1、中国中医药大学本科生毕业论文论 文 题 目 ： 保健粥方有效成分的研究 学 生 姓 名 ： 学 号： 学 院： 专 业 方 向 ： 班 级 ： 指 导 教 师 ： 论文完成日期 ： 毕业论文（设计）诚信声明书本人声明：本人 杨兴宇 （学号： 20061428 ）所提交的毕业论文 保健粥方有效成分的研究 是本人在指导教师 惠秋莎 老师指导下独立研究、写作的成果，论文中所引用他人的无论以何种方式发布的文字、研究成果，均在论文中加以说明；有关教师、同学和其他人员对本文的写作、修订提出过并为我在论文中加以采纳的意见、建议，均已在我的致谢辞中加以说明并深致谢意。论文作者： （签字） 时间： 2011 年
2、 6 月 日指导教师已阅： （签字） 时间： 2011 年 6 月 日毕业论文（设计）版权使用授权书本毕业论文 保健粥方有效成分的研究 是本人 杨兴宇 （学号： 20061428 ）在校期间所完成学业的组成部分，是在指导教师 惠秋莎 老师的指导下独立完成的。因此，本人特授权山东中医药大学药学院可将本毕业论文的全部或部分内容编入山东中医药大学药学院本科生优秀毕业论文集 （非正式出版） 。论文作者： （签字） 时间： 2011 年 6 月 日指导教师已阅： （签字） 时间： 2011 年 6 月 日保健粥方有效成分的研究杨兴宇（2007 级中药学专业 6 班 学号：20061428）摘要 综述了近
3、年来中药口服缓释制剂的研究进展。中药单体化合物中药缓释制剂研究有着广阔的发展前景。关键词 中药；口服缓释制剂【摘要】 保健粥方如下：气虚质 -山药粥方：淮山药、莲子、红枣、粳米目的提高盾叶薯蓣药材的品质。方法通过组织培养，对诱导获得的盾叶薯蓣四倍体株系，进行了试管苗抗氧化酶活性及薯蓣皂苷元含量分析。结果大部分四倍体株系 APX 活性、SOD 和 POD 比活力高于或相近于二倍体株系。经诱导获得的四倍体株系试管苗与对照相比薯蓣皂苷元含量有较大差异，大部分四倍体株系薯蓣皂苷元含量都超过了二倍体株系。结论经诱导获得的四倍体株系在抗氧化酶活性及有效成分含量方面与二倍体表现出明显差异，说明多倍体诱导可以
4、作为盾叶薯蓣优良品种选育的途径。 【关键词】 盾叶薯蓣 四倍体 抗氧化酶活性 薯蓣皂苷元Abstract：ObjectiveTo improve the yield and quality of D. zingibiernsis C.H.Wright . MethodsThe research project of polyploidy breeding by tissue culture was done. The antioxidant enzyme activities and the diosgenin were analyzed in polyploidy lines. Result
5、s The results showed that SOD and POD activities in most of autotetraploid lines were not lower than those of diploid line, furthermore，the content of diosgenin in most induced plantlets was higher than that in control. Conclusion There was difference between autotetraploid and control lines in dios
