1、医学细胞生物学实验徐志 浩 15294858210遗传 与基因工程教研室院系楼西 侧 一楼2016年光学显微镜 技术、细胞的形态观察 (1-26)培养 细胞的冻存与复苏 (P80)动物 细胞的原代培养 (P82)小 鼠骨髓染色体标本的制备及观察 (P53)细胞分裂 标本的制备及观察 (P65)医学细胞生物学实验一、 实验 目的1. 了解细胞培养的基本原理。2. 初步掌握细胞原代培养的基本方法。3. 掌握细胞培养过程中无菌操作的方法和注意事项。4. 了解培养中的动物细胞的一般形态。医学细胞生物学实验相关概念体外培养 ：是指在体外模拟体内的生理环境，培养从机体中取出的细胞、组织或器官，并使之生存和
2、生长的一系列操作。二、实验原理医学细胞生物学实验原代培养： 取自体内新鲜组织置于体外进行的首次原代培养。传代培养： 细胞在培养器皿中生长一定时间后，被接种到新的培养器皿中继续培养的过程。细胞培养 (cell culture) 组织培养器官培养 。无机盐、氨基酸、维生素、糖类等基本物质医学细胞生物学实验细胞培养的条件营养物质无菌无毒环境 ：体外培养首要条件，无菌并及时清除代谢产物。温度 ：人和哺乳动物的适宜温度 35-37气体 环境 ： O2(三羧酸循环 )和 CO2(5 , 调节 pH)pH： 7.2-7.4弱碱环境渗透压 ：适当的离子浓度环境尤其针对附着生长的细胞介质细胞培养的条件无菌环境温
3、度气体环境营养物质pH渗透压介质培养箱培养基和培养用液培养容器医学细胞生物学实验细胞培养的主要试剂基础培养基 ： RPMI 1640、 DMEM 、 MEM等。血清 （天然成分）：牛血清最常用、偶有用马 血清。抗生素 ： 100双抗母液，青霉素的含量为 10KU/ml， 链霉素的含量为 10mg/ml。消化液 ：常用 0.25胰蛋白酶，使细胞脱离组织或容器壁，用含血清培养液中止其活性 。清洗液 ：生理盐水或磷酸缓冲液。配制各种溶液均需使用高纯度的去离子水培养容器医学细胞生物学实验用于防止微生物进入组织、细胞或其它无菌范围的操作技术称为无菌操作技术。如外科手术需防止细菌进入伤口。在各种生物实验中
4、 ,为了防止微生物地生长和繁殖影响实验的进行 ,也要在无菌的环境下进行。无菌操作技术医学细胞生物学实验用品灭菌 -灭菌技术操作环节保持无菌灭菌技术医学细胞生物学实验灭菌技术 操作方法 适用范围 设备用品灭菌液擦拭 灭菌液擦拭 金属、玻璃、塑料器械，容器外壁。酒精、升汞等高温灼烧 火焰轻微灼烧 耐高温器械 -金属、玻璃器械用品，玻璃容器瓶口等。酒精灯等紫外线灭菌 紫外线照射 15-30min各种用品的简单灭菌。操作人员远离。紫外灯，穿透能力弱过滤除菌 过滤 有机溶液试剂 过滤装置和滤膜高温高压灭菌 121 ，压力 15磅 (1.05kg/cm)，灭菌 15-30 min。耐高温高压玻璃、金属、塑料器械用品，无机溶液等。高温高压灭菌锅
