1、兔瘟基因工程疫苗的研制及应用前景,2018/9/26,1,王芳15805161626国家兔产业技术体系江苏省农业科学院兽医研究所,第七届（2017）中国兔业发展大会,内 容,兔病毒性出血症（俗称兔瘟）是一种由兔出血症病毒引起的、以急性、高度传染性、大面积死亡为特征的兔传染病。病死亡率高达70% - 90%。对养兔业危害很大，必需进行免疫预防国际兽医局（OIE）将该病列为B类传染 病，我国农业部53号令颁布为二类疫病,研究背景,兔病毒性出血症,病原：兔出血症病毒,一种正链RNA杯状病毒。由于至今尚未建立适合于病毒繁殖的敏感细胞株或理想生长条件，故病毒的体外培养尚不能进行（疫苗研制面临的困境）在自
2、然环境中，病毒有非常强的抵抗力和稳定性，在用乙醚、氯仿和胰蛋白酶处理后，病毒的感染性并不减弱。所以有利于兔瘟的传播,研究背景,国内兔病毒性出血症灭活疫苗兔病毒性出血症、多杀性巴氏杆菌病二联灭活疫苗兔病毒性出血症、多杀性巴氏杆菌病、产气荚膜梭菌病（A型）三联灭活疫苗国外荷兰英特威公司的（MSD）粘液瘤-兔病毒性出血症疫苗（Nobivac Myxo-RHD）硕腾（Zoetis）公司（CYLAP RCD VACCINE）的兔病毒性出血症疫苗西班牙NOVARVILAP公司的兔病毒性出血症疫苗，西班牙Hipra 公司的兔病毒性出血症疫苗（CUNIPRAVAC RHD），BIOVTA公司的兔病毒性出血症疫
3、苗等,国内、外主要采用组织灭活疫苗,预防措施,研究背景,非免疫兔的数量有限，疫苗抗原生产得不到保证，有时造成国内兔瘟疫苗供不应求的局面不利于规模化生产及产品质量控制生物安全性：存在潜在的散毒危险因此，对疫苗生产企业要求有单独的强毒攻毒动物房及组织灭活苗生产车间,组织灭活疫苗的缺点,研究背景,疫苗株（BAC-VP60株）的来源,从2006年开始，进行重组病毒构建工作利用杆状病毒表达系统成功表达了RHDV VP60在电子显微镜下观察，表达的重组衣壳蛋白可自我装配成类病毒样粒子(VLPs)，即为疫苗抗原,疫苗特点,生产疫苗的细胞及工艺,疫苗特点,用昆虫细胞培养生产疫苗抗原可进行静置、转瓶半悬浮培养和
4、反应器悬浮培养悬浮培养 （HA 11024）可大规模生产，质量易于控制,2018/9/26,9,安全性试验 对不同品种家兔的超剂量接种安全试验 对怀孕母兔安全试验 最小使用日龄家兔安全试验 对肉兔生产性能的影响,质量研究,疫苗特点,2018/9/26,10,近期效力试验,质量研究,疫苗特点,2018/9/26,11,免疫期试验,质量研究,疫苗特点,免疫产生期短 7日可以产生免疫保护。,2018/9/26,12,免疫期试验,质量研究,疫苗特点,免疫持续期长：免疫后可以产生7个月的免疫保护。,2018/9/26,13,对流行毒株保护试验：免疫后可抵抗近几年不同地区分离的RHDV 强毒的攻击，具有较
5、好的保护作用。,实验室试制疫苗免疫保护试验结果,质量研究,疫苗特点,使用6批中试产品在浙江桐乡、余姚、山东青岛、江苏盐城和南京等地兔场进行临床试验临床试验共免疫26600只，其中断奶兔23600只、2月龄兔1800只、孕兔1200只临床试验结果显示：疫苗安全、有效,疫苗研究,临床试验研究,2018/9/26,15,临床试验研究,疫苗研究,免疫期效力检验结果,2018/9/26,16,生产性能测定试验结果,临床试验研究,疫苗研究,2018/9/26,17,2011年7月获得国家发明专利,2013年5月获得安全证书,2017年2月获得国家一类新兽药证书,2018/9/26,18,贵州福斯特生物科技
6、有限公司 山东华宏生物工程有限公司,从组织灭活苗到亚单位苗的飞跃不用非免兔作为原材料不再需要强毒攻击生产抗原不再会有生物安全的危险不再会有灭活不全的危险高效的生产工艺，可大规模生产,疫苗特点,免疫效力最好的亚单位动物疫苗,勃林格公司猪圆环疫苗是预防的非急性致死性疾病，免疫效力试验是生产性能的提升作为评价标准本疫苗是预防兔的烈性传染病，免疫效力试验是通过强毒攻击，以攻毒后保护率作为评价标准,2018/9/26,21,RHDV特异性抗体IgG的检测特异性抗体IgG的检测,RHDV抗体IgM的检测,2018/9/26,22,血清中IL-2的检测,血清中IL-4的检测,2018/9/26,23,血清中IFN-的检测,血凝抑制效价检测,2018/9/26,24,国内兔年饲养量6-7亿只毛兔肉兔种兔商品兔獭兔种兔商品兔每年至少需3亿头份（不包括加强免疫的） 进行联苗的开发 市场前景广阔,兔瘟抗原、抗体检测试纸条,敬请各位专家、同行批评指正！衷 心 感 谢 CARS-44 资助！感谢团队成员十年的奋斗！,薛家宾王 芳范志宇胡 波魏后军宋艳华仇汝龙,
