1、BoBs在临床中的应用,讲课人xxx,遗传病诊断技术发展趋势,单基因疾病 基因组疾病 染色体疾病 亚带、带、 区、 臂 1bp 1Kb 2Mb 6Mb 100Mb 整条、整组染色体,单基因病诊断高技术平台,基因组疾病诊断高技术平台,染色体病诊断高技术平台,DNA测序,CMA、Bobs,细胞核型+FISH,技术解决临床问题,孕前、产前（孕妇、胎儿）、流产、新生儿、儿童、成人,应用领域：,单一病 目标病排除 所有病诊断,全自动生化和免疫分析系统串联质谱,PART 1,生化遗传,G显带高分辨染色体核型分析Q带、C带、银染羊水细胞原位培养,PART 2,细胞遗传,FISHPCRBoBsCMADNA测序
2、,PART 3,分子遗传,实验室构架,染色体病检测方法,BACs-on-Beads技术,BACs-on-Beads技术：是基于液态芯片的分析技术，是将生物素标记过的 样本DNA和参考DNA同时杂交到固化有特异的BACs DNA 探针的微球上，使用Luminex系统进行微球分类和荧光信号 检测，通过BoBsoft软件进行结果判读，从而检测染色体 的数目异常和微缺失。,检测原理,BACs: 细菌人工染色体,Beads: 聚苯乙烯微球,Luminex 200,检测原理,样本,参考,所有分析均使用男、女参考DNA 正常结果: 比值约为1.0,检测原理,BoBsoft分析软件结果界面阈值S/F值和S/M
3、值大于阈值或小于阈值与女性参考比：红色曲线与男性参考比：蓝色曲线,9,红点：样本DNA/女性参考DNA; 蓝点：样本DNA/男性参考DNAa: 正常比值; b:异常比值；c: 男性；d: 女性；e: 21染色体缺失；f: 21-三体,产前BoBs-检测结果判读,检测原理,检测结果： arr(1-22)x2,(XN)x1， arr(1-20,22)x2,(XN)x1,(21)x3 arr (1-15,17-22)x2,(XY)x1,(16)x3检测结果描述： Prenatal BoBs检测结果未发现胎儿13,18,21号和X、Y染色体的非整倍体性，未发现Prader-Willi/Angelman
4、等染色体微缺失综合征片段缺失的异常。 Prenatal BoBs检测结果显示胎儿为21号染色体三体患者，未发现胎儿13,18号和X、Y染色体的非整倍体性，未发现Prader-Willi/Angelman等染色体微缺失综合征片段缺失的异常。 Karyolite BoBs结果显示男性胎儿，为16号染色体三体患者。,检测结果,BACs-on-Beads流程图,产前BoBs：非整倍体13,18, 21, X, Y 和9 种微缺失/微重复综合征核型BoBs： 所有染色体的非整倍体检测（122，X，Y）,14,“检测常见非整倍体和有严重危害的、有明显细胞遗传学预测价值的微缺失”,13三体18三体21三体性
5、染色体,产前BoBs-检测疾病,13/18/21/X/Y非整倍体+9种微缺失,微缺失综合征的出生后诊断到产前诊断,微缺失综合征的出生后诊断相对容易，但几无治疗价值。因此，产前诊断的临床意义重大,9种微缺失,9种微缺失,9种微缺失,Smith-Magenis综合征(SMS) -17p11.2,G3P3，该患儿为长女，系足月顺产，出生后无抢救史，无癫痫发作史，喂养正常，婴儿期无明显暴躁迹象,女性患儿15岁，身高1.44米，智力低下，语言能力弱，能回答姓名等简单问题，容易兴奋，在诊室内又唱又跳面部异常:外眦上斜,巨舌,外吐睡眠:现在每天仅仅睡眠2-3小时，时睡时醒手:双手有咬伤伤痕。暴躁时抓人打人,
6、自己抓头发、抓耳,指甲损伤严重。,Wolf-Hirschhorn综合征(WHS),羊水染色体核型分析,绝大多数的微缺失综合征在宫内发育期间基本无异常表现，宫内发育迟缓，羊水过多/过少，特征性的脏器畸形是部分微缺失综合征的唯一表现目前临床上作为微缺失综合征预测高危的产前因素有：NT/NB增厚且排除了胎儿非整倍体异常特征性的胎儿畸形表现（主要为心脏畸形）胎儿宫内发育迟缓胎儿宫内姿态异常羊水异常（过多或过少），尤其伴有FGR的胎儿父母之一有明确微缺失综合征或其他染色体结构异常的有染色体病家族史的,BoBs检测微缺失综合征的适用人群,关注微缺失综合征,产前染色体非整倍体的快速诊断已经广泛应用于临床，但
7、是仅仅关注染色体非整倍体是远远不够的。微缺失综合征值得关注：染色体微缺失综合征是由微小的、经传统细胞遗传学分析难以发现的染色体畸变而导致的具有复杂临床表现的遗传性疾病畸变小于5Mb，是基因组疾病中最常见的类型常见临床表型：生长发育异常 、智力发育迟缓、特殊面容、内脏器官畸形、内分泌异常、精神行为改变等我国出生人口数目巨大，微缺失综合征患儿大多严重残疾，但可相对长期存活，并大多有生育能力，会给家庭和社会造成巨大的经济负担,液态芯片检测，灵敏度、特异性高；检测范围大：产前BoBs可同时检测5种染色体数目异常和9种微缺失，核型BoBs可同时检测23对染色体的数目异常；检测通量高：一次最多检测92个样
8、本，自动读取数据，单个样本只需40秒-2 分钟；检测周期短：可用于产前分子的快速诊断。,技术优势,遗传检测中的应用,产前诊断,BACs-on-Beads,产前快速分子诊断,流产物检测/PGS,25,单次流产 流产胎儿组织 核型BoBs 2次及以上流产 夫妻双方外周血高分辨染色体核型分析检测 胎儿流产组织 FISH、核型BoBs、SNP ArrayB超检查有不明原因结构异常的胎儿 选择SNP Array,流产病因诊断-临床咨询选择,流产物检测,PGS(胚胎植入前遗传学筛查）,PGS是胚胎植入前遗传学筛查（Preimplantation Genetic Screening），在胚胎植入着床之前，利
9、用PGS对早期胚胎进行染色体数目和结构异常的检测，主要通过检测胚胎的23对染色体结构、数目，通过比对来分析胚胎是否有遗传物质异常。染色体在细胞分裂之前才形成，因此PGS会在受精卵形成胚胎（培育第3天），或形成囊胎（培育第5天）后进行筛查。染色体有问题的胚胎很难自然发育到成熟，一般常见的情况是会在第5、6个月的停育流产。即便胚胎能够存活到自然生产，未来生育出来的婴儿也极有可能发生健康问题。比如，智力低下、头小、眼距宽、耳位低、肌张力低下或亢进、外生殖器发育不良、癫痫、肛门闭锁、发育迟缓、持续性新生儿黄疸及明显的青斑、心脏畸形、肾脏畸形、虹膜或视网膜缺损等等。,附录1,附录2：各项技术的特点比较分析（1）,29,各项技术特点分析（2）,谢 谢！,
