1、药物分析实验实验一 葡萄糖的分析,一、教学目的,了解葡萄糖的全检过程；掌握葡萄糖中氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属、砷盐等一般杂质检查的基本原理 、操作方法及杂质限量计算；正确使用纳氏比色管、检砷器工作原理。,葡萄糖结构,D-葡萄糖,中国药典收载：,二、基本原理,葡萄糖分子中具有醛基，还原碱性酒石酸铜生成红色氧化亚铜。,本实验除了检查氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属、砷盐等一般杂质外，还检查溶液的澄清度（目的检查不溶性杂质，如糊精、蛋白质等）、亚硫酸盐与可溶性淀粉（因制备时使用的酸可能带有亚硫酸盐，可溶性淀粉为引入的中间体）。,C6H12O6 + 2 Cu2+ + 4OH- = C6H12O7 + C
2、u2O + 2 H2O,实验要求,记录每个试验项目的称样质量记录酸度的检查、溶液的澄清度与颜色检查、氯化物的检查、硫酸盐的检查的实验现象给出实验结果、进行结果判定实验报告,主要试剂及器皿,酚酞指示液25%氯化钡溶液0.020mol/L NaOH溶液稀硝酸10 g/mL NaCl标准溶液稀盐酸100g/mLK2SO4标准溶液器皿： 50mL纳氏比色管电子天平,试剂：,三、实验操作,（二）鉴别 取本品约0.2g，加水5mL溶解后，缓缓滴入温热的碱性酒石酸铜试液，即生成氧化亚铜红色沉淀。,（三）检查1.酸度的检查,取葡萄糖2.0g至50mL比色管，加水20mL溶解后，加酚酞指示剂3滴与0.020mo
3、l/L氢氧化钠溶液0.20mL，应显粉红色。记录：称量质量和实验现象标准要求：溶液应粉红色单项判定：合格不合格,2.溶液的澄清度与颜色检查,取葡萄糖12.5g至50mL纳氏比色管中，加热水溶解后，放冷，用水稀释至25mL，观察，溶液应澄清无色。记录：称量质量和实验现象标准要求：溶液应澄清无色单项判定：合格不合格,4.亚硫酸盐与可溶性淀粉检查,取本品1.0g至试管中，加水10mL溶解后，加0.1mol/L碘试液1滴，应即刻显示黄色。,7.氯化物的检查,取葡萄糖0.60g至50mL纳氏比色管中， 加水溶解使成25mL（溶液如显碱性，可滴加硝酸使成中性），再加稀硝酸10mL（如溶液不澄清，应过滤），
4、加水使成约40mL，摇匀，即得样品溶液。 另取标准10g/mL氯化钠溶液6.0mL，置于50mL比色管中，加稀硝酸10mL，加水使约成40mL，摇匀，即得对照溶液。 于样品溶液和对照溶液中，分别加入1mL（用滴管滴20滴）0.1mol/L硝酸银溶液，用水稀释至50mL，摇匀，在暗处放置5min，在黑色背景下，从比色管上方向下观察比较，样品溶液如发生浑浊，与对照品比较不得更浓（0.010%）。,杂质限量的计算,氯化物的限量,实验记录举例,8.硫酸盐的检查,取葡萄糖2.0g至50mL纳氏比色管中， 加水溶解使成约40mL （溶液如显碱性，可滴加硝酸使成中性，如溶液不澄清，过滤），加稀盐酸2mL，摇
5、匀，即得样品溶液。 另取标准硫酸钾（100g/mL）溶液2.0mL置于50mL比色管中，加水使成40mL，加稀盐酸2mL，摇匀，即得对照溶液。 于样品溶液和对照溶液中，分别加入25%氯化钡溶液5mL ，用水稀释至50mL，充分摇匀，放置10min，在黑色背景下，从比色管上方向下观察比较，样品溶液如发生浑浊，与对照品比较不得更浓。（0.010%）,硫酸盐的限量,9.铁盐的检查,原理：铁盐在酸性溶液中与硫氰酸铵生成红色可溶性硫氰酸铁配位离子，与一定量标准铁溶液同法处理后所呈颜色比较，判断供试品铁盐是否超限。,铁盐的检查试验方法,取葡萄糖2.0g至50mL纳氏比色管中， 加水20mL溶解后，滴加硝酸
