1、1习题库 （二）二、判断题1在高盐和低温条件下由 DNA 单链杂交形成的双螺旋表现出几乎完全的互补性，这一过程可看作是一个复性(退火)反应。2. 在核酸双螺旋(如 DNA)中形成发夹环结构的频率比单链分子低。发夹结构的产生需要回文序列使双链形成对称的发夹，呈十字结构。3B 型双螺旋是 DNA 的普遍构型，而 Z 型则被确定为仅存在于某些低等真核细胞中。4 病毒的遗传因子可包括 l 到 300 个基因。与生命有机体不同，病毒的遗传因子可能是 DNA 或 RNA(但不可能同时兼有!)，因此 DNA 不是完全通用的遗传物质。5. Cot12 与基因组大小相关。6C 0C1/2与基因组复杂性相关。7非
2、组蛋白染色体蛋白负责 30nm 纤丝高度有序的压缩。8.大肠杆菌中，复制叉以每秒 5O0 个碱基对的速度向前移动，复制叉前的 DNA以大约 3000rmin 的速度旋转。9.所谓半保留复制就是以 DNA 亲本链作为合成新子链 DNA 的模板，这样产生的新的双链 DNA 分子由一条旧链和一条新链组成。10.“模板”或“反义” DNA 链可定义为：模板链是被 RNA 聚合酶识别并合成一个互补的 mRNA，这一 mRNA 是蛋白质合成的模板。11.在 DNA 复制中，假定都从 53同样方向读序时，新合成 DNA 链中的核苷酸序列同模板链一样。12.DNA 的 53合成意味着当在裸露 3-OH 的基团
3、中添加 dNTP 时，除去无机焦磷酸 DNA 链就会伸长。13.在先导链上 DNA 沿 53方向合成，在后随链上则沿 35方向合成。14.如果 DNA 沿 35合成，那它则需以 5三磷酸或 3脱氧核苷三磷酸为末端的链作为前体。15.大肠杆菌 DNA 聚合酶缺失 35校正外切核酸酶活性时会降低 DNA 合成的速率但不影响它的可靠性。16.DNA 的复制需要 DNA 聚合酶和 RNA 聚合酶。17.复制叉上的单链结合蛋白通过覆盖碱基使 DNA 的两条单链分开，这样就避免了碱基配对。18.只要子链和亲本链中的一条或两条被甲基化，大肠杆菌中的错配校正系统就可以把它们区别开来，但如果两条链都没有甲基化则
4、不行。19.大肠杆菌、酵母和真核生物病毒 DNA 的新一轮复制是在一个特定的位点起始的，这个位点由几个短的序列构成，可用于结合起始蛋白复合体。20.拓扑异构酶之所以不需要 ATP 来断裂和重接 DNA 链，是因为磷酸二酯键的能量被暂时贮存在酶活性位点的磷酸酪氨酸连接处。221.酵母中的拓扑异构酶突变体能够进行 DNA 复制，但是在有丝分裂过程中它们的染色体不能分开。22.靠依赖于 DNA 的 DNA 聚合酶所进行的 DNA 复制要求有作为一个引发物的游离 3OH 的存在。游离的 3OH 可以通过以下三种途径获得：合成一个RNA 引物、DNA 自我引发的或者一个末端蛋白通过磷酸二酯键共价结合到一
5、个核苷酸。23.当 DNA 两条链的复制同时发生时，它是由一个酶复合物： DNA 聚合酶负责的真核生物的复制利用 3 个独立作用的 DNA 聚合酶，Pol 的一个拷贝(为了起始)和 Po1 的两个拷贝(DNA 多聚体化，当 MFl 将 RNA 引发体移去之后填入)。24.从 ori 开始的噬菌体复制的起始是被两个噬菌体蛋白 O 和 P 所控制的，在大肠杆菌 E.coli 中 O 和 P 是 DnaA 和 DnaC 蛋白的类似物。基于这种比较，O 蛋白代表一个解旋酶而 P 蛋白调节解旋酶和引发酶结合。25拓扑异构酶 和可以使 DNA 产生正向超螺旋。26拓扑异构酶 解旋需要 ATP 酶。27.
