1、生物医药工程系生物化学实验预习报告姓名 学号 专业 生物科学 班级 日期 实验名称 影 响 酶 促 反 应 的 因 素实验目的1了解温度、pH、激活剂、抑制剂对酶促反应速度的影响。2学习检定温度、pH 、激活剂、抑制剂影响酶促反应速度的方法。实验原理在酶促反应中，酶的催化活性与环境温度、 pH 有密切关系，通常各种酶只有在一定的温度、pH 范围内才表现它的活性，一种酶表现其活性最高时的温度、 pH 值称为该酶的最适温度、最适 pH。在酶促反应中， 酶的激活剂和抑制剂可加速或抑制酶的活性，如氯化钠在低浓度时为唾液淀粉酶的激活剂，而硫酸铜则是它的抑制剂。本实验利用淀粉水解过程中不同阶段的产物与碘有
2、不同的颜色反应，定性观察唾液淀粉酶在酶促反应中各种因素对其活性的影响。淀粉（遇碘呈蓝色）紫色糊精(遇碘呈紫色)红色糊精(遇碘呈红色)无色糊精(遇碘不呈色)麦芽糖(遇碘不呈色)葡萄糖(遇碘不呈色)。所以淀粉被唾液淀粉酶水解的程度，可由水解混合物遇碘呈现的颜色来判断，以此反映淀粉酶的活性，由此检定温度、pH、激活剂、抑制剂对酶促反应的影响。仪器及材料（型号、规格、数量等）1、唾液（吃食前的）2、试管 1.5cm15cm(13)3、吸量管 1.0 mL（12） 、2.0 mL（5） 、白瓷板 6 孔。实验试剂（配制方法、数量多少、用途）1、0.1%的淀粉液：称取可溶性淀粉 0.1g，先用少量水加热调
3、成糊状，再加热水稀释至 100ml。2、0.1%的蔗糖溶液：0.1g 蔗糖溶于 100ml 蒸馏水。3、本尼迪特试剂：称取 85g 柠檬酸钠及 50g 无水碳酸钠，溶解于 400ml蒸馏水中。另溶解边搅，如有沉淀可过滤。此混合液可长期使用。4、1%的淀粉溶液：将 1g 可溶性淀粉与少量冷蒸馏水混合成薄浆状物，然后缓缓倾入沸蒸馏水中，边加边搅，最后以沸蒸馏水稀释至 100ml。5、0.2mol/L NaHPO4 溶液： 称取 35.6gNa2HPO42H2O 溶解，最后定容至 1000mL。6、0.2mol/LNaH2PO4 溶液：称取 27.6gNaH2PO4H2O 溶解，最后定容至 1000
4、mL。7、1%氯化钠溶液:1gNaCl 溶于 100ml 蒸馏水。8、1%硫酸铜溶液：1gCuSO4 溶于 100ml 蒸馏水。9、1%硫酸钠溶液：1gNa2SO4 溶于 100ml 蒸馏水。10、碘化钾碘溶液：于 2%碘化钾溶液中加入碘至淡黄色 2%的 KL 溶液配制：称取 KI 2g 溶于 100ml 蒸馏水中实验步骤（一） 酶的专一性取干净试管 4 只，按 P166 表 35 加入试剂并操作。（二） 温度对酶活力的影响。取干净试管 5 支，按 P167 表 36 加入试剂并操作。再向各试管加碘化钾-碘试剂 2 滴，摇匀后观察各管颜色。（三） pH 对酶活力的影响取干净试管 5 支，按 P
5、167 表 37 加入试剂并操作。加酶后，迅速混匀，置 37水浴保温，每隔 1min 从 3 号试管中取溶液2 滴加到已有碘化钾碘试剂的白瓷板中，观察颜色变化，直至与碘不呈色时，再向各试管加碘化钾-碘试剂 2 滴，摇匀后观察。找出最适 pH.(四)激活剂和抑制剂对酶活力的影响取干净试管 4 支，按 P168 表 38 编号并加入试剂。加酶后，迅速摇匀，置 37水浴保温，每隔 30s 分别取 2 滴反应液在白瓷板中，滴加 1 滴碘化钾-碘试剂，观察颜色变化。结果计算公式（要求计算的）无实验注意事项1加入酶液后，要充分摇匀，保证酶液与全部淀粉液接触反应，得到理想的颜色梯度变化。2用玻棒取液前，应将试管内溶液充分混匀，取出试液后， 立即放回试管中一起保温。疑难问题1什么是酶的最适温度、最适 pH？ 它们是酶的特征物理常数吗？2激活剂分几类? 氯化钠属哪种类型？ 硫酸钠对淀粉酶的活性有无影响？注：此表格若地方不够可自行调整。
