1、采后BTH处理对樱桃贮藏期间抗氧化活性的影响本科毕业论文题目采后BTH处理对樱桃贮藏期间抗氧化活性的影响学院食品科学与工程专业食品质量与安全毕业届别2014届姓名指导教师教授食品科学与工程学院制二一四年三月采后BTH处理对樱桃贮藏期间抗氧化活性的影响目录摘要1关键词1ABSTRACT1KEYWORDS1前言21材料与方法311材料3111樱桃3112试剂3113仪器312处理3121BTH溶液的浸泡3122取样3123数据处理统计413测定方法4131清除DPPH自由基的能力测定4132清除OH的测定4133清除ABTS自由基的测定4134还原能力的测定5135清除超氧阴离子5136抑制亚油酸
2、脂质过氧化52结果与分析521采后BTH处理对樱桃果实常温贮藏期间抗氧化活性的影响6211各处理对DPPH自由基清除率的影响6212各处理对OH清除率的影响6213各处理对ABTS自由基清除率的影响7214各处理的还原能力测定7215各处理对超氧阴离子清除率的影响8216各处理对亚油酸脂质过氧化的抑制作用93讨论94结论10参考文献11致谢12采后BTH处理对樱桃贮藏期间抗氧化活性的影响1采后BTH处理对樱桃贮藏期间抗氧化活性的影响（甘肃农业大学食品科学与工程学院食品质量与安全专业，甘肃兰州，730070）摘要本实验以樱桃为试材，研究了50MG/LBTH、100MG/LBTH、150MG/LB
3、TH处理对其在常温贮藏期间对DPPH清除率、OH清除率、ABTS清除率、还原能力、超氧阴离子清除率、抑制亚油酸脂质过氧化活性的测定，结果分析表明，BTH各处理都有效的延缓了樱桃果实的抗氧化成分的流失，其中较显著的指标有DPPH清除率、ABTS清除率、抑制亚油酸脂质过氧化。其中100MG/LBTH处理的效果最好。关键词樱桃；BTH；抗氧化活性POSTHARVESTBTHTREATMENTEFFECTSONCHERRYANTIOXIDANTACTIVITYDURINGSTORAGEMAJORINFOODQUALITYANDSAFETYINTHECOLLEGEOFFOODSCIENCEANDENGI
4、NEERINGOFGANSUAGRICULTUREUNIVERSITY，GANSULANZHOU，730070ABSTRACTTHISEXPERIMENTWITHCHERRYASTESTMATERIALS,STUDIEDTHEBTH50MG/L,100MG/LBTH,150MG/LBTHTREATMENTONITSDURINGROOMTEMPERATURESTORAGEOFDPPHCLEARANCE,CLEARANCEOFOH,ABTSCLEARANCE,REDUCINGPOWER,SUPEROXYGENANIONCLEARANCE,INHIBITLINOLEICACIDLIPIDPEROXI
5、DATIONACTIVITYDETERMINATION,THERESULTSOFANALYSISSHOWEDTHATBTHEVERYPROCESSINGEFFECTIVELYDELAYTHECHERRYFRUITLOSSOFANTIOXIDANTS,WHICHISSIGNIFICANTINDICATORSHAVECLEARANCEOFDPPHANDABTSCLEARANCE,INHIBITLINOLEICACIDLIPIDPEROXIDATION100MG/LBTHTREATMENTWORKSBESTKEYWORDSCHERRYBTHANTIOXIDANTACTIVITY采后BTH处理对樱桃贮
6、藏期间抗氧化活性的影响22前言樱桃为蔷薇科ROSACEAE李属PRUNAS樱桃亚属植物，是我国北方地区的早熟水果，果形圆中略扁，平视角度似心形，果表红中带翠、光鲜诱人，果肉肥厚饱满，口感酸甜适中、脆中带韧，此外，拉宾斯1大樱桃营养价值如维生素、糖分、蛋白质，以及铁、磷、钙、钾都要比一般樱桃高，按季节性食用樱桃能有效对人体健脾开胃、平肝去火，提高免疫力以及防癌等奇效，果肉中含多项微量元素2营养价值很高，从而深受广大消费者的欢迎。樱桃营养丰富，所含蛋白质、糖、磷、胡萝卜素、维生素C等多种营养物质3，尤其是铁的含量，每百克高达59毫克，比苹果420至30倍，维生素A的含量比苹果、桔子、葡萄高45倍，
