1、 博士研究生学位论文 论文题目： NY-ESO-1b多肽诱导的抗肝癌免疫及 FOXP3 在肝癌发生发展中的作用和机制研究 姓 名： 陈衍辉 学 号： 1111110225 院 （部）： 北京大学人民医院 专 业： 内科学（传染病） 导 师： 陈红松 研究员 副 导 师： 郭 远 副主任医师 完成时间：二 O 一四 年 四 月 博士研究生学位 论文 NY-ESO-1b 多肽诱导的抗肝癌免疫及 FOXP3 在肝癌发生 发展中的作用和机制研究 NY-ESO-1b peptide induced anti-hepatoma immunity and the role of FOXP3 in the p
2、athogenesis of hepatocellular carcinoma “十一五”科技重大专项（ NO. 2008ZX10002-019） “十二五”科技重大专项 （ No.2012ZX10002011-006） 国家自然科学基金（ No. 91029741; No. 81001072） 北京市自然科学基金（ No. 5112032） 研究生： 陈衍辉 导 师： 陈红松 研究员 副 导师： 郭 远 副主任医师 北京大学人民医院 北京大学肝病研究所 完成时间：二 O 一四 年 四 月 姓名： 陈衍辉 院系： 北京大学人民医院 学号： 1111110225 北京大学医学部学位论文原创性声明
3、和使用授权说明 原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任 何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品或成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律结果由本人承担。 论文作者签名： 日期： 年 月 日 学位论文使用授权说明 （必须装订在提交学校图书馆的印刷本） 本人完全了解北京大学医学部关于收集、保存、使用学位论文的规定，即： 按照学校要求提交学位论文的印刷本和电子版本； 学校有权保存学位论文的印刷本和电子版，并提供目录检索与阅览服务； 学校可以采用影印、缩印、数字化
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5、制研究 55 前 言 55 材料与方法 56 结 果 65 讨 论 77 第 三 部分 FOXP3基因多态性与乙型肝炎相关肝细胞癌的相关性研究 79 前 言 79 材料与方法 79 结 果 83 讨 论 89 结 论 91 参考文献 92 附 录 110 个人简历 113 致 谢 117 北京大学 2014 届博士研究生毕业论文 中文摘要 1 中 文 摘 要 NY-ESO-1b 多肽诱导的抗肝癌免疫及 FOXP3 在肝癌 发生发展中的作用和机制研究 研究生： 陈衍辉 导 师： 陈红松 ；副导师：郭远 北京大学人民医院，北京大学肝病研究所 ；内科学（传染病） 研究背景： 原发性肝癌（以下简称肝癌
6、）是一种恶性度高、治愈率低、预后差的常见恶性肿瘤 。 手术切除是目前 肝癌 主要的治疗手段，但手术 后的 高转移率和高复发率限制了肝癌治疗的远期疗效。因此， 近年来已经有研究者开始尝试对肝癌进行免疫治 疗 。 目前 ，已在肝癌 中鉴定出了 多个肿瘤 相关抗原（ tumor-associated antigen， TAA），可以制成多肽疫苗进行肝癌免疫治疗 1-2。文献报道 ， 食管鳞状细胞癌抗原 -1（ new york-esophageal-1， NY-ESO-1） 是具有高度免疫原性的 TAA3，其 基因 家族 中的 L 抗原基因 -1（ L antigen gene-1， LAGE-1）
