1、诊状 可能的原因 解 决 方 法 1.柱温变化 柱恒温2.等度与梯度间未能充分平衡 至少用 10 倍柱体积的流动相平衡柱3.缓冲液容量不够 用25mmol/L 的缓冲液4.柱污染 每天冲洗柱5.柱内条件变化 稳定进样条件,调节流动相(一)保留时间变化6.柱快达到寿命 采用保护柱1.流速增加 检查泵,重新设定流速2.样品超载 降低样品量3.键合相流失 流动相 PH 值保持在 37.5 检查柱的方向4.流动相组成变化 防止流动相蒸发或沉淀(二)保留时间缩短5.温度增加 柱恒温1.流速下降 管路泄漏,更换泵密封圈,排除泵内气泡2.硅胶柱上活性点变化 用流动相改性剂,如加三乙胺,或采用碱至钝化柱3.键
2、合相流失 同前(二)34.流动相组成变化 同前(二)4(三)保留时间延长5.温度降低 同前(二)51.样品体积过大 用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的 15%2.样品溶剂过强 采用较弱的样品溶剂3.柱塌陷或形成短路通道 更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件4.柱内烧结不锈钢失效 更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品(四) 出现肩峰或分叉5.进样器损坏 更换进样器转子1.进样阀残余峰 每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗2.样品中未知物 处理样品3.柱未平衡 重新平衡柱,用流动相作样品溶剂 (尤其是离子对色谱)4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽谱) 每天新配,用抗氧化剂(五)鬼峰5.水污染(反
3、相) 通过变化平衡时间检查水质量，用 HPLC 级的水1.气泡(尖锐峰) 流动相脱气,加柱后背压(六) 2.污染(随机噪声) 清洗柱,净化样品,用 HPLC 级试剂3.检测器灯连续噪声 更换氘灯4.电干扰(偶然噪声) 采用稳压电源,检查干扰的来源(如水浴等)基线噪声5.检测器中有气泡 流动相脱气,加柱后背压1.柱超载 降低样品量,增加柱直径采用较高容量的固定相2.峰干扰 清洁样品,调整流动相3.硅羟基作用加三乙胺,用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相 PH值,钝化样品4.同前(四)4 同前(四)45.同前(四)3 5.同前(四)36.死体积或柱外体积过大连接点降至最低,对所有连接点作合适调整,尽可能采用细内径的连接管(七)峰拖尾7.柱效下降 用较低腐蚀条件,更换柱,采用保护柱1.进样体积过大 同(四)12.在进样阀中造成峰扩展 进样前后排出气泡以降低扩散3.数据系统采样速率太慢 设定速率应是每峰大于 10 点4.检测器时间常数过大 设定时间常数为感兴趣第一峰半宽的 10%5.流动相粘度过高 增加柱温,采用低粘度流动相6.检测池体积过大 用小体积池,卸下热交换器7.保留时间过长 等度洗脱时增加溶剂含量也可用梯度洗脱8.柱外体积过大 将连接管径和连接管长度降至最小(八)峰展宽9.样品过载 进小浓度小体积样品
