1、一般性故障排除,2019/6/6,于保生,记录:完成分析的维修数据,运行记录本,Date,11/2/94,12/1/94,12/4/94,check valves,pump seals,new column,要保留记录,HPLC 色谱柱的测试对新拿到的色谱柱进行等度洗脱的记录:记录理论塔板数, N, 同时有:色谱柱的长度和直径化合物的和 k 值流动相和固定相流动相流速样品量温度峰对称性.包括, 酚和胺 为测试抗酸、碱性.记录:柱压完成分析维修数据,2019/6/6,于保生,关心照顾HPLC 避免出现故障,2019/6/6,于保生,保留时间和峰面积的重复性,可能造成保留时间的故障:流动相组成变化
2、溶剂输送系统故障色谱柱平衡问题色谱柱故障色谱柱箱温度,可能造成峰面积问题的原因:进样器故障泵流路故障检测器平衡故障,峰保留时间精密度:有柱箱: 0.3%无柱箱: 0.7%峰面积精密度:1.5%,2019/6/6,于保生,一般泵故障,夹带空气流动相脱气使泵初始化阀密封件活塞泄漏,2019/6/6,于保生,手动进样阀,色谱柱故障不合适的注射体积或型号阀堵塞进样口泄漏样品携留交叉口泄漏,2019/6/6,于保生,自动进样器,2019/6/6,于保生,一般性检测器故障,2019/6/6,于保生,检测器性能,2019/6/6,于保生,数据速度 20 Hz响应时间 0.1 secPW 0.1 min,收集
3、40 pts,收集5 pts,收集100 pts,收集12 pts,检测器时间常数- 太高,2019/6/6,于保生,太高,太低,时间常数,时间 (min.),丢失信息,信息过多,检测器时间常数- 太低,2019/6/6,于保生,压力故障,压力过高,压力过低,压力波动,在柱进口处塞子毛细管松动检查进样器到针座的毛细管使系统在半途停下来一直到找到堵塞处,确定流动相是正确的拧紧松动的接头或更换接头更换计量泵密封圈更换或清洗堵塞的溶剂进样塞,脱气并使泵初始化检查松动或不适当密封的接头检查计量泵密封圈检查溶剂进样塞,排除压力故障,2019/6/6,于保生,基线波动,故障来自检测器还是泵?你怎样说明?,
4、故障:色谱仪基线波动。,2019/6/6,于保生,混合故障,故障:一种UV-吸收的流动相和非UV吸收的流动相动态混合。有UV-吸收的残余流动相。泵噪音引起。解决办法:增加一个混合器. 缺点是死体积增加。,2019/6/6,于保生,检测器 - 热交换器,保证流通池恒温提高检测器性能。,2019/6/6,于保生,基线噪音,可能的原因:流通池脏检测器灯坏泵出现周期性的脉冲检测器的温度影响空气泡进入检测器,回答问题:你改变了流动相成分吗?你改变了波长吗?你的仪器最后一次使用什么流动相?你有混溶性的问题吗?你的溶剂脏了吗?,2019/6/6,于保生,色谱柱维修/再生 - 物理性堵塞,装上色谱柱/不装色谱
5、柱时检查柱压降如果柱两端反压高，把色谱柱倒过来用流动相冲洗10-20个柱体积，再测试反压如果有沉淀, (即聚集的蛋白质，细胞物质，聚合物）用适当可溶解的溶剂清洗堵塞物，如0.1% TFA / 80% 乙腈, 6M胍， HCl, THF, HFIP如果不成功，更换塞子,2019/6/6,于保生,进样口塞子,柱进样口塞子,压缩性密封圈,柱体,母接头,公接头,磨损套不要让柱床干了不要触摸色谱柱- 柱体热了会把填料挤出来不要过紧,2019/6/6,于保生,小心地卸下柱塞子做流动相匀浆用一个 Pasteur 管, 把固定相堆放到柱顶部,装一个新的塞子到堆放固定相柱的顶部，重新装上柱接头,老塞子,新塞子,
6、更换柱塞子,2019/6/6,于保生,色谱柱维修/再生 - 用化学方法改变色谱柱,由于键合相的水解或硅胶溶解使柱填料的改变是不可逆的由于污染而造成柱填料的改变一般是可逆的，可用适当的溶剂冲洗掉梯度洗脱方式（水 - 强溶剂）常常十分有效低pH流动相，如. 0.1% TFA 或 0.01M H3PO4，很有效提高温度也有帮助 (60-80).,2019/6/6,于保生,基线漂移,梯度洗脱温度不稳定 (示差折光检测器)流动相污染流动相在柱中没有平衡系统有污染物流失,2019/6/6,于保生,鬼峰,2019/6/6,于保生,峰形- 双峰,柱中有死体积塞子部分被堵只有一个双峰- 共流出化合物,2019/
7、6/6,于保生,峰形- 加宽峰,所有的峰加宽柱效降低柱死体积进样量大流动相粘度高.某些峰加宽前一个样品的洗脱峰分子量大样品 - 蛋白质或聚合物,2019/6/6,于保生,0,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10 11,柱外,体积,10 L,20 L,时间（分钟）,2.1 x 150 mm,F = 0.2 mL / min.,(进样1L),柱外体积,在进样器和色谱柱以及色谱柱和检测器之间使用短而内径细的管子所有的管件一定要使用匹配的接头使用小体积的检测池进样体积要小,2019/6/6,于保生,峰形- 拖尾,原因:一些峰拖尾次要的 - 保留效应残留硅醇基作用在大峰上有小峰洗脱出来所有的峰拖尾超柱效应在柱进口处污染物增加重金属色谱柱不好,2019/6/6,于保生,色谱峰形-负峰,原因:样品的吸光度小于流动相当样品溶剂通过色谱柱时平衡的扰动对示差折光检测器来说是正常的,