6、RNA 聚合酶 合成 DNA 复制的 RNA 引物。28线粒体 DNA 的复制需要使用 DNA 引物。29. 噬菌体整合到大肠杆菌基因组上是由一个位点专一的拓扑异构酶(入整合酶)催化的，它可以识别在两条染色体上短的特异 DNA 序列。30在真核生物染色体 DNA 复制期间，会形成链状 DNA。31所有已知的基因转变都需要一定量的 DNA 合成。32根据不同物种同一蛋白质中氨基酸的不同来估计突变率往往较实际的突变率低，因为一些突变体由于危及蛋白质功能，在选择压力下从种群中消失。33因为组蛋白 H4 在所有物种中都是样的，可以预期该蛋白基因在不同物种中也是一样的。34DNA 修复机制有很多种，但所
7、有这些机制都依赖于二倍体染色体上两套遗传信息的存在。35.自发的脱膘呤作用和由尿嘧啶 DNA 糖基化酶切去一个已脱碱基的胞嘧啶都会产生可被无膘呤嘧啶内切核酸酶作为底物识别的同样的中间产物。36.DNA 修复的第一步是由专用于修复过程的酶催化的，下面的步骤由 DNA 代谢过程中的常用酶催化。37.大肠杆菌中 SOS 反应的最主要作用是通过在原始 DNA 损伤区附近导人补偿突变来提高细胞存活率。38.DNA 中四个常用碱基自发脱氨基的产物，都能被识别出来。39.在细菌细胞中，短片段修复是由损伤诱导的。相反，长片段修复是组成型的，且往往涉及长约 150O 一 9000bp 损伤 DNA 片段的替换。
8、40.真核生物中 DNA 的修复没有原核生物重要，这是因为体细胞的二倍体特征。41.一般性重组需要交换的双方都有一长段同源 DNA 序列，而位点专一重组仅需要短而专一的核苷酸序列。某些情况下，只需要交换双方中的一方具有该序列即可。42.一般性重组包括 DNA 片段的物理交换，该过程涉及 DNA 骨架上磷酸二酯键的断裂 和重新形成。343.RecA 蛋白同时具有位点专一的单链切割的活性和将单链从双螺旋 DNA 分子上脱离的解旋酶的功能，但需要依赖于 ATP 活性。44.大肠杆菌的单链结合蛋白通过与糖磷酸骨架结合并使碱基暴露，从而解开单链上的短发夹结构。45.RecA 蛋白同时与单链、双链 DNA
9、 结合，因此它能催化它们之间的联会。46.交叉链互换包括交叉链和未交叉链，至少其中一条链的磷酸骨架断裂才可能使这个过程逆转。47.基因转变是真菌类偶然改变性别的方式；正常情况下，一次接合产生等量的雄性与雌性孢子，但偶然也会出现 13 或 31 的比例。48.当两个 DNA 的突变片段相互间不能反式互补，则可以推测这两个突变影响了同一种功能。这样的两个突变和每个不能反式互补的突变分为同一个互补群，并被认为是一个独立遗传单位的一部分。这个遗传单位可能是一个顺反子，或者如果突变稳定地干扰了转录过程，这可能是一个多顺反子转录单位。49.编码区以外的突变不会导致细胞或生物体表型改变。50.若一个二倍体酵
10、母细胞中发生了一个错义突变，而这一突变将另外一个不同的氨基酸引入了一个分解代谢酶的催化位点，从而使得这个酶可以利用别的底物。这就是所谓的功能获得性突变。51因为 T4 噬菌体至少编码 30 种参与基因组复制和转录的酶，它和寄主 DNA和 RNA 聚合酶都是独立的，但它必须依赖寄主蛋白质的复制机制。52.小的 DNA 病毒，如 SV40 和噬 X174 完全依赖寄主复制机制来复制它们的 DNA。53. 负链病毒不包含编码蛋白的基因。54追踪有外壳病毒的一个生活周期就等于游历整个细胞。55当一个 噬菌体侵染一个合适的大肠杆菌寄主细胞时，通常是裂解性侵染，释放出几百个子代噬菌体；更少见的是，它会整合
