1、什么是检测？什么是监测？ 如何在养猪生产中开展血清学检测？ 北京爱德士元亨生物科技有限公司 吴俊,温氏讲座,对温氏而言最重要的是： 产业的可持续发展！,1.创造价值； 2.符合企业和员工的利益； 3.选择适合自身的发展之路。,有人认为：干了规模化， 做了产业化就可以实现价值。,错了！,规模化发展过程中出现的诸多问题,人难请、急需人才的培养、人难留。猪病多。猪难养。群体健康动态的变化、效益低下。污染严重、环保有压力。对大型养猪企业认识的严重不足：规模化决不是传统规模猪场规模、经验的累加。缺乏从养猪生产体系上来规划、建设和管理一个需要安全、高效和环保的综合系统。,养猪业管理的系统思考人管人,当你管
2、理3-20个人的时候：靠的是你的能力；当你管理20-50个人的时候：可以依靠教育和培训；当你管理50个以上员工的时候：需要良好的企业文化；当你管理更多更多的员工、更多猪场的时候：则需要系统。社会资源管理系统；环境管理系统；人力资源管理系统；生产资料采购管理系统；财务管理系统；疾控管理系统；目标和过程管理系统；遗传育种管理系统、愿景激励管理系统等,养猪业发展的系统思考发展思路,当企业养殖规模不断增大、企业建设快速发展时； 解决发展方向、开拓、思路的问题； 解决快速发展中的计划、基础建设问题； 最重要的是 - 必须同时解决稳定、增效的盈利能 力问题。,养猪业管理的管理思考三种模式,导向式管理：考核
3、式管理：经营式管理：,创造价值,有创造价值的意愿只是一方面。具备和学习创造价值的能力才是最重要的。价值是靠养猪企业中的“所有的人”创造的。企业的文化、老板的价值取向又决定了“所有的人”创造价值的能力。,1. 系统能力：2. 对人的尊重：责任和快乐,了解猪群和环境和谐的重要性；认识猪群福利管理的意义；建立善以待猪的养猪文化（人猪和谐）；协调群体和个体之间的社会关系；挖掘猪群生产潜力及产品的“场情”价值；建立贯彻执行管理目的的体系。,养猪业最重要的需求,现在中国养猪业最欠缺的是：技术经济和系统能力两大领域的宏观突破力和把控力。,如何在养猪生产流程中 建立疾病的技术控制体系,2.生物安全体系,3.猪
4、只免疫力及抗应激,4.预防接种,5.抗生素治疗,疾病防控的合理体系,1.环境及隔离,同样是养猪!差别咋这么大呢？,免疫接种次数：种猪:70次以上商品猪:10次以上,我们应该醒悟了！,中国是抗生素生产大国，也是抗生素使用大国：年产抗生素原料大约21万吨，出口3万吨给世界人民，其余18万吨留给自己用（包括医疗与农业使用），人均年消费量138克左右（美国13克，欧洲7国仅10克）畜牧业中抗生素的大量无序使用：占全球抗生素饲料添加剂使用量的50%左右。,是猪场管理者不够智慧或不想把生产搞好吗？,其实大家都在做最容易做到的、最经济的选择！（免疫药物、瘦肉精、有毒食品、生产的种种问题）问题的答案在领导者、
5、人的思想和态度。,猪场管理和操守最重要的是什么？,“四化”猪场操作-标准化 标准化操作，无论是谁都按照标准进行。猪场管理-模块化饲料营养、生物安全、疾病防控、后备猪管理、产房管理、猪场方案-固定化 有利于正常生产、可控、猪场产品-品牌化 品牌化的产品，确保以上方案有效。,猪场必须要有一系列严格执行的16条管理方案,列出工作安排的日志，记录需采取的每一步行动。生产工艺流程及主要生产技术指标。生物安全管理（流行病学特点、疾病安全、生产环境清洁和消毒方案）。猪群福利管理（猪的行为、卫生条件、采食、饮水、休息条件、通风、温湿度、光照、噪声、人猪和谐、应激等）。饲料生产及各类猪群饲养给食投料管理。各个阶