7、与 NY-ESO-1 的氨基酸序列高度同源。 理论上 ， NY-ESO-1/LAGE-1 表达 阳性的肿瘤可以被 NY-ESO-1源性 多肽 疫苗 诱导的特异性 T细胞 靶向 杀伤 。 到 目前为止，尚未有关于应用 NY-ESO-1 多肽疫苗治疗肝癌的文献报道。 研究者发现 ， 肿瘤诱导的免疫抑制是负向调节肿瘤免疫应答的重要因素。 提高肿瘤免疫治疗的 有效 应答率， 需要 尽可能 地去除免疫微环境中的抑制因素。FOXP3 表达阳性的 调节性 T 细胞（ regulatory T cell， Treg）是肿瘤微环境中经典的免疫抑制因素。 然而 除 Treg 细胞外 ，多种肿瘤细胞也可以表达 FO
8、XP3。有研究 提示 FOXP3 基因 可能通过非 Treg细胞 依赖的其他机制来影响肿瘤 免疫 微环境4。我们的前期研究发现 ， FOXP3 在肝癌组织和肝癌细胞 株中高表达， 其作用和机制 需要 进一步研究 。此外， 单核苷酸多态性（ single nucleotide polymorphism，SNP） 是人基因组内最为广泛的遗传变异，它可能跟基因的差异性转录有关，进而影响基因的功能。 因此， FOXP3 基因的 SNP 与肝癌是否有关 值得研究 。 北京大学 2014 届博士研究生毕业论文 中文摘要 2 本研究将以肝癌为研究对象，进行以下三个方面的研究： 一、 开展基于NY-ESO-1
9、 多肽的肝癌治疗性疫苗的 特殊 I 期临床试验， 对 人类主要组织相容性抗原 -A2（ human leukocyte antigen-A2， HLA-A2） 限制性 NY-ESO-1 多 肽（ NY-ESO-1b， 157-165 位， SLLMWITQC）辅以佐剂 Montanide ISA-51VG 并联合全身性的 粒细胞 /巨噬细胞 -集落刺激因子（ granulocyte macrophage colony stimulating factor， GM-CSF）的疫苗制剂治疗 表达 NY-ESO-1/LAGE-1 的肝癌患者 的安全性和免疫效能进行评价； 二、 明确 FOXP3 基因
10、在肝癌中的表达情况，并探讨其在肝癌发生和发展中的作用和机制； 三、 分析 FOXP3 基因多态性与肝癌的关系。 第一部分 应用 NY-ESO-1b 多肽疫苗进行肝癌免疫治疗的特殊 I 期临床研究 研究目的： 本 研究将对 HLA-A2 限制性 NY-ESO-1多 肽（ NY-ESO-1b， 157-165位， SLLMWITQC）辅以佐剂 Montanide ISA-51VG 并联合全身性 的 GM-CSF的疫苗制剂治疗肝癌患者的安全性和免疫治疗效能进行评价。 材料和 方法： 本研究为特殊 I 期 临床试验 ， 共入组肝癌患者 20 例，随机分入 A 组（实验组）和 B 组（ 对照 组）， 各
11、 10 例。 A 组的疫苗组分为NY-ESO-1b/Montanide ISA-51VG， B 组的疫苗组分为 生理盐水 /Montanide ISA-51VG。疫苗 的 注射 计划 ： 周期 1（ 每周 接种 1 次 ； 连续 4 周 后 ，休息 2 周 ）+周期 2（ 重复 周期 1） 。 GM-CSF 的注射 计划： 周期 1（ 每 天接种 1 次 ，连续 6天后歇 1 天； 连续 4 周 后 ，休息 2 周 ） +周期 2（重复周期 1）。 疫苗注射期间 进行 疫苗 安全性 评估 。第 4 周和第 10 周 对 患者进行迟发 型 超敏反应（ delayed type hypersens
12、itivity， DTH）测试。 第 0 周、 5 周 、 11 周 、 20 周 、 28 周 、 40 周 和 52周 ， 通过 酶联免疫斑点试验（ enzyme linked immunospot assay， ELISPOT）检测肝癌患者 外周血 中 NY-ESO-1 特异性 CD8+ T 细胞 的 IFN-分泌 情况；通过 MHC-肽五聚体（ pentamer）法检测 NY-ESO-1 特异性 CD8+ T 细胞 的数量。第 0 周、 6周 和 12 周对 患者的 疾病状态进行 评估 。 结果： 疫苗安全性评价结果显示： 1 例（ 5%）患者出现疲劳， 17 例（ 85%）患者出现瘙痒， 5 例（ 25%）患者出现皮疹。在 A 组中， NY-ESO-1 阳性的肝癌