11、到寄主染色体中，产生带有原噬菌体 染色体的溶原菌。56通过从寄主细胞表面出芽生殖的病毒常因为出芽造成细胞表面改变而致癌。57一种把新病毒按 DNA 或 RNA 分类的简易方法是看它的生长是否受放线菌素 D 的抑制。放线菌素 D 只阻遏依赖 DNA 的 RNA 合成，而对依赖 RNA 的复制酶无影响，如果病毒生长受它抑制，那肯定是 DNA 病毒。58大病毒比小病毒更有可能存在重叠基因，因为它们有更多的基因。59因为类病毒不编码任何蛋白但又能够复制并在植物中造成严重的疾病，所以非常特殊。60.负责 噬菌体 DNA 合成的酶是在裂解循环的晚期形成的。61.溶源化是一个双链 DNA 病毒的生活周期中的
12、一种状态，是当病毒的基因组整合进一个宿主细胞的基因组时形成的状态。62.c蛋白的稳定性是影响溶源和裂解循环之间开关的一个关键。63.为了把噬菌体附着位点( attp)和在细菌染色体上的附着位点( attB)结合重组起来， 噬菌体 DNA 在感染大肠杆菌后靠末端 cos 位点退火成环。64下面哪些结构物能够诱导乳糖操纵子?哪些是 半乳糖苷酶的底物?(a)l，4半乳糖苷4(b)l，4半乳糖苷(c)1，6半乳糖苷(d)l，6半乳糖苷(e)上面既没有诱导物，也没有底物65下面哪些说法是正确的?(a)Lac A 的突变体是半乳糖苷透性酶的缺陷(b)在非诱导的情况下，每个细胞大约有 4 分子的 半乳糖苷酶
13、(c)乳糖是一种安慰诱导物(d)RNA 聚合酶同操纵基因结合(e)多顺反子 mRNA 是协同调节的原因(f) Lac 阻遏物是一种由 4 个相同的亚基组成的四聚体(g)腺苷酸环化酶将 cAMP 降解成 AMP(h) CAP 和 CRP 蛋白是相同的(i)-35 和-10 序列对于 RNA 聚合酶识别启动子都是很重要的(j)色氨酸的合成受基因表达、阻遏、弱化作用和反馈抑制的控制(k)Trp 的引导 mRNA 能够同时形成三个“茎环”结构(l)在转录终止子柄部的 A-T 碱基对可以增强结构的稳定性(m)真核生物和原核生物的转录和翻译都是偶联的(n)在色氨酸浓度的控制下，核糖体停泊在 Trp 引导区
14、串色氨酸密码子上，但并不与之脱离(o)Ara C 蛋白既可作为激活蛋白，又可作为阻遏蛋白起作用(p)Ara C 的表达不受调控66转录的起始位点( stp)决定在模板链上嘧啶核苷酸的位置，在此形成第一个杂合的 RNA 和 DNA 碱基对。67反转录病毒侵染常常同时导致子代病毒的非致死释放和被侵染细胞内致癌的永久性基因改变。68转座酶可以识别整合区周围足够多的序列，这样，转座子不整合到基因的中间，因为破坏基因对细胞是致死的。69转座要求供体和受体位点之间有同源性。70Tn A 家族的转座子通常转移三种基因：转座酶、解离酶和氨苄抗性基因。71Tn 10 高水平表达转座酶。72水晰的基因组比人的基因
15、组大。73高等真核生物的大部分 DNA 是不编码蛋白质的。74. 假基因通常与它们相似的基因位于相同的染色体上。75在有丝分裂中，端粒对于染色体的正确分离是必要的。76大多数看家基因编码低丰度的 mRNA。77所有真核生物的基因都是通过对转录起始的控制进行调控的。78所有高等真核生物的启动子中都有 TATA 盒结构。79只有活性染色质转录的基因对 DNase 敏感。80. 内含子通常可以在相关基因的同一位置发现。8140以上的 Drosophila cirilis 基因组是由简单的 7bp 序列重复数百万次组成。82卫星 DNA 在强选择压力下存在。83真核细胞中的 RNA 聚合酶仅在细胞核中
