1、第十三章 莨菪烷类抗胆碱药物的分析,学习要求,掌握莨菪烷类抗胆碱药物的结构特征、理化性质与分析方法之间的关系,4,1,2,3,了解其他分析方法在莨菪烷类药物分析中的应用,第一节 莨菪烷类药物的结构和性质,颠茄生物碱的来源：从茄科植物，如颠茄、莨菪和曼陀罗等中提取的生物碱，由莨菪醇与不同有机酸所成的酯。,作用：具有对M受体阻断作用,（一）典型药物的结构 硫酸阿托品 氢溴酸东莨菪碱 （atropine sulfate） ( Scopolamine hydrobromide）,第一节 莨菪烷类药物的结构和性质,第一节 莨菪烷类药物的结构和性质,氢溴酸山莨菪碱( Anisodamine hydrobr
2、omide）,氢溴酸后马托品( Hormatropine hydrobromide）,第一节 莨菪烷类药物的结构和性质,樟柳碱 ( Anisodine ）,甲溴东莨菪碱( Methscopolamin Bromide ）,第一节 莨菪烷类药物的结构和性质,（二）主要化学性质1. 水解性 阿托品和东莨菪碱分子结构中，具有酯的结构，易水解。以阿托品为例，水解生成莨菪醇()和莨菪酸()，其反应结构式: 2. 碱性 阿托品和东莨菪碱结构中，五原脂环含有叔胺氮原子，较强的碱性，易于酸成盐，如阿托品pKb1为4.353. 旋光性 氢溴酸东莨菪碱含有不对称碳原子，左旋体比旋度为-24至-27。阿托品虽然含有
3、不对称碳原子，但外消旋化，无旋光性,第二节 鉴别反应,鉴别反应,1,2,3,4,5,托烷生物碱的鉴别反应（Vitaili反应）,与硫酸-重铬酸钾的反应,与生物碱显色剂和沉淀剂的反应,色谱法,光谱鉴别法,阿托品、莨菪碱等托烷类生物碱水解后生成莨菪酸，均可发生Vitaili反应,生成具有共轭结构的阴离子而显深紫色,与发烟硝酸共热，得到黄色三硝基衍生物，放冷，加醇制氢氧化钾少许，即脱羧,一、托烷生物碱的鉴别反应（Vitaili反应）,第二节 鉴别反应,第二节 鉴别反应,氢溴酸山莨菪碱的鉴别 取本品约10mg，加发烟硝酸5滴，置水浴上蒸干，得黄色残渣，放冷，加乙醇23滴湿润，加固体氢氧化钾一小粒，即显
4、深紫色。,第二节 鉴别反应,二、与硫酸-重铬酸钾的反应,三、与生物碱显色剂和沉淀剂的反应,阿托品氯化汞醇试液黄色沉淀东莨菪碱氯化汞醇白色复盐沉淀,氢溴酸东莨菪碱的鉴别,即生成白色沉淀（与阿托品及后马托品的区别）,取本品约10mg，加水1ml溶解后，置分液漏斗中,分取三氯甲烷液，置水浴上蒸干，残渣中加二氯化汞的乙醇溶液1.5ml,加氨试液使成碱性后，加三氯甲烷5ml，摇匀,第二节 鉴别反应（例2）,第二节 鉴别反应,表13-2 常用的生物碱沉淀试剂及反应Tab. 13-2 The precipitation reagents and reaction for testing alkaloids,
5、第二节 鉴别反应,四、光谱鉴别法,通过比较max、min或吸收光谱的一致性进行鉴别，也可比较其吸光度或吸收系数的比值来鉴别,绝大多数生物碱原料药都采用IR法鉴别,UV,IR,四、光谱鉴别法,氢溴酸东莨菪红外光谱The infrared spectrum of Scopolamine Hydrobromide,第二节 鉴别反应,第二节 鉴别反应c,色谱法一般用于已知生物碱的鉴别,TLC,HPLC,GC,PC,五、色谱法,Ch.P氢溴酸山莨菪碱注射液TLC鉴别 取本品1ml，置水浴上蒸干。取残渣与消旋山莨菪碱对照品，分别加甲醇制成10mg /ml的溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10l，
6、分别点于同一氧化铝（中性，活度-级）薄层板上，以三氯甲烷-无水乙醇（955）为展开剂，展开，晾干，喷以稀碘化铋钾试液-碘化钾碘试液（11）。供试品溶液所显主斑点位置和颜色，应与对照品溶液的主斑点相同。,第二节 鉴别反应,第三节 特殊杂质与检查,氢溴酸东莨菪碱中特殊杂质检查,氢溴酸东莨菪碱来源： 茄科植物颠茄、白曼陀罗、莨菪中等提取（我国，白曼陀罗的干燥品：洋金花中提取东莨菪碱，制成氢溴酸盐） 制备方法：,第三节 特殊杂质与检查,特殊杂质与检查,取本品0.50g，加水10ml溶解后，依法测定（附录 H），pH值应为4.05.5。强酸弱碱,取本品0.15g,加水5ml溶解后，在1520加高锰酸钾滴