6、genin content and antioxidant enzyme activities，therefore，inducing autotetraploid can be effective way to breeding the superior varieties.Key words： D. zingibiernsisC.H.Wright. ；Antotetraploid,； Autioxidant enzyme activities； Diosgenin盾叶薯蓣 D. zingibiernsis C.H.Wright.属薯蓣科薯蓣属根状茎，又名黄姜、火头根，其根茎内薯蓣皂素的含量一
7、般为 2%左右，是目前世界上最好的激素类药源植物。同时具有清肺止咳、利湿通淋、通络止痛、解毒消肿的功能，可治肺热咳嗽、湿热淋痛、风湿腰痛、痈肿恶疮、跌打扭伤、蜂螯虫咬；其水溶性甾体皂苷成分对心肌缺血、胸痹、高脂血症等有明显治疗作用。盾叶薯蓣是我国特有资源植物，是世界上薯蓣皂素含量最高的种类，最高单株达到 16.5%，超过了世界王牌墨西哥小穗花薯蓣 15%的纪录。据调查我国 10 个省市都有盾叶薯蓣分布，其中湖北、湖南、陕西、四川分布最为集中，目前在陕西安康地区、湖北郧西地区、湖南安化地区、河南南阳地区都有一定规模的种植面积。实现人工栽培后，虽然解决了皂素供应问题，而原料依旧短缺，主要原因是产量
8、低、皂素含量变化较大，质量难以控制。因此有必要进行品种选育和提纯复壮的工作。鉴于此，笔者利用组织培养技术进行了盾叶薯蓣多倍体的诱导，并对诱导株系进行了抗氧化酶活性及有效成分分析，为最终选育优良品种提供依据。1 材料与仪器1.1 材料生长 2540 d 的盾叶薯蓣四倍体、二倍体试管苗新鲜叶片及根茎1。1.2 仪器和试剂 BECKMAN DU-600 分光光度计，水浴锅，微量加样器。酶提取液， pH 7.5 的 0.05mol/L 的 Tris-HCl 缓冲液，PBS pH(7.0)，0.1 mmol/L EDTA ， 0.1mmol/L H2O2， 0.5 mmol/LASA，丙酮，SOD 试剂
9、盒（购于建成生物试剂研究所）。2 方法2.1 SOD ， POD，APX 活性的测定精密称取盾叶薯蓣试管苗二倍体及其同源四倍体叶片 1.0 g，每份材料加 5ml 预冷的提取缓冲液（pH7.5 的 0.05 mol/L Tris-HCl 缓冲液）及少量石英砂，置于冰浴中研磨后，4冷冻离心机 6 000 r/min 离心 10min，上清液即为酶提取液。SOD 活性按南京建成生物工程研究所试剂盒说明书操作。POD 总活力按文献2的方法进行，酶的比活力用 OD470/ (mgmin)(protein)表示。APX 活性参照文献2的方法，酶活单位定义为每小时氧化 1mol ASA 的酶量为一个酶活单
10、位。2.2 盾叶薯蓣试管苗薯蓣皂苷元含量分析2.2.1 样品制作盾叶薯蓣试管苗在 MS/2+IAA 0.2 mg/L+NAA0.2 mg/L 培养基上诱导生根，待苗长至 3035d 左右，洗净根上的培养基，将根剪掉，在 60下烘干，粉碎，过 60目筛，供含量分析用。2.2.2 薯蓣皂苷元的测定供试品溶液制备3，4：精密称取盾叶薯蓣粉末 0.71.0 g，置于三角瓶中，加 2.0 mol/L 的硫酸 50 ml，在 100水浴锅中水解 4 h，放冷过滤，药渣用蒸馏水洗至中性，60干燥后，用石油醚（6090）50 ml 在 90水浴中索市氏提取 5h，提取液回收至干后用无水乙醇溶解，过滤至 5ml
11、 的容量瓶中，用无水乙醇定容待测定。对照品溶液制备：准确称取薯蓣皂苷元标样 0.001 g，置 2 ml 容量瓶中，用无水乙醇溶解，稀释至刻度，得 0.5 g/l 的标准溶液备用。色谱条件选择5，6：仪器：Agilent 1100 Series。分析条件：Microsorb-MV100 C18 (5m，4.6 mm250 mm )。无水甲醇为流动相，进样量 20 l，流速 0.5 ml/min, 检测波长203 nm, 柱温为室温。样品中薯蓣皂苷元与其它成分达到良好分离（见图 1）。样品含量测定：以上述色谱条件对盾叶薯蓣中薯蓣皂苷元含量进行分析，并计算其含量。3 结果3.1 四倍体与二倍体 S
