1、1反相高效液相色谱法测定银翘感冒袋泡剂中绿原酸的含量【摘要】 目的 建立银翘感冒袋泡剂中绿原酸的含量测定方法。 方法 采用反相高效液相色谱法对银翘感冒袋泡剂中绿原酸进行定量分析,色谱柱为 Shimpack vpods C18(250 mm4.6 mm,5 m);流动相:甲醇三乙胺冰醋酸水(200.3186);检测波长:324 nm;柱温:30;流速1.0 ml.min-1;进样量:20 l。结果 绿原酸在 0.10163.0480 g 范围内呈良好的线性(r=0.9999,n=6),平均回收率为 100.28%,RSD 为1.57%(n=6)。结论 本方法准确、可靠、重现性好,可有效控制该制剂
2、的质量。 【关键词】 银翘感冒袋泡剂;绿原酸;反相高效液相色谱法 文章编号:1003-1383(2010)04-0403-02 中图分类号:R 927.2 文献标识码:A doi:10.3969/j.issn.1003-1383.2010.04.010 银翘感冒袋泡剂是在我院临床经验方的基础上研制而成,由金银花、薄荷、连翘等 9 味中药组成,具有辛凉解表、清热解毒之功效,主要用于治疗风热感冒、咽喉疼痛、咳嗽口干等,金银花为方中君药,绿原酸是其主要化学成分。为提高质量标准,达到更有效地控制该制剂内在质量的目的,本文建立以反相高效液相色谱法测定银翘感冒袋泡剂中绿原酸含量的2方法。 材料和方法 1.
3、仪器 岛津 LC20A 型高效液相色谱仪(SPD20A 紫外检测器、LCSolution 色谱工作站),Mettler toledo 型电子分析天平(瑞士 Metter公司);CQX256 型超声波清洗机(中国北京创新德超声电子研究所)。 2.试药 绿原酸对照品(中国药品生物制品检定所,批号:110753200413);银翘感冒袋泡剂(批号:090603,090610,090618,090626,090702,090712,本院自制);甲醇为色谱纯;三乙胺、冰醋酸为分析纯;水为纯净水。 2.方法 (1)色谱条件 色谱柱:Shimpack vpods C18(250 mm4.6 mm,5m);流
4、动相:甲醇三乙胺冰醋酸水(200.3186);检测波长:324 nm;柱温:30;流速 1.0 ml.min-1;进样量:20l。理论塔板数按绿原酸峰计算应不低于 3000。 (2)对照品溶液的制备 精密称取绿原酸对照品适量,置 25 ml 量瓶中,加50%甲醇使溶解并稀释至刻度,摇匀,以配成 0.508 mgml-1 的对照品溶液,备用。 (3)供试品溶液的制备 取 10 小袋样品,倾出内容物,研细,取细粉1.00 g,精密称定,置 50 ml 量瓶中,加 50%甲醇 40 ml,超声(260 W,频率40 kHz)处理 30 min,放冷,加 50%甲醇至刻度,摇匀,微孔滤膜(0.45m)
5、3滤过,即得。 (4)阴性对照品溶液的制备 以相同的处方比例取除金银花外的药材,按供试品溶液的制备方法制备阴性对照品溶液。 (5)线性关系考察 精密吸取对照品溶液0.25,0.50,1.50,3.00,5.00,7.50 ml,置 25 ml 量瓶中,加 50%甲醇稀释至刻度,摇匀。分别精密吸取 20l 进样,以对照品峰面积值为纵坐标(Y),对照品的量为横坐标(X),进行线性回归,得回归方程为Y=3075.2X+32.391,r=0.9999(n=6)。结果表明绿原酸进样量在0.10163.0480 g 范围内呈良好的线性。 (6)阴性干扰实验 分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各
6、20l 进样测定。结果供试品溶液中在与对照品溶液相同位置上具有同一保留时间的色谱峰,而阴性对照品溶液对测定无干扰。见图 1。 (7)精密度试验 精密吸取同一对照品溶液 20l,重复进样 6 次。测得峰面积的 RSD 为 1.02%(n=6),表明精密度良好。 (8)稳定性试验 取同一供试品溶液 20l,分别于 0,2,4,6,8,12 h 进样,测得绿原酸的峰面积的 RSD 为 1.05%,表明供试品溶液中绿原酸至少在 12h 内稳定。 (9)重复性试验 取同一批供试品 6 份,精密称定,制备供试品溶液,进样 20 l,测定绿原酸的含量,结果其含量的 RSD 为 0.73%(n=6),表明方法
7、的重复性良好。 (10)回收率试验 取已知含量的供试品 6 份,精密称定,分别精密加入0.508 mgml-1 的绿原酸对照品溶液 2.0 ml,按供试品制备方法制4备供试液,进样,记录色谱图,计算回收率。结果平均回收率为100.28%,RSD 为 1.57%,表明回收良好。见表 1。 结果 精密称取 6 个批号的样品各适量,按供试品制备方法制备样品溶液,在色谱条件下测定,用外标法计算绿原酸含量。结果批号为090603,090610,090618,090626,090702,090712 的样品中绿原酸含量分别为 2.835,2.852,2.906,2.867,2.793,2.784 mg/袋
8、,平均为 2.840 mg/袋。回收率试验平均回收率为 100.28%,RSD 为 1.57%,表明回收良好。 讨论 1.提取方法的确定 由于绿原酸极不稳定且极性较大,参考中国药典1并结合指标成分的理化性质,我们比较了热回流提取和超声提取两种方法,发现超声提取较为完全且不影响指标成分的分解,利于控制该制剂的质量。 2.提取溶剂的选择 采用甲醇、乙醇、水作为提取溶剂,通过比较单一溶剂和混合溶剂,最后选定 50%甲醇溶液作为最佳提取溶剂。 3.提取时间的确定 考察了超声提取时间的影响,结果发现超声处理20、30、40 min 差别不大,为了提取完全同时又节约时间,故选择超声提取 30 min 为宜
9、。 54.检测波长的选择 取绿原酸对照品适量,加 50%甲醇使之溶解,在200400 nm 范围内进行紫外扫描,结果绿原酸在 324nm 波长处有最大吸收,因此选择 324 nm 为检测波长。 5.色谱系统的选择 比较了甲醇三乙胺冰醋酸水(180.3185)、乙腈 0.3%磷酸溶液(991)1、乙腈 0.4%磷酸溶液(10100)2三个不同组分、不同比例的流动相,最终发现在甲醇三乙胺冰醋酸水(200.3186)的色谱条件下,绿原酸与其他组分分离较好(分离度大于 1.5,理论塔板数大于 3000),且阴性无干扰。 参考文献 1国家药典委员会.中华人民共和国药典M.(一部).北京:中国医药科技出版社,2010:1090-1091. 2钟镜金,陈丰连,王术玲,等.HPLC 法测定银翘解毒口服液中绿原酸的含量J.中药新药与临床药理,2007,18(3):228-229. (收稿日期:2010-06-29 修回日期:2010-07-25) (编辑:梁明佩 英文审校:钟京梓)