6、段猪只的饲养管理（目标与管理要点、管理程序、饲养管理）。种猪选育（选育目标、核心场选育、扩繁场选育、商品场选育）。猪的人工受精。疫苗接种方案。清洁和消毒接种器材、手术器械、针头、接生器具的方案。标准化疾病治疗和处理方案。抗寄生虫方案。抗生素保健治疗方案。实验室检(监)测方案。食品安全控制。数据统计及报表管理。,做成技术管理手册,落实创新的技术通讯,猪场管理者能把这些因素考虑周全并做好吗？,员工所处的环境、精神和身体是否处于完全健康的状态？猪群福利健康管理的观念？猪的生理行为、猪的采食、清洁卫生条件、清洁充足的自由饮水、休息条件、自由空间、通风和新鲜的空气、温度和湿度、光照、噪声等等；生物安全、
7、群体与群体关系、个体与个体关系；应激、保健；减轻个体疾苦、科学淘汰非正常个体；真正试着去了解猪只“内部和外部”的关联。,成功的养猪事业 就是在正确的时间做正确的事,时刻发现“猪的信号”,什么是猪的信号？,外部信号：生产性能指标、体况肥瘦状态、残疾行为障碍（腿的状态）、冷热反应、排泄物、分泌物、喘气咳嗽、死胎流产、泌乳行为、猪只转运、生产操作情况、进攻性行为等。内部信号：分子生物学指标、病理学变化、血液学指标、血清学指标等。信号获取的手段：现场及临床观察、剖检及病理实验、生产性能测定、微机管理系统和实验室检测。,活动性兴奋性攻击行为空气通风情况猪的警示声音分娩去势咬架公猪的叫声体温变化特别需要关
8、注的群体体况排泄区与平均值的偏差腹泻信号怀孕母猪的运动性皮肤坏死群体一致性呕吐物断奶尿液乳房炎症产道炎症尿道炎症,细分管理列表填写情况群体优势等级排序粪便情况饲料状态采食量采食区授精过程寄养行为种猪肢蹄问题探究行为猪只的处理损伤程度指示或标记猪肌肉注射免疫及免疫管理仔猪采食感染死亡率成功的因素值得注意的观察点配种过程返情及流产非生产天数仔猪挤压,空间不足猪群的构成泌乳期抓猪赶猪光照躺卧行为母体免疫平均水平僵猪本能行为新生仔猪腹泻发情病原体猪的路径电气控制安静平和引进的猪只称重消毒过程驱虫检查温暖-寒冷的信号员工交流会议追踪,饲养饲喂猪舍隔离转向行为呼吸器官繁殖器官呼吸次数做出有效的反应猪舍小气
9、候风险期风险的群体疾病背景检查皮肤母猪刺激饱腹感应激呼叫站立乳房治疗效果生产报表的收集,管理中的“外部信号”观察点,每天12项健康猪群的观察信号,吃料、体温38-39.5度、排便：皮毛：皮毛光亮、不粗乱、体表无寄生虫、无红点或红斑。睡觉：侧卧非趴卧、自然而舒适。饮水：不出现长时间饮水现象；饮水器位置合适；流量合理。尿液：呈较透明的褐黄色；无红色或其它异常颜色。外阴：阴户无白色或脓性分泌物；干净而色泽自然。咳嗽：缓和的咳嗽、间歇性轻微咳嗽、站立用力干咳等，需做进一步的诊断和对应措施。呼吸：呼吸均匀正常；无腹式呼吸。喷嚏：是否连续喷嚏、流鼻血、脓性鼻涕。眼睛：明亮、无结膜炎、无眼屎、无泪斑。肢蹄：
10、无跛行、无外伤；未见蹄裂。乳房：呈杯锥状、充实富有弹性；无硬块、组织增生和肿大。,猪群管理的首要方向,风险发生的位置：任何引发疾病和应激的地点（分娩舍、保育舍、群体移动的猪舍）。风险期：猪只最容易出现问题的时刻，或者在以往猪只出现问题的时刻，特别是几种风险叠加的时期需要特别的警惕（如断奶、转猪、分娩、免疫注射等）。风险群体：出现问题概率高的群体（批次），所以风险群体是一个很好的控制点，如果风险群体表现很好，则整个猪群就可能表现非常好的生产性能稳定性（公猪、后备种猪、保育猪）。,风险因素,风险群体： 新引入猪群的母猪 初产母猪 缺乏运动的怀孕母猪 消瘦或过度肥胖的母猪 刚分娩和初生重偏轻的仔猪（
11、1公斤） 在分娩舍很少吃教槽料的仔猪 断奶仔猪风险期： 断奶时 饲养员更换 饲料更换 分娩 转猪或后备猪进入生产群 各种注射,母猪前腔静脉采血,ELISA血清学检测是检（监）测猪只“内部信号”快速高效的手段,ELISA血清学检测是检（监）测猪只“内部信号”快速高效的手段,疾病控制新思路,加强饲养管理：提高人和组织的效率。加强生物安全：特别关注的是种猪群体、移动和流动的群体；核心是外部阻止和内部消除；加强健康检（监）测、引种检测（抗原和抗体）、隔离措施、闭群、群体驯化。群体逐步净化（控制）CSF、PR。科学免疫预防：接种CSF、PR、PRRS、FMD、PCV2等，通过血清学方法进行监控和免疫管理
