1、杀虫剂离体(in vitro)筛选方法研究进展武汉工程大学巨修练 介绍内容一、传统的农药筛选方法二、杀虫剂离体筛选方法三、基因水平的杀虫剂离体筛选方法传统的农药筛选方法杀虫剂主要为活体筛选, 明显的不足是虫源一致性差、生长周期长、受外界条件影响大。 杀菌剂主要为离体筛选，仍为目前的主要筛选方法。但筛选效率有待于提高。除草剂主要为活体筛选，仍为目前的主要筛选方法。但筛选重复性差、周期长、效率低。杀虫剂离体筛选方法1.传统的离体筛选方法测定化合物对乙酰胆碱酯酶的抑制；对酪氨酸酶的抑制；对线粒体呼吸酶活性的影响等。2. 基于细胞水平的杀虫剂离体筛选一般选用昆虫的初孵幼虫细胞，然后进行一定时间的培养后
2、，用MTT发测定细胞存活率。MTT（溴化-3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑）法是二十 十 发展 的一 、 的体外 药物 性的测 方法。目前 用于杀虫剂离体筛选 。 用的基 活细胞线粒体 的 酸酶 currency1的溴化MTT为“currency1的不于水的甲（formazan），甲的生fifl 活细胞 。于甲的生fi ”酶测定 fl570nm的吸 （OD ）测定，因OD 测活细胞的，测定化合物的杀虫活性。3. fl杀虫剂离体 的用受体 体 合 法是一 ， ， ， 的离体生物活性测定方法，研究发 ， 用合 的 性 体 ， 测受体 体 合方 ，用于杀虫剂 的 筛选。体受体 用fl 用于GABAA受体的杀虫剂筛选 用的 有3HEBOB（1-(4-乙 基苯基)-4- 基-2,6,7-三 2.2.2），3HIvermectin B1a,，35STBPB（4- 基- 化 酸酯）， 用于 碱乙酰胆碱受体的3HIMI（1-（6-3- 甲基）-N- 基-唑-2- ）， 用于受体的3H Ryanodine等。3HEBOBOOOH3H3 目 离 目 定fi 合 测定抑制率(%) = 100(A-C)/ (A-B)A 表总 fi （dpm）；B 表非特异性 合 fi （dpm）；C 表待测样品 fi （dpm）。
