1、第五章食用菌,第一节：制种技术,教学目标、重点、难点,教学目的：熟练使用制种用品、用具、设备、设施进行制种生产。本节重点：食用菌制种条件，制种工具的使用。,一、食用菌菌种的概念与级别,(一)、菌种的概念菌种是指经人工培养并可供进一步繁殖或栽培使用的食用菌菌丝体，常常包括供菌丝体生长的基质在内，共同组成繁殖材料。菌种是食用菌生产的首要条件，菌种性状的优劣直接影响到生产的成败。常言道：“有收无收在于种（种子），多收少收在于种（栽培）”,（二）菌种的级别,1.一级种（母种）,2.二级种（原种）,3.三级种（栽培种）,不可再扩,母种、原种和栽培种,二、制种常用的设备与用品,（一）、灭菌设备1、手提式高
2、压灭菌锅,使用压力：1.5kg/c灭菌时间：2530min对象：玻璃器皿、母种培养基、无菌水等。可用高压饭锅替代，但灭菌时间延长至40min,2、卧式高压灭菌锅,使用压力：1.5kg/c灭菌时间：1.52h对象：原种、栽培种培养基的灭菌使用方便，但造价高，一般菇农用常压灭菌灶。,3、常压灭菌灶,使用温度：100-105灭菌时间：维持810h对象：原种、栽培种培养基的灭菌,（二）、制种容器,（三）、接种设备与工具,1、接种设备（1）、超净工作台（局部净化设备空，气过滤除菌）,（2）、接种箱,2、接种工具,接种针、接种环、接种刀、接种铲、镊子等,（四）、 菌种培养设备,放置接种后各级菌种，并提供适
3、宜温度和通气条件，使菌丝生长良好的专用设备,1、恒温培养箱,根据需要使温度恒定在一定范围内,一般用于培养斜面试管和少部分原种。,2、培养室,培养架：以操作方便为宜,宽0.71.2米，层间40cm调温：电炉、红外线、暖气管、门窗、抽风机测温：干湿球温度计 照明：避免使用蓝光 灭菌：紫外灯,三、菌种的制作,(一)母种的制作1、母种培养基,PDA培养基：去皮马铃薯200克，葡萄糖20克，琼脂20克，水1000亳升，PH值自然。适合以一般母种的培养,. PDA加富培养基：去皮马铃薯200克，麦麸100克，葡萄糖20克，琼脂20克，水1000亳升，PH值自然。适合母种的复壮培养。. PDA综合培养基：去
4、皮马铃薯200克，葡萄糖20克，琼脂20克，磷酸二氢钾3克，硫酸镁1.5克，维生素B1510mg，水1000亳升，PH值自然。适合草菇、灵芝、猴头菇、茯苓母种的培养。 . 母种保藏培养基：在PDA培养基中加10g蛋白胨。,粉状,条状,2、 母种培养基的制备,PDA培养基：去皮马铃薯200g、蔗糖20g、琼脂15-20g、水1000ml,马铃薯去皮，切片，称取200克，沸水煮20-30分钟，过滤，取滤汁添水至1000ml，加葡萄糖或蔗糖20克、琼脂15-20克煮熔，pH自然，常规灭菌即可。,准备工作,称量、材料预处理按配方准确称量各营养物质。将马铃薯去皮、挖掉芽眼后称量200g，切成1cm见方的
5、小块。琼脂剪碎后用水浸泡。,熬煮将切好的马铃薯块加适量水后放入电饭锅中，煮至酥而不烂。,过滤、加可溶药物 用双层沙布过滤，取滤汁，放在电饭锅中加 入糖,熬琼脂、定容 在沸腾状态下加入琼脂，直到琼脂完全溶化为止，定容至1000ml。,母种培养基制作流程1. 分装试管 2. 塞棉塞 3. 打捆 4. 灭菌 5. 摆斜面,（1）、装管：18 mm180 mm或20 mm200 mm的玻璃试管，分装量掌握在试管长度的1/4-1/5，原则上是摆放成斜面后，斜面的长度为试管长度的1/2-2/3。（2）、灭菌：母种培养基灭菌时，需用1.051.1 kg/cm2的压强，温度为121，灭菌（保持121）30 m