12、。药物预防，控制继发感染。,技术中心,生产技术部,检测中心,生 产 部,生产计划制定与安排,生产问题协调与处理,月季年绩效分析管理,常规检测与净化,制定疾病防控管理策略,数据处理与分析,人工受精管理,风险群体检测,风险期检测,流行病学调查,生产工艺流程,生产技术指标,饲料生产及投料管理,生物安全管理落实,配怀阶段饲养管理,分娩阶段饲养管理,生长肥育阶段管理,保育阶段饲养管理,食品安全管理,产品试验与评估,产品成本及综合分析,场长,人员教育和培训,指导、监督和检查,紧急防疫方案、措施,组织的定位和坚韧不拔的方向！,保持盈利能力和群体的稳定性！,什么是检测？,什么是监测？,报告内容,如何在养猪生产
13、中开展重要疾病的血清学检测,什么是检（监）测？,易感群,感染群,免疫群,疾病发生的通常模式,根据流行病学的质量作用定律：R=ROS/N R:有效重现率 RO:基础重现率 S:感染的动物数 N:总的动物数R1 发生疾病 R1 疾病减少R1 稳定,驯化和免疫,免疫丢失,年龄差异外源引进,感染,康复,疾病致死,耐过死亡,相比较病原不断的感染，我们更加担心传染过程中病原的变化。,猪个体的免疫力组成及相互关系,第一道防线：物理保护屏障（皮肤、黏膜、消化道、呼吸道、产道、尿道、耳道等各个管道上皮组织及分泌物）第二道防线：非特异性免疫系统 1.组胺 炎症 阻止致病因子的扩散 免疫因子（细胞介素） 2. 肝脏
14、产生补充系统的保护性蛋白 3. 血液中的白细胞(吞噬细胞单核细胞)第三道防线：特异性免疫系统 对入侵的每一个特定抗原（病原体）产生特定的反应。,36,群体免疫力（Herd immunity）,群体免疫力在不同的猪群中表现出差异性，与个体差异、年龄结构、生产流程、群体病原种类和带毒状况等有密切关联。有条件使环境变好了，疾病容易控制，使病原不发生疾病。如果环境改变不了，疾病如何控制？,群体免疫力（Herd immunity）,个体免疫学已经逐渐显现出它在控制群发病上的局限性。在实际猪群中，尤其是经过疫苗免疫的猪群中，当有免疫力的猪只数量达到一定量的时候，群体中未免疫的猪只也不会发生该疫病的感染。自
15、主免疫力强的猪只越多- 群体免疫力越强。,群体免疫力的阈值,从群体免疫力的理论来看：要想在一个猪群中建立起对特定病原的有效免疫预防，必须达到一定数量的合格免疫比例（群体免疫临界值）。了解群体的免疫状况比追求过高的免疫密度更为重要。对部分特定病原， 要降低阳性率和“净化”， 要了解其活动规律，建立稳定的病原状态。以上的问题仅仅通过兽医经验、肉眼、病理变化是无法正确解读的。,阶段一母源抗体血清学-免疫接种降低或者/和清除潜在的危险因素,阶段二早期检测和及时处理,最后阶段（减少二次、并发感染、以及其它的潜在感染，避免发生慢性病，等等）,临床感染,感染初始,临床症状,降低生产参数 死亡率增加,实验室检
16、测在临床实践中的意义,检测和监测,一. 概念检测：指采用实验室方法对样品（包括全血、血清、淋巴液、白细胞、组织器官、等）进行病毒、病毒抗体及相关免疫指标检测；包括监测、检疫检验、自愿咨询检测、临床诊断、血液及血液制品筛查工作中的检测。,检测的分类,病原学检测 检测感染野毒 抗体检测 检测感染 免疫监控,被动检测,主动检测,检测和监测,监测：是指定期或不定期、连续、系统地收集各类群体中相关疾病的相关因素的分布资料，对这些资料进行综合分析，为制定预防控制策略和措施提供及时可靠的信息和依据，并对预防控制措施进行效果评价。,检测和监测,二. 监测与防疫和免疫的关系指导防疫和免疫的方向；检验防疫和免疫的