7、所以食用樱桃具有促进血红蛋白再生及防癌的功效。在果蔬贮藏期间，樱桃的风味物质以及抗氧化成分在逐渐流失，总体抗氧化能力在急速下降，导致扰乱和干扰正常的细胞组织代谢，从而使产品品质和抗病性受到严重影响。但由于缺乏必要的冷藏设备和采后处理措施，果实采后常温贮藏过程中果皮极腐烂，肉质软化而使商品性降低，从而影响到樱桃产业的发展。因此，研究樱桃在贮藏期各项指标的变化，尤其是抗氧化成分的变化，对提高樱桃的商品价值具有重要的作用5。BTH苯丙噻重氮是一些人工合成的化合物，具有诱导植物产生系统性获得抗性反应SAR的作用6,7,8。有研究表明，用BTH处理整株植物、植物叶片或种子等均可有效活化植物的抗病防御反应
8、，保护作物免受病毒、细菌和真菌等病原物的侵害9,10。然而，BTH对果蔬产品采后抗氧化作用的研究还未见任何报道。目前涂膜处理各种果实是国内最常用的一种方法。涂膜处理是在果实表面形成一层薄膜，大樱桃果实可用N,O,羧甲基壳聚糖涂膜贮藏保鲜10天11。涂膜能够抵制果实气体交换，降低呼吸强度，从而减少其营养物质的消耗，减少水分蒸发造成的损失，使果实外表饱满新鲜硬度较高。1甲基环丙烯1METHYLCYCLOPROPENE，LMCP是近年来推荐的一种新型乙烯受体抑制剂，可与细胞膜上乙烯受体优先发生不可逆的结合，致使乙烯信号传导受阻，达到延缓后熟、延长贮藏期和提高贮藏品质的目的12。其它用于樱桃保鲜的化学
9、药剂有SO2、脱氧乙酸、抑霉唑等杀菌剂，被处理的果实贮藏效果也好于对照果实，用这些杀菌剂处理可显著地减少果实表面的霉菌和酵母菌数量，抑制真菌腐败，从而起到较好的保鲜作用13。虽然国内外对樱桃采后生理及保鲜技术进行了较广泛地研究，但到目前为止，仍然有许多问题未能解决。在樱桃保鲜方法中，气调保鲜法和减压保鲜法投资较大14，保鲜采后BTH处理对樱桃贮藏期间抗氧化活性的影响33费用高；化学保鲜剂处理会使果实中残留相应的化学毒物；生物保鲜剂具有无毒、无害、无污染等特点，是现代保鲜技术的发展方向，然而由于与生产实际应用还存在一定距离、推广性较差以及产品性能不稳定等问题，还有待继续研究。目前，生产上还是以低
10、温冷藏作为主要的贮藏保鲜手段。因此，研究低温条件下配合不同药剂和包装处理对甜樱桃果实生理与病理、品质和贮藏性的影响具有重要的应用前景15，16。本实验以樱桃为试材，采用BTH处理，分析抗氧化相关指标变化的规律，建立这些抗氧化相关指标与抗氧化能力之间的关系，旨在揭示BTH处理对樱桃果实抗氧化活性影响的机理，从而为延长樱桃保质期，提供新的理论依据和技术支持。对保护抗氧化成分和流通品质，具有良好的应用前景。1材料与方法11材料111樱桃采自甘肃省天水市，采收当天运抵实验室进行处理；品种为拉宾斯112试剂BTH（先正达公司惠赠,有效成分50）、1HCL、甲醇、6的偏磷酸、NA2HPO47H20、NAH
11、2PO4H2O、EDTA、NA2HPO4、NADPH、乙烯吡啶、液氮、TBS。113仪器镊子、刀、研钵、离心管、水浴箱、紫外分光光度计（UV2450型，日本岛津分析仪器有限公司）、离心机H1850R型，长沙湘仪离心机仪器有限公司、电子天平AL204型，上海梅特勒托利多仪器有限公司、电冰箱海尔BCD539WF型，青岛海尔股份有限公司。12处理121BTH溶液的浸泡挑选成熟度、大小基本一致，无机械损伤和病虫害的果实随机分成四份。去离子水分别配制0、50MG/L、100MG/L、150MG/L3种质量浓度的BTH溶液后分别浸泡10MIN。取出后自然晾干，装入厚度为003MM的低密度聚乙烯薄膜塑料袋，
12、常温放置待用。122取样参照BI等12的方法。处理样品于处理后于0、2、4、6D取皮下13MM处果肉组织3G，铝箔纸包裹，液氮冷冻，在80超低温冰箱中保存待用。每个处理每次取采后BTH处理对樱桃贮藏期间抗氧化活性的影响44样用20个果实。123数据处理统计用EXCEL2003软件计算标准误差并制图；用SPSS160软件进行DUNCANS多重差异显著分析。13测定方法131清除DPPH自由基的能力测定参照陆占国等（2006）方法。DPPH在有机溶剂中是一种稳定的自由基，其结构中含有3个苯环，1个氮原子上有1个孤对电子，呈紫色，在517NM有强吸收。有自由基清除剂存在时，DPPH的单电子被配对而使
