1、即用型大鼠 VEGF SP 免疫组化染色试剂盒产品编号：QD82178试剂的保存：短期于 4保存，长期于-20保存。工作原理血管内皮生长因子 (VEGF)是相对分子质量为(3445) 103 的同源二聚体糖蛋白。人体内可形成多种异构体可以特异性地促进血管内皮有丝分裂的因子。VEGF 是一种选择性促内皮细胞有丝分裂原,它能增加血管通透能力,促进内皮细胞增殖,对肿瘤的浸润和转移有重要影响。链霉亲和素是一种从链霉菌中提取的蛋白质，分子量 47000。同亲和素一样，对生物素分子有极高的亲和力，是一般抗原抗体亲和力的一百万倍。亲和素是一个碱性蛋白质（IP=10） ，经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和
2、素等电点接近中性，IP=6.06.5，对组织和细胞的非特异吸附很低，基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。根据研究，SP（StreptAvidin-Biotin Complex）大约可形成上百个左右的过氧化物酶和数十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。应用范围适用于免疫组织化学方法以显示待测抗原的分布，本试剂盒适用于常规石蜡包埋切片、冰冻切片，培养固定的细胞切片以及新鲜制备的血涂片、爬片等。试剂盒中内容1. 山羊血清封闭液：1ml(效价 1：10，临用前用 TBS 或 PBS 稀释 10 倍) 。用于组织切片的封闭。2. 二抗：1ml（效价 1：10，临用前用抗体稀释液稀释 10 倍)。亲和纯化
3、抗体，标记长臂生物素，生物素标记抗兔 IgG。3. SP：1ml（效价 1：10，临用前用 SP 稀释液稀释 10 倍） 。链酶亲和素-过氧化物酶复合物。用户自备试剂：1. 粘片剂 APES 或 Poly-L-Lysine。2. 0.01M PBS，0.01M 枸橼酸盐缓冲液。3. DAB 显色试剂盒。4. 免疫组化染色程序的选择：用户需根据抗原/抗体的特点确定程序，多数情况下要先比较各程序染色结果。石蜡切片染色程序:1. 载玻片防脱片剂处理:可选择 APES 或 Poly-Lysine。捞片后置烤箱58-60 30-60 分以使切片紧密粘附。2. 切片常规脱蜡至水。3. 30%H2O2 1
4、份+蒸馏水 10 份混合,室温 5-10 分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗 3 次。4. 酶消化程序:滴加复合消化液 5-10 分钟。蒸馏水洗 3 次。也可以使用0.1%的胰蛋白酶作消化液。热修复抗原:将切片浸入 0.01M 枸橼酸盐缓冲液（PH6.0 ）,电炉或微波炉加热至沸腾 后断电，间隔 5-10分钟后，反复 1-2 次。冷却后 PBS（pH7.2-7.6）洗涤 1-2 次。5. 滴加封闭液,室温 20 分钟。甩去多余液体, 不洗。6. 适当稀释的一抗，37 2 小时左右或 4过夜。PBS（pH7.2-7.6）洗2 分钟3 次。 （一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般
5、来说，阳性染色强度不够时，可提高一抗浓度和延长孵育时间；背景过高时，可降低一抗浓度和缩短孵育时间。 ）7. 加生物素化二抗,37 30 分钟。PBS（pH7.2-7.6）洗 2 分钟3 次。8. 滴加试剂 SP,3 7 30 分钟。PBS（pH7.2-7.6）洗 5 分钟4 次。9. DAB 显色:使用 DAB 显色试剂盒。取 1ml 蒸馏水,加试剂盒中 A,B,C试剂各 50ul,混匀后加至切片。室温显色 , 显微镜下观察显色反应，时间一般在 5-30 分钟之间。达到合适着色强度时（阳性较强，背景较低） ，即可终止反应（用蒸馏水洗涤切片） 。10. 苏木素轻度复染。脱水,透明,封片。显微镜观
6、察。注意事项：1. 如果染色背景过高，在 SP 反应之后，DAB 显色之前,用加有 0.010.02% TWEEN20 的 PBS（pH7.2-7.6）洗涤切片 4 次，单纯 PBS 洗2 次，然后 DAB 显色。警告：DAB 为可疑致癌物，请采取必要的防范措施。2. 热修复抗原可选 0.01M 枸橼酸盐缓冲液（PH6.0） ；也可以使用PBS、 TBS 等多种缓冲液。3. 脱蜡不彻底，容易出现非特异性背景染色，建议免疫组化切片脱蜡与常规 H.E 脱蜡分开。4. 如果将本试剂盒用于肝脏与肾脏等含内源性生物素含量丰富的组织切片，需要进行封闭的特殊处理。5. 在超过有效期的试剂盒中一种或多种试剂活性可能降低，因此不得使用过期的试剂盒，不同批号间的试剂盒也不能交叉混用。