17、效果；,三. 监测的原则：以整群动物为目标，把握整体的状况,正态分布了解整体状况采取适当措施,监测的目的一,提前了解，疾病预警了解疾病在场内的污染状况，制定相应策略；提前了解免疫抗体的高低及整齐度，及时纠正；,免疫程序的评估与安排1）了解母源抗体的消长情况； 2） 疫苗接种的效果 - 免疫抗体监控；,监测的目的二,抗体是怎样消退和产生的?,二次免疫,首次免疫,制订针对性的疾病管理方案1） 猪瘟抗体水平的分群、淘汰方案； 2） 伪狂犬病净化方案； 3） 后备猪进群方案； 4） 公猪采精方案； 5） PRRSV稳定监测方案； 6） 猪群健康状况分析；,监测的目的三,血清学检测 是进行抗原抗体检测最
18、为成熟、简单和方便的工具！,体外实验 (实验室内的反应)抗原抗体反应；可以检测到血清、卵黄、牛奶等中的抗原或抗体；将血清学实验用于疾病诊断和控制是由Jones在1913年开创的 (将试管凝集实验用于鸡白痢)；已经成为疾病确诊和疾病控制不可或缺的工具；根据不同的检测目的选择不同的检测方法，并与病史、免疫史等资料结合进行分析。,血清学检测,常用的血清学检测技术,血清中和试验/病毒中和试验 (SNT/VNT)血凝抑制实验 (HI)琼脂凝胶扩散实验 (AGP)快速血清平板凝集实验酶联免疫吸附试验(ELISA),快速,大量样品,敏感性,简单,血清学检测方法比较,敏感性? (假阴性 无法及时移出感染源)从
19、已知感染群中检测“真正阳性”的能力特异性? (假阳性，损失健康动物)从已知阴性群中检测“真正阴性”的能力,为什么使用 “ELISA”?,敏感性和特异性上有较好的平衡； 同时检测大量样品；操作和数据分析自动化；不同实验室之间的交流。,如何进行ELISA监测？,科学取样选择可靠的产品并进行规范的操作，获 得准确的检验结果密切结合临床资料，作出正确的结果分 析,可使用的样品,IDEXX ELISA实验可以应用多种样品 血清 全血, 组织,血块 肉汁(猪),ELISA监测的使用,科学取样的原则,选对对象，正确分群（肉猪分日龄，母猪分胎次），血清学监控应当首先考虑采样对象；样品质量；合适的样品数目；随机
20、取样，代表群体；,血清样品的质量要求,样品的质量对最终的测定结果具有显著的影响；避免应用高度溶血的样品(深红色)或严重脂血样品；血清样品在2-7C冷藏不可超过3-5天，或在 -20C冷冻不超过30 天；避免反复冻融，建议不超过3-5个循环；,样本数量,合适的样本大小可以通过检查群体内以往滴定数据获得最佳提示结果变异越大，样本应该越多，以代表整群状况。根据以往的实践和统计学经验，23-30份以上的样本被认为是合理的。随机采样,血清学监测的使用,取样的要求,血清学监测-样品和取样,样本量 （假定阴性群采样建议95%可信度）,血清学监测-样品和取样,样本量 （预计阳性群采样建议95%可信度）,分析结
21、果者同时应该了解临床资料 和读懂血清学检测结果,临床资料包括：日龄、母猪胎次免疫史临床表现，有无不稳定的因素以往检测情况等。,为什么要进行抗体的检测？,对未免疫的疾病进行抗体测定就可直接了解疾病的感染率；根据抗体检测的状况，确定抗原检测的方向；有些方法可以直接区分感染和免疫抗体（PRV-gE）；有些感染抗体往往具备水平更高、抗稀释能力强；感染可以造成抗体水平不正常-偏离基准线；,规模化猪场如何制定检（监）测计划？,群体的基础性调查；依据调查结果：制定每季度的检（监）测计划；制定与群体管理相关的检测方案。,1200头基础母猪场调查样本设计,公猪群采样数量可以按实际数量100%采样,2400头基础
22、母猪场调查样本设计,公猪群采样数量可以按实际数量100%采样,规模化猪场如何制定监测计划？,群体的基础性调查；依据调查结果：制定每季度的检（监）测计划；制定与群体管理相关的检测方案。,1200头基础母猪场调查样本设计,公猪群采样数量可以按实际数量100%采样,当猪瘟抗体有问题时，增加抗原的检测。,建立猪场分析系统,血清学检测：PRRSV、PRVCSF、M.hyo等,临床症状情况：发病的阶段、病理变化、临床表现等,生产性能情况：种猪繁殖性能、死亡率、饲料转化率等,其它疾病伴发或继发情况：发生时间、疾病种类、临床表现等等,免疫情况：免疫的疫苗种类、疫苗的品牌、免疫程序、免疫反应等,（1）同一个猪场