13、其颜色变浅，在最大吸收波长处的吸光度变小，而且这种颜色变浅的程度与配对电子数是成化学剂量关系的,因此可用于检测自由基的清除情况，从而评价实验样品的抗氧化能力。取35ML浓度为L104MOLL的DPPH溶液和02ML样品液加入比色管中，放置30MIN测定517NM波长下的吸光度A；取35ML无水乙醇和02ML样品液加入比色管中，放置30MIN测定517NM波长下的吸光度A1；取35ML浓度为1104MOLL的DPPH溶液和02ML无水乙醇，放置30MIN测定517NM波长下的吸光度A0；参比为35ML无水乙醇和02ML水的混合液。重复三次，根据下式计算DPPH自由基的清除率清除率1AA1/A01
14、00式中，A为DPPH样液的吸光度，A1为无水乙醇样液的吸光度，A0为DPPH无水乙醇的吸光度132清除OH的测定参照刘骏等（2005）方法。通过FENTON18,19反应产生OH，水杨酸捕获OH产生有色物质，该物质在510NM有特征吸收，通过测定水杨酸捕获OH所得到的产物，确定OH的清除率。向试管中加入06ML蒸馏水，FESO4溶液200ML，水杨酸一乙醇150ML，最后加H202003010ML启动反应，振荡混合，在波长510NM处测定其吸光度值向试管中加入樱桃提取液溶液06ML，FESO4溶液200ML，水杨酸乙醇150ML，最后加H202003010ML启动反应，振荡混合，水浴37，保
15、温30MIN，在波长510NM下测量吸光度值并重复三次。自由基清除率计算公式如下清除率A0ASA0100式中，A0为空白管的吸光度，AS为加入自由基清除剂后的吸光度133清除ABTS自由基的测定采后BTH处理对樱桃贮藏期间抗氧化活性的影响55参照DELGADOANDRADE等（2005）方法。配制2MMOL/LABTS溶液，吸取50ML上述溶液与200MLK2S2O8溶液70MMOL/L混合，暗处放置1216H，得到ABTS自由基溶液。用磷酸缓冲液PBS将ABTS自由基溶液稀释至在734NM下吸光度为070002。取01ML溶液，加入19MLABTS自由基溶液，在734NM测其吸光度。按下式公
16、式计算清除率清除率A0A/A0其中A0为ABTS自由基溶液的吸光度，A为加樱桃提取液后的吸光度。134还原能力的测定参照ARDESTANI等（2007）方法。取25ML样品液，加入25ML02MOL/LPBS缓冲液（PH66），25ML1K3FECN6溶液，在50水浴20MIN，迅速冷却。加入25ML10的三氯乙酸溶液，然后振荡静置10MIN。取上清液25ML，分别加入25ML蒸馏水，05ML01FECL3溶液，静置10MIN，在700NM处测定吸光度。平行测定三次，取平均值。135清除超氧阴离子参照王颖等（2009）方法取50MMOL/LTRISHCL缓冲溶液（PH82）200ML，加入07
17、ML樱桃提取液，然后再加入25MMOL/L的邻苯三酚1ML，混匀后25水浴20MIN，在420NM处测吸光度，重复3次，其平均值。按以下公式计算样品对超氧阴离子的清除率。清除率1（A1A2）/A3100A1TRISHCL样品邻苯三酚的吸光度值A2TRISHCL样品的吸光光度值A3TRISHCL邻苯三酚的吸光度值136抑制亚油酸脂质过氧化参照ZAINOLA等（2003）方法。取4ML样品液，加入4LML25亚油酸V/V，8ML磷酸缓冲液PH66，39ML蒸馏水，然后40水浴培养。取上述培养液1ML，加入LML20三氯乙酸，静置20MIN。然后加入2ML03TBA溶液，在沸水中恒温10MIN，取出
18、室温下冷却。3000R/MIN离心20MIN，取上清液在532NM下测定吸光度值。平行测定三次，取平均值。2结果与分析采后BTH处理对樱桃贮藏期间抗氧化活性的影响6621采后BTH处理对樱桃果实常温贮藏期间抗氧化活性的影响211各处理对DPPH自由基清除率的影响图1不同浓度下的BTH处理对DPPH清除率的影响注小写字母AC表示不同处理对DPPH清除率之间差异显著性（P005）在常温贮藏过程中，樱桃果实对DPPH清除率与对照组相比整体呈下降趋势，说明BTH对果实衰老的抑制作用不明显。贮藏第2天时150MG/LBTH处理高于对照组，对照在第4天时达到最大值，50MG/LBTH、100MG/LBTH