16、有活性。584. 在 RNA 的合成过程中，RNA 链沿 35方向延长。85. 候选三磷酸核苷通过对生长中 RNA 链的 磷酸的亲和攻击加到链上。86核不均一 RNA 是 mRNA 和 rRNA 的前体而不是 tRNA 的前体。87密码子 AUG 专门起 mRNA 分子编码区的终止作用。88tRNA fMet的反密码于是 TAC。89. RNA 聚合酶能以两个方向同启动子结合，并启动相邻基因的转录。但是，模板链的选择由另外的蛋白因子确定。90细菌细胞用一种 RNA 聚合酶转录所有的 RNA，而真核细胞则有三种不同的RNA 聚合酶。91. 转录因子具有独立的 DNA 结合和转录激活结构域。92.
17、每个转录因子结合位点被单个转录因子识别。93.纠正下列一段话中的错误：在 E. Coli 中，通过 RNA 聚合酶同操纵基因的结合来起始转录。与转录起点碱基互 补的 dNTP 同 亚基结合，然后是第二个 dNTP 通过与第一个 dNTP 形成 25磷酸 二酯键而结合上。当生成的 RNA 链约有 12 个核苷酸长度时， 亚基脱离 DNA 聚合酶，RN链在全酶的作用下继续延伸。当 DNA 聚合酶在 RNA 链上遇到终止密码子时，转录作用停止。94. 在 tRNA 分子中普遍存在的修饰核苷酸是在掺入 tRNA 转录物结合前由标准核苷酸共价修饰而来。95如果 tRNATyr加的反密码子发生单个碱基变化
18、后成为丝氨酸的反密码子，被加入到无细胞系统，所得的蛋白质在原来应为丝氨酸的位置都变成了酪氨酸。96. 在肽链延伸的过程中，加入下一个氨基酸比加人氨酰 tRNA 更能激活每个氨酰 tRNA 间的连接。97摇摆碱基位于密码子的第三位和反密码子的第一位。98核糖体小亚基最基本的功能是连接 mRNA 与 tRNA，大亚基则催化肽键的形成。99. 蛋白质合成时，每加人一个氨基酸要水解 4 个高能磷酸键(4 个密码子)，所消耗的总能量比起 DNA 转录(每加入一个核苷酸用两个高能磷酸键，6 个密码子)要少。100因为 AUG 是蛋白质合成的起始密码子，所以甲硫氨酸只存在于蛋白质的 N 末端。101通过延缓
19、负载 tRNA 与核糖体结合以及它进一步应用于蛋白质合成的时间，可使与不适当碱基配对的 tRNA 离开核糖体，提高蛋白质合成的可靠性。102. 延伸因子 eEF1 帮助氨酰 tRNA 进入 A 位点依赖于 ATP 内一个高能键的断裂。103三种 RNA 必须相互作用以起始及维持蛋白质的合成。104G-U 碱基负责 fMet-tRNA 对 GUG 的识别。105.限制与修饰现象是宿主的一种保护体系，它是通过对外源 DNA 的修饰和对自身 DNA 的限制实现的。106.限制性内切核酸酶在 DNA 中的识别切割位点的二级三级结构也影响酶切效率。一般来说，完全切割质粒或病毒 DNA，要比切割线状 DN
20、A 需要更多的酶，最高的需要 20 倍。6107.如果限制性内切核酸酶的识别位点位于 DNA 分子的末端，那么接近末端的程度也 影响切割，如 Hpa和 Mbo 要求识别序列之前至少有一个碱基对存在才能切割。108.能够产生防御病毒侵染的限制性内切核酸酶的细菌，其本身的基因组中没有被该核酸酶识别的序列。109限制性图谱与限制性片段长度多态性(RFLP)图谱的最显著的区别在于前者是一个物理图谱而后者是一个连锁图。110用限制性内切核酸酶 Hpa 分别切割载体 DNA 和供体 DNA 后，可用E coli DNA 连接酶进行连接。111已知某一内切核酸酶在一环状 DNA 上有 3 个切点，因此，用此