23、在不同时间的分析；,（2）不同的猪场在相同时间的分析；,一分场,二分场,1月,7月,6月,5月,4月,3月,2月,三分场,保健情况：保健品种类、药物的品牌、使用程序,月份,场次,总结：血清学检测是沟通内外的桥梁,阻断外部传播 消除内部传播,疫苗免疫程序用药程序,流行病学调查 疾病早期诊断 疫苗免疫评估 疾病控制和根除,血清学检测可以提供确定的信息，提高对现场状况的把握度,性能可靠的试剂盒是检测的质量保证,农场在进行ELISA检测时，通常只有试剂盒是要 靠外部得到，因此谨慎选择性能可靠的产品是非 常重要的。每次疾病的流行都催生了大量的疫苗和试剂盒， 由于质量参差不齐，往往加剧了疾病的危害和误 导
24、了判断。,检测操作过程中冲击性破坏的影响？,被检样品中的成分复杂，包被物的筛选、纯化技术？,试剂盒批次之间、每块板、每个孔，如何减少检测结果的差异化？,不同包被物在反应板的附着性不同？,Quality control system,精准性、不漏检,稳定性,重复性,如何在养猪生产中 开展重要疾病的血清学检测,当前的生产，完全不关注风险动物,健康动物,当前绝大多数猪场的健康控制策略,健康动物,感染动物,感染动物,感染动物,亚健康,健康动物,策略 1：剔除内部的感染源,控制与清除的策略,疾病控制与清除,感染动物,健康动物,疾病控制与清除,感染动物,健康动物,疾病控制,健康动物,策略 2: 阻止外部感
25、染源,控制与清除的策略,在引入前进行检测，发现风险动物,健康动物,风险动物,只引进安全无风险的猪只,健康动物,当然还要确保有效免疫，以防疏漏,健康动物,猪场常见病疫苗免疫效果,策略 3: 后备猪的驯化,控制与清除的策略,后备猪在引入生产群前进行不少于90天的驯化， 经检测稳定后方可进入生产群体,生产群体,生产群体,后备猪在引入生产群前进行不少于90天的驯化， 经检测稳定后方可进入生产群体,建立猪场分析系统,血清学检测：PRRSV、PRVCSF、M.hyo等,临床症状情况：发病的阶段、病理变化、临床表现等,生产性能情况：种猪繁殖性能、死亡率、饲料转化率等,其它疾病伴发或继发情况：发生时间、疾病种
26、类、临床表现等等,免疫情况：免疫的疫苗种类、疫苗的品牌、免疫程序、免疫反应等,（1）同一个猪场在不同时间的分析；,（2）不同的猪场在相同时间的分析；,一分场,二分场,1月,7月,6月,5月,4月,3月,2月,三分场,保健情况：保健品种类、药物的品牌、使用程序,月份,场次,猪群疾病控制的首要目标,PRRS：掌握监测、干预和保持稳定状态的规律，建立“与蓝共舞”的控制机制。CSF：淘汰带毒猪，抗体水平检测符合不同群体和阶段性的要求。PR：净化。,规模化猪场如何制定检（监）测计划？,群体的基础性调查；依据调查结果：制定每季度的检（监）测计划；制定与群体管理相关的检测方案。,制定与群体管理相关的检测方案
27、,后备猪驯致方案；PRRS检测控制方案；群体净化、淘汰方案。,疫病检（监）测与综合防治,2. 生产过程监测：- 对管理变化、员工异动；猪舍温湿度变化、猪群生产流程、饲料异常；采食量变化、健康状况、残死数量、病例剖检；疫苗保存、免疫；药物预防治疗情况；对以上情况进行详尽记载和分析，为疫病的诊断和防治提供长期的依据。,疫病检（监）测与综合防治,3. 临床监测：流行病学调查：流行学调查内容包括猪群疫病发生及死亡情况、临床症状；有无传染性、传播流行的特点和规律；不同季节、地区、日龄、饲养管理方式与相关疾病的密切关系。临床观察：每种疾病都有症状，且具有特异性，观察疫病的示病症状、特征性症状、固有症状，有