19、处理在第2天达到最小值，分别是4771、3991，贮藏第6天时，100MG/LBTH处理达到最大值（4794）。从整体来看100MG/LBTH处理趋于最小值。212各处理对OH清除率的影响采后BTH处理对樱桃贮藏期间抗氧化活性的影响77图2不同浓度下的BTH处理对OH清除率的影响注小写字母AD表示不同处理对OH清除率之间差异显著性（P005）在常温贮藏过程中，对照组趋于降低，但差异不显著，50MG/LBTH处理其清除率逐渐升高，100MG/LBTH和150MG/LBTH处理组先升高后降低。整体各处理组与对照组的差异不显著，第2天时50MG/LBTH处理达到最小值（7969），第4天时100MG
20、/LBTH达到最小值（8489），但与其他处理组相比较效果不显著。213各处理对ABTS自由基清除率的影响图3不同浓度下的BTH处理对ABTS清除率的影响注小写字母AC表示不同处理对ABTS清除率之间差异显著性（P005）在常温贮藏过程中，对照组和50MG/LBTH处理先升高后降低，但50MG/LBTH处理明显高于0天的对照组。100MG/LBTH和150MG/LBTH处理组的清除率逐渐升高，但100MG/LBTH处理与其他组相比明显低于对照组，分别是对照组的513、745、1000，所以100MG/LBTH处理对果实的抗氧化性有显著地抑制作用。214各处理的还原能力测定采后BTH处理对樱桃贮
21、藏期间抗氧化活性的影响88图4不同浓度下的BTH处理对还原能力的影响注小写字母AC表示不同处理对还原能力之间差异显著性（P005）在常温贮藏过程中，对照和100MG/LBTH处理组逐渐升高，第6天时100MG/LBTH处理达到最大值（063），说明100MG/LBTH处理对果实的衰老有显著地抑制作用。50MG/LBTH和150MG/LBTH处理与对照相比差异不显著，基本趋于稳定。215各处理对超氧阴离子清除率的影响图5不同浓度下的BTH处理对超氧阴离子清除率的影响注小写字母AC表示不同处理对超氧阴离子清除率之间差异显著性（P005）采后BTH处理对樱桃贮藏期间抗氧化活性的影响99在常温贮藏过程
22、中，对照、50MG/LBTH和100MG/LBTH处理的总体趋势是先降低后升高，而150MG/LBTH处理组是连续降低，第6天时达到最小值（688）。第2、4天150MG/LBTH处理（7196、5783）明显高于其他处理组，而100MG/LBTH处理在2、4天时的清除率（4684、3314）低于50MG/LBTH和150MG/LBTH处理组，因此100MG/LBTH处理相对优于150MG/LBTH处理组。216各处理对亚油酸脂质过氧化的抑制作用图6不同浓度下的BTH处理对亚油酸脂质过氧化的抑制作用注小写字母AC表示不同处理对抑制亚油酸脂质过氧化之间差异显著性（P005）在常温贮藏过程中，果实
23、中的氧化性物质的含量在逐渐降低，因此吸光度值越低果实的新鲜程度越好，从整体来看对照组和100MG/LBTH处理组先降低后升高，50MG/LBTH处理组先升高后降低，而150MG/LBTH处理组持续降低，并且第2、4天（073，070）高于50MG/LBTH和100MG/LBTH的处理。50MG/LBTH处理组在第2天时达到最小（038），100MG/LBTH处理在第4天达到最小值（046），因此50MG/LBTH和100MG/LBTH处理较显著。3讨论樱桃在贮藏期间，其果实中的抗氧化成分在逐渐流失，总体抗氧化能力在急速下降，因此果实的新鲜程度越高，抗氧化成分含量越高，本实验就是以此为主线贯穿于
24、整个实验过程。据此实验可以看出采后BTH处理对樱桃的抗氧化活性有影响，由以上分析可采后BTH处理对樱桃贮藏期间抗氧化活性的影响1010以看出采后BTH处理对OH清除率的影响不显著。而采后BTH处理对其他抗氧化指标有较显著的影响，其中50MG/LBTH处理对DPPH清除率、ABTS清除率、超氧阴离子清除率、抑制亚油酸脂质过氧化有显著的影响，150MG/LBTH处理对只对DPPH清除率、ABTS清除率、抑制亚油酸脂质过氧化有显著的影响，100MG/LBTH处理对DPPH清除率、还原能力、ABTS清除率、超氧阴离子清除率、抑制亚油酸脂质过氧化有显著的影响。4结论（1）在整个常温贮藏过程中BTH各处理