21、酶切割该环状 DNA，可得到 3 个片段。112.迄今所发现的限制性内切核酸酶既能作用于双链 DNA，又能作用于单链 DNA。113基因工程中使用的类限制性内切核酸酶不仅有内切核酸酶的活性，而且有甲基化酶的活性。114.DNA 多态性就是限制性片段长度多态性。115.用限制性内切核酸酶 Pst 切割质粒 pBR322 后，再用外切核酸酶 .coli 进行系列缺失，可得到一系列大小不同的缺失突变体。116.甘油会使许多限制性内切核酸酶的特异性发生改变，是导致一些酶的星活性的主要原因之一，防止的办法是酶切反应体系中，将甘油的浓度控制在5以下。117.具有 EcoR 末端的外源片段只能以一个方向插入
22、到 EcoR 末端的载体中。118.从 Esherichia coli K 中分离的限制性内切核酸酶命名为 EcoK。119.同一种限制性内切核酸酶切割靶 DNA，得到的片段的两个末端都是相同的。120.在限制与修饰系统中，修饰主要是甲基化作用，一旦位点被甲基化了，其他的限制性酶就不能切割了121.稀有酶是指那些识别序列很长又不常用的限制性内切核酸酶。122.T4 DNA 连接酶和 E.coli 连接酶都能催化平末端和粘性末端的连接。123.T4 DNA 连接酶和 E.coli 连接酶都能催化双链 DNA 和单链 DNA 的连接。124.反转录酶能够以单链 RNA 或单链 DNA 为模板，在引
23、物的引发下合成一条互补的 DNA 链。以 RNA 为模板合成的 DNA 是互补 DNA(complementaly DNA, cDNA)。若是以 DNA 模板合成 DNA，dNTP 的掺人速度很低(约 5 个核苷酸秒)，比 T7 DNA 聚合酶的合成速度差不多低 100 倍。125.以 RNA 为模板，用反转录酶可同时产生单链和双链的 cDNA，双链 DNA 是由自身引 物引导合成。但这种自身引物引导的合成效率远低于外加寡核苷酸引物引导的合 成。126.Ba131 核酸酶(Ba131 nuclease)是 Ca 2+依赖性的，在反应混合物中加入 EDTA 便可抑制它的活性。127. 外切核酸酶
24、不能在双链 DNA 的 gap 和 nick 处切割 DNA。128.当一个 DNA 结合蛋白同它识别的核苷酸序列结合以后，就保护了它们的磷酸二酯7键免遭切割，其结果，电泳胶上就有明显可见的空缺带(与对照相比)，这就是 DNA 足迹法。129.T4 DNA 连接酶和 E.coli 连接酶作用时都需要 ATP 和 NAD+作为辅助因子。130.多核苷酸激酶之所以能够用于 DNA 片段的标记，是因为它能够将单个的32P 标记的单核苷酸加到每一 DNA 链的 5端。131.在反转录过程中，使用 AMV 比使用 M-MLV 可得到较多的产物。132.真核生物可能有两种 DNA 连接酶，连接酶和连接酶
25、都能在 DNA 合成和连接中起作用。133.DNA 聚合酶有三种酶活性，其中 35外切核酸酶的活性在较多的dNTP 存在 下，常被 53合成酶的活性所掩盖。134用同一种酶切割载体和外源 DNA 得到粘性末端后，为防止它们自身环化，要用 CIP 将它们脱磷酸。135. 外切核酸酶的作用产物可以作为末端转移酶的作用底物。136.用外切酶作系列缺失突变时，可以从突出的 3端开始。137.nick 和 gap 的含义是不同的，前者指 DNA 的单链中有较小的缺失，后者仅是断开 了一个磷酸二酯键。138.迄今发现的质粒 DNA 都是环状的。139.线性质粒同环状质粒一样都不带有宿主必需的基因。140.