12、OD，POD ，APX 活性比较盾叶薯蓣二倍体与其同源四倍体各抗氧化酶的比较结果见表 1。由表 1 可以看出，盾叶薯蓣四倍体株系 APX 活性基本上与二倍体相近或略大，其中有 12 个株系比二倍体高；14个四倍体株系 POD 活性均高于二倍体对照株系，平均高出 23.4%，POD 活性最高的株系G2 比对照高出 59%。16 个四倍体株系 SOD 活性均高于二倍体对照。平均高出 48.1%，活性最高的株系 10-10 比对照高出 127%。表 1 四倍体与二倍体 SOD，POD，APX 活性比较（略）3.2 盾叶薯蓣试管苗同源四倍体株系薯蓣皂苷元含量分析对诱导获得的 19 个四倍体株系试管苗的
13、薯蓣皂苷元含量进行了初步分析。结果见表 2，图 24。测定结果显示：19 个盾叶薯蓣四倍体株系中，有 10 个株系的薯蓣皂苷元含量高于二倍体，平均比对照株系高出 30.8%。其中 10-1、12-4、y9、3-1、y24、11-10 ，分别比对照株系高出 75%，50%，50%，33% ，25%，25%。表 2 盾叶薯蓣四倍体株系薯蓣皂苷元含量（略）4 讨论目前，寻找强抗逆性植物，抵御活性氧对植物细胞的损伤越来越受到人们的重视。现已有通过基因扩增，使 SOD 过度表达，产生较强抗逆性的转基因植物。但由于 SOD 降解超氧阴离子产生的 H2O2 同样也是一种活性氧，对植物细胞也有很大伤害，因此单
14、一通过转一种基因并不能达到彻底清除活性氧的目的。SOD 在需氧原核生物和真核生物中广泛存在，是活性氧清除系统中第一个发挥作用的抗氧化酶，也是植物体内氧代谢的关键酶，在保护细胞免受氧化损伤过程中具有十分重要的作用。POD 可清除植物体内的 H2O2，从而使需氧生物体免受 H2O2 的毒害7，APX 被认为叶绿体中清除 H2O2 的关键酶。试验获得的大部分盾叶薯蓣四倍体株系 SOD，POD 和 APX 比活力均高于二倍体，说明这些株系将具有比对照株系更高的抗逆性或抵抗自然灾害的能力。这为植物抗逆性的提高和产量的增加提供一条有效途径；极大的缩短了选育时间，为优良品种的前期筛选提供了新的研究思路；为应
15、用组织培养技术进行优良品种选育提供了新的研究方法。成分分析结果说明大部分四倍体株系薯蓣皂苷元含量超过了对照株系，说明多倍体诱导可以作为盾叶薯蓣优良品种选育的途径，所得株系为进一步选育优良品种提供了有用的育种材料。【 参考文献】1谢彩侠，高山林，秦慧贞，等.盾叶薯蓣同源四倍体的诱导与鉴定J.药物生物技术，2005，12（1）：15.2张志良，翟伟蕾.植物生理学实验指导M. 北京：高等教育出版社，2006：168.3都述虎，夏重道，付铁军，等 穿龙薯蓣总皂苷水解条件的优化J. 中成药，2000，22（9）：608.4王俊，杨克迪，陈 钧. 均匀设计法优选穿山龙的水解工艺条件J.中药材，2002，9
16、：659.5王铁杰， 刘中博，文琪珺，等.RP-HPLC 法测定黄山药和穿龙薯蓣中薯蓣皂苷的含量J.中药材，2005，28 （12）： 1074.6赵景婵，郭治安，成小飞，等. 穿龙薯蓣中薯蓣皂苷元的高效液相色谱法测定J.药物分析杂志，2000，20（1）：27.7Breusegem F V, Slooten L, Stassart J M, et al. Effects of overproduction of tabacco Mn-SOD in maize chloroplasts on foliar tolerance to cold and oxidative stressJ.J Exp Bot, 1999，50(330)：71.