25、对OH清除率的影响不显著。（2）50MG/LBTH处理、100MG/LBTH处理、150MG/LBTH处理都有效的延缓了樱桃果实的抗氧化成分的流失，其中较显著的指标有DPPH清除率、ABTS清除率、抑制亚油酸脂质过氧化。（3）在不同浓度处理中，其中100MG/LBTH处理只对还原能力有显著的影响。（4）通过差异显著性分析，得出各处理中100MG/LBTH处理的抗氧化活性最好。采后BTH处理对樱桃贮藏期间抗氧化活性的影响1111参考文献1刘坤,韩凤珠,赵岩,于克辉,张琪静甜樱桃新品种“拉宾斯”及其设施栽培技术J北方园艺,200981671682张传来,贾文庆,荆瑞俊,王尚堃,柴立英樱桃品种果实中
26、营养元素含量的光谱测定J河南科技学院学报（自然科学版）2009,37412133张浩玉,张柯,孙卫华我国樱桃深加工开发利用现状J广东农业科学,2011,389804王金英百果樱桃先J农业知识（瓜果菜）2010,8125GRLACHJ,VOLRATHS,KNAUFBEITERG,ETALBENZOTHIADIAZOLE,ANOVELCLASSOFINDUCERSOFSYSTEMICACQUIREDRESISTANCE,ACTIVATESGENEEXPRESSIONANDDISEASERESISTANCEINWHEATJTHEPLANTCELLONLINE,1996,846296436潘永贵,刘新
27、华,黎寿英采后BTH处理对芒果果实活性氧和抗氧化酶活性的影响7王伟,唐文华,周洪友,黄永BTH对厚皮甜瓜抗病性的诱导作用研究J中国农业大学学报,2000,5548528刘敏,彭建清,李建中,张旭辉,陈维信,李雪萍,王泽槐BTH对南山甜桃采后生理和炭疽病的影响中国南方果,2010,39523259ANFOKAGHBENZO1,2,3THIADIAZOLE7CARBOTHIOICACIDSMETHYLESTERINDUCESSYSTEMICRESISTANCEINTOMATOLYCOPERSICONESCULENTUMMILLCVVOLLENDUNGTOCUCUMBERMOSAICVIRUSJCR
28、OPPROTECTION,2000,1940140510黄贞光樱桃生产的现状及发展前景J果业论坛，2003，105611SISLERECETHYLENEBINDINGCOMPONENTSINPLANTSJTHEPLANTHORMONEETHYLENE,1991819912FANX,ARGENTAL,MATTHEISJPINHIBITIONOFETHYLENEACTIONBY1METHYLCYCLOPROPENEPROLONGSSTORAGELIFEOFAPRICOTSJPOSTHARVESTBIOLOGYANDTECHNOLOGY,2000,20213514213刘尊英，曾名勇，董士远1MCP
29、对中国樱桃贮藏效应的初步研究J落叶果树,2005,3714514钟耀广,朱蓓薇樱桃果实采后生理及保鲜研究J北方园艺，20042676815朱向秋,魏建梅,刘长江,王学军,袁军伟甜樱桃采后生理及保鲜研究现状J北方园艺，2003（4）16肖丹草莓和樱桃的贮藏保鲜技术J四川农业科技,200253117刘乐,饶景萍,常晓晓甜樱桃的贮藏保鲜技术J陕西农业科学,2008,54320921018贾之缜,邹建敏,唐孟成比色法测定FENTON反应生成的羟自由基J生物化学与生物物理进展,1996,0218418619徐向荣,王文华,李华斌比色法测定FENTON反应产生的羟自由基及其应用J生物化学与生物物理进展,1999年01期采后BTH处理对樱桃贮藏期间抗氧化活性的影响1212致谢衷心感谢指导教师老师自始至终对我们的指导和支持，从论文的选题到论文初稿的写作以及最后到论文的定稿，毕老师都付出了大量宝贵的时间和心血，他对我孜孜不倦的教诲以及做人做事的方法将对我以后从事任何工作都会产生深远的影响。感谢李海杰和沈科萍学姐在整个实验实施过程中给我的帮助。感谢给我帮助的所有研究生学姐、学长，我不仅从学姐、学长身上学到许多专业知识，也深受他们严谨求实、灵活务实、平等待人的处事哲学所感染，这都将成为我未来生活学习中的宝贵财富。采后BTH处理对樱桃贮藏期间抗氧化活性的影响1313