28、重要的诊断意义。病理剖检：根据剖检病变并结合流行病学调查和临床检查，通过检查器官的颜色、气味、性质的变化、不同的病理变化可给不同疫病的诊断以提示。,疫病检（监）测与综合防治,4. 综合防治：近年来猪病呈病原复杂化状态，随着免疫抑制性疾病的增加，继发和混合感染情况普遍发生；必须区别那些是元凶、帮凶和常在病原；在疾病诊断中，传统的诊断技术面临挑战，单一的某种诊断方法也不能确定疾病的类型，必须通过血清学、病原学、临床诊断、病理剖检和饲养管理等多种手段结合，有针对性的采取对应措施；任何一种检测手段都有局限性，疾病综合评定的原则是根据流行病学调查、临床观察、病理剖检、病原检测、药物治疗，特别是管理因素等
29、各方面信息进行综合分析，避免主因不明、疫苗和药物的滥用。猪病的防控要建立检（监）测预警机制；规模化养猪过程中的经验：只有加强基础性管理工作、改善饲养环境卫生、改进工艺流程、减少应激、提高机体非特异性免疫力、确保生物安全是猪病防治的重中之重。在检（监）测的基础上有针对性进行免疫等综合防治措施，才能高效的防止猪群疫病的发生。,1. 有些病原存在又未必是发病的根源；2. 有些病原存在，是发病的原因而未必能被检测到；3. 有些急性病患病猪，未出现特征临床症状便死亡了；4. 有些疾病病理症状并非十分典型；5. 有些疾病是管理不到位而引起条件性疾病的发生；6. 目前的PRRS、PRDC都与以上情况相关。,
30、精准检测，信心保证！,2010年蓝耳病（PRRS）控制方法的现状,免疫的猪群；非免疫的猪群；多点式生产 - 实行分段式免疫的猪群；自主驯化的猪群；采用综合方法控制。,2010年规模化猪场蓝耳抗体检测报表,2010年蓝耳病血清学检测中的主要表现,PRRS的血清学检测面临复杂状况：抗体阳性率高，却能够稳定生产。抗体阴性率高，却出现损失。如何评估PRRS疫苗免疫？抗体阳性率高一定就有“风险”吗？抗体滴度高是否表示被保护？在群体中抗体阴性的猪只是否没有风险？免疫猪群或非免疫猪群如何进行PRRSV稳定状态的分析？,PRRSV生物学特性,有囊膜单股正链RNA病毒；包括8 个开放阅读框架（ORF）,可编码6
31、 种结构蛋白和2 种非结构蛋白。根据PRRSV基因的变异程度分为：以LV（ Lelystad virus ）株为代表的欧洲基因型（简称A亚群）；以VR-2332为代表的美洲基因型（简称B亚群），两者均有典型的免疫抑制特性。目前是否出现新的亚群？PRRSV的组织分布：（1）新生仔猪仅在肺脏中检出；（2）在仔猪的脾脏中含量最高，依次为肾脏、肺脏、淋巴结、心脏和中枢神经系统；（3）种猪和肥育猪体内病毒主要位于肺、肾脏等内脏器官和脾、淋巴结等免疫器官以及其他组织的巨噬细胞中。,PRRSV,非结构蛋白,结构蛋白,PRRSV,Enveloped ss RNA virus 单股正链包囊RNA病毒Arteri
32、viridae familyArterivirus genus 动脉炎病毒属Replication in macrophages 在巨噬细胞中复制，对巨噬细胞有专嗜性Prolonged viremia 长期的病毒血症Persistent infection 持续感染- 毒力差异：SHFV: 100% mortality within a week 一星期内100%的死亡率。LDV: asymptomatic infection with extremely high viremia 无症状感染极高的病毒血症,PRRS的传播途径,猪是唯一的易感动物：精液可以带毒 通过交配或人工授精传播；30%是
33、经过人员和车辆传播；10%是通过引进猪传播的；空气传播可能是重要的传播途径，但只是邻近猪舍间的传播，猪场间的传播可能性不大，PRRSV感染猪体的途径很多，包括口腔、鼻腔、肌肉、腹腔和生殖道。传染常常发生于猪只之间的密切接触。猪只直接接触极易造成PRRSV的传播，因此猪场内和猪场间猪只的移动成为最主要的传播方式。虽然存在非猪宿主（比如禽类），但他们在PRRSV流行病学中的作用尚不清楚。从母猪到仔猪的传播，主要是在子宫中或出生后发生，或者是易感仔猪与感染猪混群，使病毒持续循环传播。,PRRS的流行病学,各种品种、不同年龄的猪只均可感染，但以怀孕母猪和幼龄仔猪最易感；主要传播途径是接触感染、空气传播