26、有 a、b、c 三个质粒，因为 a 和 b 能够共存于一个细胞，a 和 c 也可共存于同一个细胞，所以 b 和 c 一定能够共存于同一个细胞。141.插入元件(IS)也是一种转座元件，它除了有转座酶基因外，还有附加基因。142.如果两个不同的质粒可以稳定地共存于同一个细胞中，这两种质粒则属于同一个不亲和群。143.一个带有反向重复序列的双链 DNA 经变性后，复性时其单链可形成发夹环。144.能够在不同的宿主细胞中复制的质粒叫穿梭质粒。145.任何一种质粒都可以用氯霉素扩增的方法，增加它的拷贝数。146.只有完整的复制子才能进行独立复制，一个失去了复制起点的复制子不能进行独立复制。147CsC
27、l-EB 密度梯度离心法纯化 SC DNA 原理是根据 EB 可以较多地插入到 SC DNA 中，因而沉降速度较快。148质粒 Co1El 同 pSC101 共整合后，得到重组质粒 pSC134，具有两个复制起点，这两个起点在任何细胞中都是可以使用的。149pBR322 可以用于粘性末端连接、平末端连接和同聚物接尾法连接，无论用哪种方法连接，都可以用同一种酶回收外源片段。150所谓穿梭质粒载体是能够在两种以上的不同宿主细胞中复制的质粒，所用的复制起点不同。151.一般情况下，质粒既可以整合到染色体上，也可以独立存在。152. Co1El 是唯一用作基因工程的自然质粒载体，它具有四环素抗性标记，
28、因而很容易选择。153.某一染色体 DNA 经内切酶 Sal 切割后，产生了若干个具有粘性末端的 DNA 片段，将这些片段分别在 T4 DNA 连接酶的作用下自身连接成环，然后导人受体细胞，都可以进行独立地复制。8154如果细菌的某种表型特征在 UV 处理下丧失后不再恢复，这种表型有可能是质粒赋予的。155基因克隆中，低拷贝数的质粒载体是没有用的。156.代型载体(replacement vector)是指同一种限制性内切核酸酶在 DNA 中具有两 个切点。外源 DNA 通过取代这两个切点间的片段被克隆。157现在最常用的 pUC 载体是 pUC18，它的分子量小，具有多克隆位点和易于选择的分
29、子标记，并且是松弛型复制。另外，这种载体可在辅助质粒的帮助下合成单链 DNA 。158.噬菌粒(phagemid)pUC118pUC119 载体是集质粒和丝状噬菌体有利特征于一身 的载体，既能合成单链 DNA，又能合成双链 DNA。159. 噬菌体 DNA 和 M13 单链噬菌体 DNA 在成熟前的 DNA 复制都是用滚环模型。160.M13 噬菌体每个世代裂解宿主后，可释放 100 个子代噬菌体。161.以粘粒为载体的重组体虽然在平板上生长的速度不同，但是转化子中插入片段的扩增量是相同的。162.氯霉素扩增 DNA 时，加氯霉素的时间是重要的，因为加得太早，菌数不够，加入时间过迟，菌龄过老，
30、容易自溶。163所谓引物就是同 DNA 互补的一小段 RNA 分子。164脉冲凝胶电泳采用一个很强的电场来分离非常长的 DNA 分子，其原理在于迫使 DNA 分子根据长度的不同而具有不同的速度，并按大小顺序通过凝胶。165Agarose-EB 电泳法分离纯化 CCC DNA 原理是根据 EB 可以较多地插入到 CCC DNA 中，因而迁移速度较快。166.如果 PCR 的每一次循环都把上一次循环中合成的 DNA 都加了一倍，那么，10 个循环就扩增了 1000 倍，20 个循环就扩增了 100 万倍，30 个循环就扩增了 10 亿倍。167PCR 既能用于扩增任何天然存在的核苷酸序列，又能重新