6、3滴，小火煮沸5min，放冷，加水稀释使成45mL，加硫氰酸铵(30100) 3mL，摇匀，如显色，与标准Fe溶液（10g/mL）2.0mL用同一方法制成的对照液比较，白色背景下从上向下观察，不得更深（0.001%）,10、重金属检查法,硫代乙酰胺法原理：,重金属检查方法,取50mL纳氏比色管两支，甲管中标准铅溶液（10g/mL）2.0mL与醋酸盐缓冲液（pH3.5）2mL后，加水稀释至25mL;取葡萄糖4.0g至于乙管， 加水20mL溶解后，加醋酸盐缓冲液（pH3.5）2mL，加水稀释至25mL;再在甲乙两管中分别加硫代乙酰胺试液各2mL,摇匀，放置2min,同置白色背景上，从上向下观察，不
7、得更深。,11.砷盐原理 锌与酸作用产生新生态的氢，与药物中微量砷盐反应生成具挥发性的砷化氢，遇溴化汞试纸产生黄色至棕色的砷斑，与一定量标准砷溶液所生成的砷斑比较，判定药物中砷盐的含量。其反应式如下：AsO33-+3Zn+9H+ AsH3+3Zn2+3H2O AsH3+2HgBr2 2HBr+AsH(HgBr)2 黄色 AsH3+3HgBr2 3HBr+As(HgBr)3 棕色,检砷装置的准备： 取60mg醋酸铅棉花撕成疏松状，每次少量，用细玻璃棒轻轻而均匀的装入导气管中，装管高度约60mm，用镊子取出一片溴化汞试纸，置旋塞顶端平面上，盖住孔径，用橡皮筋固定。,砷盐检查方法,样品砷盐检查：取葡
8、萄糖2.0g至检砷瓶中， 加水5mL溶解后，加（浓）盐酸5mL与水稀释至28mL，加KI试液5mL与酸性氯化亚锡试液5滴，在室温放置10min后，加锌粉2g，迅速将导气管塞于瓶口上，并将检砷器置在25下反应45min，取出溴化汞试纸，将生成的砷斑与2ml标准砷溶液（1g/mL）在相同条件下生成的砷斑比较，颜色不得更深(0.0001%)。注意：KI试液与氯化亚锡还可抑制锑化氢的生成。,标准砷斑的制备：精密量取标准砷溶液（As 1g/ml）2ml，于另一个试砷瓶中，加盐酸5ml与蒸馏水21ml，照上述方法自“加碘化钾试液5ml”起，依法操作，即得。,四、注意事项,1比色管的正确使用：选择配对的两支
9、纳氏比色管，用清洁液荡洗除去污物，再用水冲洗干净。采用旋摇的方法使管内液体混合均匀。 2正确选用量具：根据检查试验一般允许误差为10%的要求和药品、试剂的取用量。 3平行操作：标准品与样品必须同时进行实验，加入试剂量、顺序等均应一致。观察时，两管受光照的程度应一致，使光线从正面照入，比色时置白色背景上，比浊时置黑色背景上，自上而下地观察。 4砷盐检查时，取用的样品管与标准管应力求一致，管的长短，内径一定要相同，以免生成的色斑大小不同，影响比色。锌粒加入后，应立即将检砷管盖上，塞紧，以免AsH3气体逸出，反应时勿随意晃动。5. 砷盐检查实验结束后，醋酸铅棉花自导气管上部全数夹出，废液倒入回收桶，切勿倒入水槽以免造成堵塞。,本实验技术要点：,1.比色管正确使用；2.点滴瓶用法；3.检砷瓶用法拿法及用法（醋酸铅棉花塞入的位置、长度及蓬松程度；导气管的密闭程度等）；,下周预备实验-G板和H板的制备（每人做一个G和一个H ）,1.G板：玻璃背面先贴上标签（G板），取硅胶G粉5g，加18毫升水，向同一个方向研磨混合，去除表面气泡，从中心倒入洁净玻璃板，研钵棒助涂布均匀(快速)，拍板，转向，再拍板，平推，勿动！-做完让老师看板，认可后方能离开。2.H板：玻璃背面先贴上标签（H板），取硅胶H粉5g，加18毫升CMC-Na，同上法制板，平推，勿动！,