34、和精液传播，也可通过胎盘垂直传播；易感猪可经口、鼻腔、肌肉、腹腔、静脉和子宫内接种传播；持续性感染：是PRRS流行病学的重要特征，PRRSV可在感染猪体内存在很长时间；PRRS是以怀孕母猪的繁殖障碍及各种年龄猪（特别是仔猪）的呼吸道疾病为特征。,为什么PRRSV容易变异？,作为RNA病毒，PRRSV的基因在合成时容易出现内在性错误，可出现点突变、删除、添加和毒株间基因重组，因此PRRSV的基因容易发生变异，不同分离株之间基因组存在广泛变异。依据血清学及基因序列分析将PRRSV分为两种基本基因型，以LV型为代表的欧洲型和以VR2332为代表的北美洲型，两种的核苷酸序列同源性约为60。通过序列分析
35、显示，美洲型毒株间的变异明显大于欧洲型毒株间的变异。PRRSV在猪体内持续感染过程中，会出现病毒亚种或亚群。国外的研究表明：同一基因型的PRRSV分离毒株之间存在明显的序列差异，特别是在基因组ORF1a的nsp1b和nsp2，ORF3和ORF5的变异性很大。我国已发现nsp2的变异主要表现在氨基酸的缺失，此次发现的高致病性蓝耳病就是由nsp2缺失30个氨基酸的变异株引起的。,PRRSV免疫学特性,垂直感染：PRRSV对巨噬细胞的亲嗜性，被PRRSV感染的猪肺泡巨噬细胞可能会通过胎盘进入胎儿体内，病毒感染胎儿。增殖作用：用有PRRS抗体的病毒培养物接种怀孕中后期母猪，病毒在胎儿中的复制显著增加；
36、反映在临床上就是刚断奶的仔猪呼吸道疾病症状比大的架子猪严重的多。 早期抗体的影响：对病毒的增殖有依赖性增强作用，在中和抗体存在的情况下，PRRSV在细胞上的复制能力反而提高10-100倍。（断奶仔猪、断奶母猪、后备猪）。4. 持续感染：PRRSV在有循环抗体存在的情况下，依然可见到长期的病毒血症，这是由于早期产生的是非中和抗体，中和抗体产生缓慢并且要高滴度的中和抗体才能消除病毒，因此出现持续感染。,什么是高致病性PRRS？,高致病性猪蓝耳病是由猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株引起的一种急性高致死性传染病。仔猪发病率可达100、死亡率可达50以上；母猪流产率可达30以上；育肥猪也可发病死亡是其特征。
37、,发生PRRS的风险群体的风险群体,引入的外来猪只（带有不同与生产群体的毒株）；PRRSV活跃阶段的公猪；驯致不够、移动的后备种猪；猪只机体抵抗力降低（环境、持续应激、分娩应激、免疫抑制等）和病原微生物感染压力增大的群体；,后备,初配,泌乳期,妊娠后期,断奶-配种,妊娠中期,公猪,种猪PRRSV抗体检测波动时期,5 6 7 8 9周,断奶,10 13 14 18 22 26,仔培/保育阶段,转群至育肥舍,育肥阶段,商品猪PRRSV抗体检测波动时期,猪蓝耳病抗体阳性率分析,B1-B10：20-35日龄保育猪B11-B15：36-45日龄保育猪B16-B25：46-55日龄保育猪B26-B31：5
38、6-65日龄仔猪,生产母猪各阶段检测结果,保育阶段检测结果,一分场,二分场,三分场,四分场,五分场,一分场,二分场,三分场,四分场,五分场,猪感染PRRSV后最早出现（大约7天）的是针对N蛋白的抗体，而且该抗体可持续存在180天以上，因此N蛋白作为PRRSV抗体的检测抗原，无论早期还是晚期都具有重要的诊断学意义，特别适合于评估流动的猪群PRRSV的稳定性和风险： （1）可以监控猪群的感染和稳定状态； （2）群体病毒循环规律； （3）引进后备公母猪的稳定状态； （4）及时发现问题和干预。,PRRS抗体检测在生产中的应用,1. 引入“哨兵猪”或针对移动的群体,2. 定期群体普查,猪蓝耳病抗体阳性率
