五、放射性标记技术,六、定量细胞化学技术,七、柱层析、分子筛、免疫吸附、免疫沉淀等方法分离蛋白质组分及复合物（交链和变性）,定性、定位、半定量研究（标记，自显影）32P（14天）, 14C（5760年）, 3H（12年）, 35S（87天）, 131I （8）,显
4、微分光光度术（紫外显微分光光度、可见光显微分光光度染色）,流式细胞仪,流式细胞术,第三节 细胞培养、细胞工程与显微操作技术,一、细胞培养 1，植物细胞 （原代细胞培养，永生细胞系） 2，动物细胞 （单倍体细胞培养，原生质体培养，体细胞培养） 3，非细胞体系 （DNA复制，RNA转录，蛋白质合成，高尔基体的膜泡 运输，细胞核装配等） 细胞提取物，细胞核提取物,植物组织培养,动物细胞培养,细胞的克隆,二、细胞工程 1，细胞融合与杂交 植物细胞先去壁； 融合方式：仙台病毒或聚乙二醇介导，电融合等 同核融合细胞，异核融合细胞，染色体丢失 2，单克隆抗体技术,三、显微操作技术,1975年英国科学家Milstein and Kohler, 1984年获诺贝尔奖B淋巴细胞 + 小鼠骨髓瘤,转移细胞核、细胞器、基因等,四、转基因、基因沉默、基因敲除、模式生物等,显微操作仪,显微操作示意图,单克隆抗体技术,