6、in。（3）、斜面的摆置：趁热摆好斜面,摆斜面灭菌结束后锅盖开1/5的小缝，用余热烘干报纸和棉塞，然后摆斜面。斜面长是试管总长的1/2,3、种菇的组织分离,（1）种菇的选择：外观典型、大小适中、无任何污染、7-8成熟、第12茬的子实体。（2）接种箱与分离工具的消毒接种箱：科达气雾消毒粉23g或高锰酸钾5g，甲醛10ml混合气雾消毒30min.分离工具的消毒：用70-75酒精擦拭后，再在酒精灯上反复灼烧。,（3）种菇的解剖分离,纵剖（撕）菇体尖头镊取柄盖交界处绿豆粒大的组织放入新斜面中部,金针菇是横切菌盖上薄的菌肉或取未开伞的幼嫩子实体的菌褶片,灵芝组织分离所取的部位是菌盖边缘的白色生长圈,木耳
7、等胶质菌类的菌肉薄，子实体经无菌水反复冲洗后，撕开子实体或用刀片将两层耳片切开，挑取一小块菌肉组织即可。,（4）种菇分离后的观察培养 将分离好的试管放入23-25的温箱中培养，2436h后开始萌发菌丝，23d后形成菌落，此时注意淘汰杂菌污染或菌丝生长希弱的试管，10d左右菌丝可长满试管，放入冰箱中储存。 选择适宜的季节做出菇试验。,4、母种的转管培养,母种的接种必须在严格的无菌条件下进行。否则将会造成严重污染，给生产造成造成巨大损失。然后将所有试管及接种器具放入接种箱里进行消毒灭菌，力求灭菌彻底。在点燃酒精灯火焰上进行操作，将菌种试管和接种用斜面培养基放在火焰旁。拨去棉塞，把消毒灭菌的接种针伸
8、入菌种试管内，挑小块菌种放入斜面培养基中，一支母种可移栽3040支试管。原始母种可转管24代。,图3-14斜面试管转管接种,培养：将移接好的试管放入20-25的温箱中培养，同时注意反复观察，清杂去劣，经10d左右菌丝可长满试管。,（二）原种的制作,1、原种培养基配方与配制, 木屑培养基：木屑78%，麸皮或谷粒20%，石膏1%，磷肥1%，水适量。适用于培养平菇、木耳、香菇、猴头。 棉子壳培养基：棉子壳78%，麸皮或谷粒20%，石膏1%，磷肥1%，水适量。水适量。适用于培养平菇、猴头、金针菇、鸡腿菇。,谷粒配方：稻谷98%，石膏粉2%棉子壳谷粒配方：棉子壳50%，谷粒,49%，石膏粉1%,培养料的
9、配制, 木屑、棉籽壳培养料的拌料配制 木屑、棉籽壳培养料按配方称量后，堆制混和，加水拌料，配方中的糖也可先溶于水中再拌入。拌料时要控制料的含水量在60左右 。, 谷粒培养料的配制 谷粒因其营养较丰富，制作的菌种具有菌丝萌发早、吃料快、抗衰老能力强、产量高等优点，在生产中应用较多。一般是采用浸泡法或煮熟法，也可用石灰水浸泡。注：煮熟至将开口为度,2、装瓶 灭菌 将培养料拌匀装入菌种瓶（或袋）内、装料松紧适宜，上下一致，装料高度以齐瓶（袋）肩为宜。然后用手指在瓶的中央向下大一个小洞，以利接种定植，塞上棉塞。装好的料瓶（袋）要当天灭菌，以免培养料发霉变质。,培养基的灭菌 通常采用高压蒸气灭菌法和常压
10、蒸气灭菌法以达到灭菌的目的。高压灭菌2小时或常压灭菌于100维持8-10小时，灭菌后培养基最好放在适温下，空白培养5-7天，以检查培养基灭菌的效果。如在此期间没有出现任何杂菌，说明灭菌效果良好。待其冷却30以下可接种。也可高压灭菌（1.52h),3、原种的接种,4、原种的培养,培养室的大小和床架数量应根据生产规模来定。注意：适温培养，对多数食用菌而言，可保 持2025，定期检查杂菌。时间2540天 。正常菌丝：洁白、粗壮。杂菌：有黄、绿、黑橘红等多种颜色，且生长速度快，稀疏无力。,（三）、栽培种的制作,基本上同原种，可参照执行。容器可用15cm30cm0.005cm聚丙烯朔料袋加套环替代。,接栽培种,用接种匙（镊、铲）取枣大原种放于袋的两端或瓶中料面上,返回本节,四、菌种的保藏,（一）菌种的保藏的原理及设备1、菌种的保藏的原理：采用干燥、低温、隔氧等方法，尽可能地降低菌种的代谢活动，并保证原种的纯度。2、菌种的保藏的设备：普通冰箱或超低温冰箱、真空干燥器（机）,1.斜面低温法斜面菌种置46冰箱中（34个月）,返回本节,（二）菌种常用的保藏方法,返回本节,3、无菌水保藏法：将培养好的斜面菌种用接种针切成小块，连同琼脂培养基移入灭菌蒸馏水内，然后用白胶塞封口，在室温下保藏，可成活2年。,菌种厂设计,再见,
