1、K5500微量分光光度计K5500 Micro-Spectrophotometer,定义: 分光光度法是利用物质所特有的吸收光谱来鉴别物质或测定其含量的分析检测技术。 特点: 灵敏、精确、快速和简便，在复杂组分系统中，不需要分离，即能检测出其中所含的极少量物质。 应用: 生物化学研究中广泛使用的方法之一，广泛用于糖，蛋白质，核酸，酶等的快速定量检测。,分光光度计的分类,分光光度计的分类,紫外分光光度计:可见分光光度计:红外分光光度计:,测定波长范围为200380 nm的紫外光区测定波长范围为380780 nm的可见光区测定波长范围为大于780 nm的红外光区,分光光度计的光谱范围,包括波长范围
2、为380780 nm的可见光区和波长范围为200380 nm的紫外光区。不同的光源都有其特有的发射光谱，因此可采用不同的发光体作为仪器的光源。 钨灯的发射光谱：钨灯光源所发出的380820nm波长的光谱，光通过三棱镜折射后，可得到由红、橙、黄、绿、蓝、靛、紫组成的连续色谱；该色谱可作为可见光分光光度计的光源。 氘灯的发射光谱：氘灯能发出190400 nm波长的光谱，可作为紫外光光度计的光源。,氙气闪光灯的发射光谱：氙灯能发出200850 nm波长的光谱，可作为紫外-可见光光度计的光源。电源体积较小，采用脉冲闪光方式工作，闪光次数可达109次，寿命相对氘灯和钨灯较长。,物质的吸收光谱,如果在光源
3、和棱镜之间放上某种物质的溶液，此时在屏上所显示的光谱已不再是光源的光谱，它出现了几条暗线，即光源发射光谱中某些波长的光因溶液吸收而消失，这种被溶液吸收后的光谱称为该溶液的吸收光谱。 不同物质的吸收光谱是不同的。因此根据吸收光谱，可以鉴别溶液中所含的物质。,物质的吸收光谱,当光线通过某种物质的溶液时，透过的光的强度减弱。因为有一部分光在溶液的表面反射或分散，一部分光被组成此溶液的物质所吸收，只有一部分光可透过溶液。入射光 = 反射光 分散光 吸收光 透过光 如果我们用蒸馏水(或组成此溶液的溶剂)作为“空白”去校正反射、分散等因素造成的入射光的损失，则：入射光 = 吸收光 十 透过光,原理,分光光
4、度计进行样品浓度测定的原理是根据朗伯-比尔（Lambert-Beer）定律,A = b c 其中，A 为物质的吸光度； 为物质的吸光系数； b为光路长度（光程）； c为物质的浓度。,上式说明了物质的吸光度与吸收物质的浓度和液层的厚度成正比。,吸光度与浓度之间的关系,吸光度与物质的浓度成正比,分光光度计的基本结构,分光光度计一般包括5部分：光源、单色器、吸收池、检测器和测量仪表。分光光度计各部件的次序如图所示:,K5500微量分光光度计是一款新型全波长（200850nm）微量分光光度计，可用来检测核酸(A260nm)、蛋白质(A280nm, 以及试剂盒法)、细胞溶液、微阵列（基因芯片，同时检测核
5、酸(或蛋白)和荧光染料）样品以及可以进行常规紫外-可见（ 200850nm ）全波长扫描等。,K5500微量分光光度计,仪器特点,样品用量少（12L）！无需比色皿！紫外-可见全波长扫描（200850nm）！无需预热，可随时检测！检测速度快！直接显示浓度值！样品无需稀释，可测样品的浓度范围是常规紫外-可见分光光度计的50倍！数据统计软件方便容易掌握！,与传统分光光度计的区别与优势,与传统分光光度计的区别与优势,性能指标,样品体积要求：12L波长范围：200850nm波长精度：1nm波长分辨率：3nm (FWHM at Hg 546nm)吸光率精确度：0.003 Abs吸光率准确度：1% (0.7
6、6吸光率在350nm)吸光率范围：0.0275（等效于10mm）仪器外形尺寸：21cm17cm11cm仪器重量：1.35kg,测量,在测量类型选项区选择正确的测量类型。 测量样品之前，要先做空白对照。 空白对照（1）打开取样臂，用移液枪吸取12L样品溶剂滴加 到检测平台上。（2）合上取样臂，液柱会在上下基座之间自动形成。（3）点击测量功能区的“Blank”按钮，软件会对溶剂自动进行测量，并自动记录空白值。（4）打开取样臂，用干净的吸水纸将上下基座上的空白对照溶剂擦干净。,样品测量,（1） 以移液枪吸取样品（12L）滴加到检测平台上。（2 ）放下取样臂。（3） 点击软件界面上的“Measure”
7、按钮，即可得出样品参数（吸光度和浓度）和图表。（4 ）以干净的吸水纸擦去上下检测平台上的空白对照用溶剂。,（5） 如需保存图表，可点击“Save Graph”按钮。（6 ）待全部样品测定结束后，点击“Show Report”按钮，已测样品的测定数据将出现在Excel表格中。,仪器应用范围,K5500型微量分光光度计可用于测量：核酸：核酸样品的浓度和纯度，包括双链DNA，单链DNA和RNA。蛋白质：A280测蛋白质样品浓度，包括1Abs = 1mg/mL，BSA，IgG，Lysozyme；试剂盒法（Lowry法、BCA法、Bradford法）测定蛋白质浓度，软件自动绘制标准曲线，直接给出浓度值。常规紫外/可见全波长扫描：可进行紫外/可见全波长（200850nm）扫描。细胞溶液：细胞溶液密度的测定。微阵列样品：可同时检测核酸及染料浓度，且软件直接给出浓度值。,测量界面及吸收光谱特征,双链DNA紫外吸收光谱图样品在260nm处吸光度为3.5213Abs，浓度值为176.07ng/L,牛血清白蛋白（BSA）紫外吸收光谱图样品在280nm处吸光度为8.9425Abs，浓度值为23.7mg/mL,数据输出表格,