31、设计任何天然核苷酸序列的两个末端。因此，任意两个天然存在的 DNA 序列都能快速有效的扩增，并拼接在一起。168最有效的制备纯 RNA 的方法是让其在细胞中超表达，然后提纯。169大量制备已被克隆基因编码蛋白产物的常用方法是体外转录和翻译。170.通过报告基因与来自于目的基因上游和下游各种 DNA 片段的结合，研究基因的调控序列。171.温度敏感突变型是非常有用的，在这些突变型中，可以通过对温度的改变控制这些突变体中异常表型的出现。172用人工合成的含有所需碱基变化的寡聚核苷酸，可以将特殊突变引入克隆的基因。173蛋白质的氨基酸序列中各种重要信号都可以通过短氨基酸序列同报告蛋白的融合进行研究。
32、174简并引物是根据已知 DNA 序列设计的引物群。175在 DNA 贮存液中加一滴三氯甲烷，可防止真菌的污染。176密码的偏爱性是指不同种属的生物对简并密码具有不同的使用频率。177插入到质粒 DNA 中的 EB 可以用正丁醇抽提除去。178碱法和煮沸法分离质粒 DNA 的原理是不相同的。9179酚法和碱法分离质粒 DNA 都要用溶菌酶破壁，但碱法用的溶菌酶的浓度要高。180外源基因(或 DNA 片段)插入到某一基因内的位点后，这个基因不再有任何功能。181用不同的产生粘性末端的限制性内切核酸酶分别切割载体和外源 DNA，得到的粘性末端是不亲和的粘性末端。182.基因组 DNA 文库是含有某
33、一生物中全部 DNA 序列随机克隆的克隆群，而cDNA 文库是含有某一生物中所有表达基因随机克隆的克隆群。183.cDNA 克隆较之基因组克隆最重要的优越性就是它们含有一个基因的完整序列。184通过差示杂交后制备的 cDNA 文库使克隆那些只在特定分化细胞中表达基因的机率大为提高。185在染色体步移中，可通过 DNA 测序知道已到达所感兴趣的基因。186一旦有了一套已知顺序的基因组克隆，通过从文库中获得覆盖目的突变基因所在基因组区的所有克隆，就可以进行染色体步移。187根据遗传连锁作图把基因定位在基因组中是定位克隆的第一步，它为分离特定的人的基因提供了一个直接而快速的方法。188.人工感受态和
34、自然感受态细胞都能吸收线性和环状单链 DNA。189.人工导入基因和正常染色体基因间的同源重组，可以发生基因置换。190.为了保证重组 DNA 分子在受体细胞中能够稳定地独立存在下来,通常用recrm表型的细胞株作为受体菌。191.线性 DNA 片段被导人哺乳动物细胞后，在细胞内酶的作用下，很快相互连接成重复的 DNA 大片段)并能在随机位点整合到染色体中。192.不匹配的粘性末端是不能通过粘性末端连接的。193.用限制性内切核酸酶切割载体、供体 DNA 后，要加入 EDTASDS 中止液使限制性内切核酸酶失活，这样有利于重组连接。194.限制性内切核酸酶 Bgl识别的序列为 A GATCT，
