1、实验三,细菌分布检查与消毒灭菌实验,实验目的,1.学会不同部位细菌的检查方法。2.掌握常用的消毒灭菌方法及其仪器的使用。 3.了解药敏实验的结果及意义。,实验内容与方法,一、细菌的分布检查1.空气中细菌检查2.咽喉部细菌的检查二、消毒灭菌的实验1.皮肤消毒实验2.热力灭菌实验3.紫外线杀菌实验4.常用消毒灭菌器及除菌滤器介绍三、药物敏感实验 常用消毒器械的介绍,一、细菌的分布检查,1.空气中细菌的检查 材料:琼脂平板 方法:将制作好的琼脂平板敞开放置在空气中5min -10min,后盖上皿盖，然后分别做好标记，37度温箱内培养18-24小时后观察结果。 意义：检测环境达标与否,2.咽喉部细菌的
2、检查,(1)咽喉拭子法：材料：血平皿、咽拭子 方法：1. 用干净棉签咽部取材； 2. 将取得样本以分区划线形式接种在血平皿上； 3. 37 温箱内孵育24小时后观察结果。,(2)咳碟法,取血平板一个，将盖打开，置于距口腔10厘米处，用力咳嗽数次，然后盖好，置37度温箱培养18-24小时观察结果。,二、消毒灭菌的实验,1.皮肤消毒试验（操作）每两名学生用一个琼脂平板，先在平板底部用蜡笔画分5格，标明序号。两人用未消毒手指分别在1、2格内涂布。然后用2%碘酒消毒手指后再分别涂抹3、4格，余下第5格作为空白对照。盖上皿盖，置37度温箱培养24小时观察结果。,皮肤消毒实验 材料：琼脂平板、2.5%碘酒
3、、75%酒精棉球 方法： 37温箱内培养24小时 意义：比较皮肤消毒前后细菌分布情况,消毒前,消毒后,2.热力灭菌实验（示教）,取4支肉汤培养基标以1、2、3、4号1、2号接种大肠埃希菌（无芽孢菌）3号接种枯草芽胞杆菌（芽胞菌）4号管不接种细菌作对照。将其中1、3号同时放入100度水浴内煮沸5分钟。然后将4支管同时置37度温箱培养24小时观察结果。,3.紫外线杀菌实验 材料：琼脂平板、细菌培养物、灭菌长方形纸片方法：取普通琼脂平板一个，密集画线接种大肠埃希菌。用无菌镊子把灭菌长方形纸片贴于平板表面中央。打开平皿盖的2/3，置于紫外灯下距离约20-30厘米处照射30分钟，除去纸片，盖好平皿盖，置
4、37度温箱培养24小时观察结果。原理：损伤DNA，阻止DNA的复制,4.常用消毒灭菌器及除菌滤器介绍,高压蒸汽灭菌器 干烤箱（干热灭菌器） 滤器,三、药物敏感实验（纸片法）,方法：1. 取琼脂平板一个用记号笔在平板底部标记贴抗生素纸片的位置。 2. 点燃酒精灯。用棉签蘸取菌液，在琼脂平板上密集而均匀地涂布。 3. 待培养基稍干后，无菌操作用镊子分别取抗生素纸片按标记位置贴在涂布细菌的培养基表面，各纸片距离大致相等。纸片放置后不要再挪动，因挪动将影响实验结果。 4.把平板倒放在 37温箱内培养 1824 小时后取出观察结果，测定抑菌环的大小。,三、药物敏感实验（纸片法）,抑菌环的形成：琼脂平板内
5、含有大量的水分，纸片上的药物具有水溶性。因此可逐渐扩散到周围的培养基中，其浓度将随与纸片距离的增加而逐渐降低，从而形成了以纸片为中心，药物浓度逐渐减小的浓度剃度。当药物浓度降低到某一程度时，细菌足以抵抗其抑菌杀菌作用；在此范围以外，细菌将正常生长，而在此范围以内则无细菌生长。以此界线为边缘所形成的抑菌杀菌的区域称为抑菌环。,三、药物敏感实验（纸片法）,测量抑菌环的大小，初步判定并比较细菌对不同药物的敏感情况，判断药物的敏感度，一般以敏感、中度敏感、耐药三个等级报告结果。,药 敏 实 验,材料：琼脂平板、细菌培养物、药敏纸片 方法：1. 挑取少量细菌培养物密集划线； 2. 夹取青霉素及庆大霉素药敏片各一片， 置于琼脂平板表面（注意间隔）； 3. 37 温箱内孵育24小时后观察结果。 意义：为临床针对性合理用药提供依据,红,链,药敏试验,