39、分析,B1-B10：20-35日龄保育猪B11-B15：36-45日龄保育猪B16-B25：46-55日龄保育猪B26-B31：56-65日龄仔猪,生产母猪各阶段检测结果,3. 猪群稳定性分析,稳定猪场,不稳定猪场,稳定猪场,不稳定猪场,猪群稳定性分析,4. 公猪及后备猪进群检测,猪兰耳病抗体检测：检测样品共100份，阳性样品95份，阴性样品5份，怀疑样本0份，阳性率达95.0%。,后备猪进群前检测：,猪伪狂犬病gE抗体检测：检测样品共100份，阳性样品8份，阴性样品92份，怀疑样本0份，阳性率达8.0%。,后备猪进群前检测：,猪瘟抗体检测：检测样品共102份，阳性样品76份，阴性样品16份，
40、可疑样品9份，阳性率76%。,后备猪进群前检测：,5. PRRS控制实例,某集团：后备猪群: 4月龄进行驯致工作(利用感染母猪和感染保育猪血清,稀释后人工感染后备母猪), 6月龄左右使用PRRS X3 0.4S/P2.5 为驯致成功,若S/P2.5后备猪淘汰；母猪群(采用免疫和非免疫2种方法进行PRRS干预)； 免疫PRRS疫苗(BI)后检测PRRS抗体,判断标准为: PRRS X3 0.4S/P2.0， CV40%为免疫合格群。 非免疫群: PRRS X3 0.4S/P2.0为稳定群,S/P2.5暂停引入.公猪群: PRRS X3 S/P2.5 暂停使用精液,1个月后再次检测,若S/P2.5
41、则使用精液。引种检测: 从阴性场引种 PRRS S/P0.4 从阳性场引种 PRRS S/P2.0,如何使用IDEXX PRRS 试剂盒,某农场：母猪群: 用哈兽研PRRS灭活苗免疫 PRRS X3 0.4S/P2.0 为稳定群。公猪群: PRRS X3 S/P2.5 暂停使用精液,1个月后再次检测,若S/P2.5则使用精液。商品肉猪群:使用上海海利PRRS弱毒疫苗免疫,使用PRRS X3 检测 0.4S/P2.0为合格群。,如何使用IDEXX PRRS 试剂盒,某猪场：后备猪群: 4月龄进行驯致工作(利用感染母猪和感染保育猪血清,稀释后人工感染后备母猪), 6月龄左右使用PRRS X3: 0
42、.4S/P3.0 为驯致成功,若S/P3.0后备猪淘汰；其它猪群不进行检测,公猪精液PCR检测病原。,如何使用IDEXX PRRS 试剂盒,IDEXX PRRS X3抗体检测试剂盒基于以核衣壳蛋白（N 蛋白） 作为主要包被抗原的意义,N蛋白具有稳定的氨基酸含量：ORF7编码核衣壳（N ）蛋白，分子量为13.8- 15KD，具有一个糖基化位点，但属非糖基化蛋白；各类毒株（美洲株、欧洲株和其他分离株）分别含有123-128个氨基酸。N蛋白在PRRS病毒粒子中含量最高（约占病毒蛋白总量的20-40%），是不同毒株PRRSV 主要结构蛋白之一，具有较高的免疫原性。N蛋白有6个疏水区及至少5个抗原决定族
43、，其中既有对所有PRRSV毒株保守的共同决定族，又有北美洲各型和欧洲各型的特异决定族。N蛋白保守性高；针对不同PRRSV毒株，具有群特异性。,快速检测：猪感染PRRSV后最早出现（大约7天）的是针对N蛋白的抗体，而且该抗体可持续存在180天以上，因此N蛋白作为PRRSV抗体的检测抗原，无论早期还是晚期都具有重要的诊断学意义，特别适合于评估流动的猪群PRRSV的稳定性和风险： （1）可以监控猪群的感染和稳定状态； （2）群体病毒循环规律； （3）引进后备公母猪的稳定状态； （4）及时发现问题和干预。包被物N蛋白的选择：IDEXX PRRS X3能够同时用于检测欧洲株和美洲株，对不同的PRRS毒株（经典毒株或高致病变异株）具有相同水平的检测敏感度，重复性好，应用广泛。,IDEXX PRRS X3抗体检测试剂盒基于以核衣壳蛋白（N 蛋白） 作为主要包被抗原的意义,