35、 BamH识别的序列为GGATCC，用它们分别切割载体 DNA 和供体 DNA，不必使酶失活，就可以直接通过粘性末端连接法进行连接。195.具有 E.coR 末端的外源片段只能以一个方向插入到 E.coR 末端的载体中。196.不匹配的粘性末端可以通过部分填补后进行连接。197.低丰度的 mRNA 不仅拷贝数少，而且种类也少。198.同聚物接尾法构建重组体，不仅连接效率高，而且也很容易回收插入的片段199.以 噬菌体为载体的筛选方法比较简便，凡能形成噬菌斑的就一定是重组体。200.核酸杂交探针就是带有放射性标记的 DNA 分子。201.Northern 杂交中，为了防止 RNA 形成部分环状发
36、夹结构，影响迁移率，所以要 用变性缓冲液进行电泳。202探针的离体标记实际上是酶法标记。203切口移位法(nick translation)只能标记线性双链 DNA 不能标记环状双链 DNA。10204通过原位菌落杂交得到的阳性克隆即是重组体，但不能判断插入的外源基因是否进行了表达。205尼龙膜(nylon membrane)是核酸杂交的一种固体支持物，具有同 DNA 结合能力强、韧性强，可反复洗脱使用，并且杂交信号本底低等优点，就是成本高。206如果 DNA 序列的某种变异在群体中是稀有的，称为突变；若是普遍的，则称为多态险。207用寡聚 DNA 进行高度严紧的杂交可用于胎儿遗传病的诊断，可
37、检测到因单个核苷酸变化而造成的基因突变。208.由于基因家族中成员之间是密切相关的，因此可以用其中一个成员作为探针进行高度严紧的杂交来检测其他成员。209通过用化学标记法取代放射性标记法，并采用一种抗体来特异性地识别这种化学修饰，使得原位杂交的分辨率大大提高。210在杂交之前先用凝胶电泳将粗提取物中的 RNA 或 DNA 分子进行分离，假定杂交后只有一种或少数几种大小的片段被探针杂交上了，就能肯定这种杂交是特异性的。211根据某一感兴趣蛋白质的序列、抗原性以及配基结合性质制备探针，可从 DNA 文库中筛选到相应的基因。212.如果用其他的方法对某种蛋白质已进行过鉴定，那么要确定某一克隆是否含有
38、该蛋白编码基因就相当容易了。213用 DNA 探针进行杂交反应非常敏感并具有选择性，可用来测定某一特定 DNA 序列在细胞基因组中的拷贝数。214双重药物选择法富集哺乳动物细胞中稀有重组体的原理是：一种药物用于选择以任意方式整合外源 DNA 的细胞，第二种药物杀死带有随机整合 DNA 的细胞。215就像对培养中的鼠胚性干细胞进行遗传操作获得突变鼠一样，用 DNA 转染培养中的单个植物细胞，能够创造转基因植物。216NC(硝酸纤维素膜)和尼龙膜都可作为电转移 DNA 支持物。217单克隆抗体是淋巴细胞和瘤细胞杂交后形成的单个杂交瘤细胞经无性繁殖而产生的特异性抗体。218用免疫化学法筛选重组体不需
39、要外源基因的表达。219用 DNA 探针同 RNA 分子杂交在测定一已知基因在某一细胞中是否表达时是很有 用的，但不能用于检测转录起始位点、终止位点或内含子的位置。220. 核酸杂交的原理是根据 DNA 分子间互补。221. 突出的 3末端或凹缺的 3末端都可以用 Klenow 大片段酶进行末端标记。222用多核苷酸激酶进行 5末端标记前， DNA 必须进行脱磷酸，否则无法标记。223. X-gal 显色反应的基本原理是使载体上与受体互补的 肽失活。224Norhern 印迹和 Southern 印迹的基本原理是一样的，都是用于检测结构基因的表达。225. 在液相液相和液相固相杂交中，它们的杂交效率都是一样的。
