1、实 验 五 （原虫1） 阿米巴、利什曼原虫 贾第虫、隐孢子虫,掌握:溶组织阿米巴滋养体和包囊的形态特征；利什曼原虫无鞭毛体；隐孢子虫卵囊；贾第虫滋养体的镜下形态特征；各种常见原虫实验诊断方法。熟悉:利什曼前鞭毛体形态；阿米巴和贾第虫的包囊碘液涂片染色的方法。,实验目的和要求,示教内容（显微镜下）： (a) 利什曼前鞭毛体和无鞭毛体； (b) 蓝氏贾第虫滋养体和包囊 ； (c) 隐孢子虫卵囊；观察内容：溶组织阿米巴滋养体和包囊；贾第虫滋养体和包囊（铁苏木术染色）；利什曼无鞭毛体和前鞭毛体（吉氏染色）；隐孢子虫卵囊（改良抗酸染色）。操作内容：介绍淋巴结或者骨髓穿刺检查无鞭毛体 碘液涂片染色检查溶组
2、织阿米巴的包囊；电教：溶组织内阿米巴作业：1、绘蓝第虫滋养体、溶组织阿米巴滋养体和包囊、黑热病原虫前鞭毛体。 2、溶组织阿米巴检查中注意事项？,实验内容,溶组织内阿米巴（Eatamoeba histolytica）,又称痢疾阿米巴，寄生于结肠和其他组织内，引起阿米巴病。其生活史中具有滋养体和包囊两种形态。,1、滋养体： 形态变化大，大小为10-60m，具有侵袭性。活体时伸出伪足作活泼的变形运动-阿米巴动。滋养体内外质分明，外质薄而透明，内质呈颗粒状，可见被吞噬的红细胞和食物泡，具一个圆形的泡状核。胞核直径4-7m，核膜薄，其内缘有单层排列、大小一致的核周染色质粒，核仁细小，居中，核仁与核膜之间
3、隐约可见网状的核纤丝。,一、形态,滋养体 包囊,滋养体（铁苏木素染色）,包囊呈无色透明的圆球体，直径10-16m，胞质内可呈棒状的糖原泡和拟染色体（营养储存结构）。囊壁厚，囊内有泡状细胞核，四核包囊为成熟包囊（感染期）。碘染：呈棕黄色球形小体，可见核及核仁，胞质内可见棕色的糖原泡及透明的拟染色体。铁苏木素染色：包囊呈黑蓝色，核结构清晰。,2、包囊：,溶组织阿米巴包囊,400. Enlarged,400. Enlarged,1000. Enlarged,二、实验诊断,病原学检查：稀便：急性期稀便或脓血便中查滋养体，采用生理盐水涂片法（注意事项：保温、防止尿液污染、及时送检）成形粪便：碘液染色检查
4、包囊脓肿穿刺液涂片查滋养体免疫诊断：,杜氏利什曼原虫（Leishmania）,利什曼原虫的生活史有前鞭毛体和无鞭毛体2个时期，前者寄生于昆虫（白蛉）消化道内；后者寄生于脊椎动物（如人、犬）单核吞噬细胞内。,一、形态,又称利杜体，椭圆形或圆形，常见于M。 染色后，核较大，圆形，呈紫红色或红色，胞质蓝色。 内含有一个细小杆状的动基体，位于核旁。 动基体之前有一个点状基体，由此发出一条根丝体。,1、无鞭毛体,寄生于白蛉消化道内，成熟虫体呈梭形.核位于中部，动基体在虫体前端，基体在动基体之前.由基体发出1根鞭毛游离于体外，鞭毛摆动活泼.,1、前鞭毛体,培养基中的前鞭毛体常聚集呈簇，排列呈菊花状。,1、
5、病原诊断：常用方法（1）穿刺涂片检查：骨髓穿刺原虫检出率为8090%，（2）培养法：将穿刺物接种于NNN培养基，置22250C温箱内，1周后查见运动活泼的前鞭毛体则可确诊。（3）动物接种法，将穿刺物接种于敏感动物，1-2月后取其肝、脾作涂片，染色镜检。（4）皮肤组织检查法：,二、实验诊断,2、免疫诊断：用于个例辅助诊断或流行病学调查。（1）血清抗体检测：（2）循环抗原检测。3、DNA诊断：PCR和分子杂交。,简称贾第虫，寄生于人体小肠，引起以腹泻和消化不良为主要症状的贾第虫病，分布于世界各地，儿童和旅游者患病率较高，故有旅游者腹泻之称。,蓝氏贾第鞭毛虫,一、形态,1、滋养体： 形似纵切的半个梨
6、形，前端钝圆，后端渐变尖细，大小为921m515m，两侧对称，背面隆起，腹面扁平。 腹面的前部向内凹陷而成吸盘，滋养体借此吸附于肠粘膜上。,经铁苏木素染色后，可见吸盘背侧胞质内有2个圆形泡状核。两核之间2条纵贯虫体的轴柱，其前端有基体，为鞭毛发源处，其中部有1对半月形的中体。 虫体有4对鞭毛，按伸出部位分别称为前鞭毛，后鞭毛，腹鞭毛和尾鞭毛。,铁苏木素染色,1000. Enlarged,铁苏木素染色,瑞氏染色,2、包囊： 包囊椭圆形，囊壁较厚，大小为8-14m710m。 碘液染色后呈虫体黄绿色或灰蓝色，囊壁与虫体之间有明显空隙，核多偏于一端，数目2-4个，囊内可见轴柱，鞭毛。 铁苏木素染色后，虫体呈蓝黑色，囊壁透明，囊内结构清晰可辨。,1、病原学诊断：（1）粪便检查，为本病首选检查方法对腹泻者，用NS直接涂片法查活动的滋养体；对成形粪便，用碘液染色法查包囊。包囊形成有间歇，故检查时应隔日1次并连续3次以上送检为宜。（2）十二指肠液或胆汁检查： （3）小肠活组织检查，利用纤维胃镜取小肠粘膜组织进行压片或切片染色检查滋养体。,二、诊断,2、免疫诊断：3、DNA诊断：,隐孢子虫,隐孢子虫卵囊抗酸染色,作 业,绘图： 溶组织阿米巴滋养体和包囊、 杜氏利什曼原虫前鞭毛体、 蓝氏贾第鞭毛虫滋养体。思考题：溶组织阿米巴检查中的注意事项？,
