1、营养与食品卫生学首都医科大学 营养与食品卫生学学系2014.4实验一 食品中维生素 C的测定营养与食品卫生学首都医科大学 一、实验目的食品中的总抗坏血酸包括还原型和脱氢型两种形式。当食物放置时间较长或经过烹调处理后，其中有相当一部分抗坏血酸转变为脱氢型，脱氢型的抗坏血酸仍有 85作用的维生素 C活性，因此对这类食物常常测定总抗坏血酸。营养与食品卫生学首都医科大学 二、测定方法2,4二硝基苯肼法 样品中还原型抗坏血酸经活性碳氧化为脱氢型抗坏血酸，在一定条件下，脱氢型抗坏血酸与 2,4二硝基苯肼作用生成红色脎，脎的生成量与总抗坏血酸含量成正比，将脎溶解在硫酸中进行比色测定。营养与食品卫生学首都医科
2、大学 （一） 绘制标准曲线 抗坏血酸标准液（ 1mg/ml）：溶解 100mg纯抗坏血酸于 100ml 1草酸溶液中。 标准曲线绘制：加 1g活性炭于 50ml标准溶液中，摇动1min，过滤。取 10ml滤液放入 500ml容量瓶中，加5.0g硫脲，用 1草酸溶液稀释至刻度，抗坏血酸浓度为 20g/ml 。取 10、 20、 40、 60、 80ml稀释液，分别放入 7个 100ml容量瓶中，用 1硫脲溶液稀释至刻度，使最后稀释液中抗坏血酸的浓度分别为 2、 4、 8、 12、 16、 20g/ml 。 营养与食品卫生学首都医科大学 按样品测定步骤形成脎并比色。 以吸光度为纵坐标，以抗坏血酸浓
3、度（g/ml ）为横坐标绘制标准曲线。营养与食品卫生学首都医科大学 （二） 样品操作步骤 1.样品制备：称取 100g鲜样和 100g 2草酸溶液，倒入打碎机中打成匀浆，取 10 40g匀浆（含 1 2mg抗坏血酸）倒入 100ml容量瓶中，用 1草酸溶液稀释至刻度，混匀。营养与食品卫生学首都医科大学 2.氧化处理：取 25ml上述滤液，加入 0.5g活性炭，振摇 1min，离心 5min，取上清夜过滤。取10ml此氧化提取液，加入 10ml 2硫脲溶液，混匀。营养与食品卫生学首都医科大学 3.成色反应：（ 1）于 3个试管中各加入 4ml稀释液。一个试管作为空白，在其余试管中加入 1.0ml
4、2 2， 4二硝基苯肼溶液，将所有试管放入（ 370.5 ） 恒温箱或水浴中，保温 1小时。营养与食品卫生学首都医科大学 （ 2） 1小时后取出，除空白管外，将所有试管放入冰水中。空白管取出后使其冷却到室温，然后加入 1.0ml 2 2， 4二硝基苯肼溶液，在室温中放置 10 15min后放入冰水中。其余步骤同样品。 营养与食品卫生学首都医科大学 （ 3） 85硫酸处理：当试管放入冰水后，向每一试管中加入 5ml 85硫酸，滴加时间至少需要 1min，需边加边摇动试管。将试管自冰水中取出，在室温放置 30min后比色。（ 4）比色：用 1cm比色杯，以空白液调零点，于 500nm波长测吸光值。，