7、定液(0.02mol/L)0.05ml，10分钟内红色不得完全消失。阿扑东莨菪碱、其他含有不饱和双键的有机物质,取本品0.10g ，加水2ml 溶解后，分成两等份：一份中加氨试液23滴，不得发生浑浊；另一份中加氢氧化钾试液数滴，只许发生瞬即消失的类白色浑浊。阿扑阿托品、颠茄碱,酸度,易氧化物,其他生物碱,一、酸性染料比色法的基本原理,UV,第四节 含量测定,应用示例,硫酸阿托品片的含量测定,精密量取对照品溶液和供试品溶液各2ml，分别置预先精密加入三氯甲烷10ml的分液漏斗中，各加溴甲酚绿溶液4ml，振摇提取后，静置使分层；分取三氯甲烷液，照紫外-可见分光光度法，在420nm波长处分别测定吸光
8、度，计算，即得。,第四节 含量测定,第四节 含量测定,有机试剂的选择,水分的影响,水相最佳pH值的选择,酸性染料的选择及其浓度,酸性染料中杂质的影响,酸性染料比色法的影响因素,水性最佳pH值：使得BH+和In-最多 酸性染料及其浓度：定量结合；对离子对的溶解性好；有较高的吸收度；足够量即可 有机溶剂的选择：提取效率高，氯仿最理想 水分的影响：影响结果，脱水剂或滤纸除去水分 酸性染料中的有色杂质：有机溶剂萃取除去,第四节 含量测定,第四节 含量测定,测定法 精密量取对照品溶液和供试品溶液各2ml，分别置预先精密加入三氯甲烷10ml的分液漏斗中，各加溴甲酚绿2.0ml，振摇提取两分钟后，静止分层，
9、分取澄清的三氯甲烷液，在420nm波长处分别测定吸光度，计算，并将结果与1.027相乘，即得本品（C17H23NO3）2H2SO4H2O相当标示量的百分含量。,百分标示量,式中Ax、AS分别为供试品和对照品溶液的吸光度； CS为对照品溶液的浓度mg/ml； m为样品质量；为平均片重。1.027为（C17H23NO3）2H2SO4H2O与（C17H23NO3）2H2SO4H2O的质量换算系数。,Fig. 13-2 The UV-spectrum of atropine sulfate with BTB ions1.离子对 2.染料空白（对照品平行测定，空白吸收可被扣除）3.阿托品（水溶液在420
10、nm附近无吸收）,第四节 含量测定,一、非水溶液滴定法,当HA酸性较强时，反应不能定量完成，必须除去或降低HA的酸性，使反应顺利地完成。,游离碱类盐,被置换出的弱酸,第四节 含量测定,供试品,+,冰醋酸,10ml30ml,若供试品为氢卤酸盐再加5%醋酸汞的冰醋酸液3ml5ml,结果,HClO4滴定,空白试验校正,指示剂,碱性溶液pKb10，冰醋酸中滴定突跃不明显，需加入醋酐，使碱性增强，突跃更明显,第四节 含量测定,适用范围广,分离模式多样,检测手段多样灵敏,选择和专属性强,分离速度快,重复性好,HPLC优点,各国药典中采用HPLC法对莨菪类生物碱的含量和有关物质进行直接分析测定的比例不断增加
11、。,第四节 含量测定,色谱保留常常较弱，从而影响到它们的含量或有关物质HPLC测定的专属性和准确度。,采用离子对高效液相色谱法，可以改善它们的色谱保留行为，并实现准确测定。,在反相液相色谱条件下呈离子状态的药物，如有机碱类、有机酸类等,调整流动相的pH，抑制它们的解离，以改变色谱保留行为。但并不都能获得满意的结果。,第四节 含量测定,了解药物在体内数量与质量的变化,获得药代参数和药物转化、代谢的方式、途径等信息,有助于对所研究的药物作出综合评价,概念：研究生物机体中药物及其代谢物和内源性物质的质与量变化规律的分析方法学,体内药物分析,通过分析手段,第五节 体内药物分析,去除蛋白质,缀合物的水解
12、,液-液提取,固相提取,化学衍生化,1,2,3,4,5,生物样品组成复杂，干扰杂质多，一般需经分离、纯化，排除干扰后才能进行测定,第五节 体内药物分析,存在问题,解决办法,第五节 体内药物分析,复杂生物样品中微量药物定量测定专属有效的方法,色谱与光谱联用技术,集色谱的高分离效能和光谱的高专属性与高灵敏度于一体,特点,作用,药物代谢物定性鉴定和含量测定常用的方法,第五节 体内药物分析,第五节 体内药物分析,人血浆和皮下脂肪组织中东莨菪碱的测定,介绍莨菪烷类药物的液-质联用测定法,介绍生物样品在体取样的微透析技术,例,实验步骤如下,第五节 体内药物分析,FIRST,SECOND,THIRD,FOU
13、RTH,受试者静脉滴注氢溴酸东莨菪碱,15min后分不同时间点取血,精密量取0.2ml血浆并加入内标,加入蛋白沉淀剂并调节pH值,FIFTH,涡旋混匀后通过固相萃取,SIXTH,进样,血浆中东莨菪碱的测定,第五节 体内药物分析,皮下脂肪中东莨菪碱的测定,微透析探针包埋在皮下脂肪组织的间隙内，每间隔20分钟获取一次微透析样品,微透析设备,探针,High-performance liquid chromatography-Mass spectrometry HPLC/MS单级质谱HPLC-tandem Mass spectrometry HPLC-MS/MS多级质谱,第五节 体内药物分析,第五节 体内药物分析,Thank You!,
